1. AGAR CITRATO DE SIMMONS
Este medio diferencial consiste en un medio de cultivo que es capaz de distinguir dos
microorganismos por su crecimiento diferencial en el mismo, usando las propiedades
metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un indicador.
Uso
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de usar
citrato como única fuente de carbono y energía.
Composición
Citrato de sodio 2,0 gr
Cloruro de sodio 5,0 gr
Fosfato dipotásico 1,0 gr
Fosfa to monoamónico 1,0 gr
Sulfato de magnesio 0,2 gr
Azul de bromotimol 0,08 gr
Agar 15,0 gr
Agua Destilada 1 L
Forma de preparación
Disolver por calentamiento hasta ebullición. Ajustar el pH a 7. Distribuir en tubos de 16 x
160 mm a razón de 7 ml. Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Dejar
solidificar con una inclinación que permita obtener un fondo de 2-3 cm y una superficie
inclinada de 4-5 cm.
Procedimiento
Siembra: Estriar la superficie del medio de cultivo.
Incubación: En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24-72 horas. Algunos microorganismos
pueden requerir hasta 7 días de incubación.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato mono amónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato
de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es
cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, El azul de
bromotimol es el indicador de pH, que vira al color Azul en medio alcalino y el agar es el
agente solidificante. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos
Capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono usan Sales de amonio como
única fuente de nitrógeno, con la consiguiente Producción de alcalinidad. El metabolismo
del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del
ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera progresivamente,

2. oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos
orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, Producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción
de citrato permeasa.
Ejemplo
Esta prueba permite diferenciar a las enterobacterias basándose en la utilización del
citrato. Enterobacterias citrato negativas: Escherichia y Shigella. Enterobacterias citrato
positivas: Arizona, Citrobacter, Klebsiella, Salmonella y Serratia.
Resultados
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano
y no hay cambio de color.
BIBLIOGRAFIA
1. tubo izquierdo
agar en estado inicial y
tubos de la derecha
Resultado de agar citrato
 Rodriguez Cavallini Evelyn, Bacteriología General: Principios y Prácticas de
Laboratorio, Editorial Universidad de Costa Rica, 2005, pág. 446, Disponible en:
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se
 Pascual Anderson Maria del rosario, Calderon Vicente y Pascual; Microbiologia
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http//www.britanialab.com/productos/328_hojas_tecnicas_es.pdf Rodriguez
Cavallini Evelyn
 Imagen 1. Disponible en:
httpswww.google.com.mxsearchq=descripcion+del+agar+citrato&source=lnms&tb
m=isch&sa=X&ei=Do77U4CTEMWZyATlv4Ag&ved=0CAYQ_AUoAQ&biw=1366&
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SANDRA CAMILA MOSQUERA SANDOVAL
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA DE POPAYÁN
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
ECOLOGÍA
2014