Las enzimas de restricción cortan el ADN en sitios específicos. Se usan para hacer mapas de restricción, generar fragmentos de ADN para clonar en vectores, y fragmentar ADN para separarlo mediante electroforesis en gel. La electroforesis separa las moléculas basadas en su tamaño aplicando un campo eléctrico a un gel.

1. Tecnología del ADN recombinante
Alejandro Martínez Carballo LACC2

2. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción son
proteínas cuya función es cortar las
hebras de ADN. Se podría decir que
son “tijeras moleculares” que cortan
ADN. Lo hacen en forma específica.
Esto significa que cada enzima
reconoce un sitio particular del ADN,
es decir que reconoce una secuencia
particular de nucleótidos. Esa
secuencia específica para cada
enzima se denomina “sitio de
restricción”. Una vez que la enzima
reconoce estos sitios, se posiciona
sobre la molécula de ADN y corta
dentro o en torno de esa secuencia.
.

3. Acorde a como realizan el corte, las enzimas se
pueden clasificar en:
*Enzimas que generan “extremos romos” (parejos)
*Enzimas que generan “extremos cohesivos” (desparejos). Estos extremos “colgantes”
de simple cadena pueden pegarse con otros extremos de cadena simple que tengan la
secuencia complementaria. Las enzimas encargadas de unir los extremos de ambas
cadenas se denominan ligasas.

4. Usos de las enzimas de restricción
Las enzimas de restricción tienen diferentes aplicaciones que son de gran importancia en
investigaciones en biología molecular y en las técnicas que emplea la biotecnología
moderna:
Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago.

5. Generación de fragmentos para ser clonados en los
vectores apropiados, y crear ADN recombinante.
Se puede cortar una molécula
de ADN con una enzima y, con
el mismo tipo de enzima,
cortar el fragmento de ADN de
interés para clonar. Se unen
con ligasas estas dos
moléculas de ADN, generando
así una molécula de ADN
recombinante. Este vector
recombinante puede usarse
para transformar células que
expresen el gen de interés o
puede usarse simplemente
para tener clonado ese
fragmento de ADN de interés.

6. Fragmentar ADN para separación por electroforesis.
Los fragmentos obtenidos después de la actuación de las distintas enzimas de restricción,
se pueden separar por tamaños mediante la técnica de electroforesis y así estudiar los
distintos fragmentos.

7. Electroforesis
La electroforesis en gel es un grupo de técnicas empleadas por los científicos para
separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o el punto
isoeléctrico.
Se utiliza generalmente con propósitos analíticos, pero puede ser una técnica
preparativa para purificar moléculas parcialmente antes de aplicar espectrometría
de masas, PCR, clonación o secuenciación de ADN.

8. Esto se logra por la diferencia de desplazamiento de las moléculas a lo largo de un gel
sometido a un campo eléctrico. La carga eléctrica sirve como fuerza impulsora que atrae las
moléculas cargadas negativamente hacia el otro extremo del gel que posee carga positiva.
En esta técnica las proteínas sufren un tratamiento por agentes reductores que provocan la
pérdida de las estructuras secundaria . De este modo, la estructura tridimensional de las
proteínas no influye en la electroforesis, y pueden separarse únicamente en función del
tamaño.

9. Bacteriófago Lambda

10. Bacteriófago Lambda:
un operón complejo
Cuando una bacteria es
infectada por una partícula
de fago lambda, dos
posibles situaciones
pueden ocurrir:
(1) el fago puede integrarse al
cromosoma bacteriano
como profago inerte.
(2) el fago puede producir las
enzimas necesarias para la
reproducción, maduración
y lisis celular.

11. Para finalizar, dos enlaces de videos de apoyo para comprender mejor las tecnicas del
ADN recombinante:
http://www.youtube.com/watch?v=QEG8dz7cbnY
http://www.youtube.com/watch?v=6vKLT5mQoBM