El documento describe varios medios de cultivo usados en microbiología, incluyendo agar EMB, agar Sabouraud, agar plate count, agar Baird Parker y caldo BHI. Estos medios permiten el aislamiento y cultivo selectivo de bacterias como E. coli, Salmonella, estafilococos y hongos. También permiten realizar pruebas como recuentos de colonias y antibiogramas para evaluar la calidad microbiológica de alimentos, superficies y equipos.

1. MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN EL ÁREA
DE MICROBIOLOGÍA
Luz Adriana Ramirez Caballero
Naina Duran Vaca

2. AGAR EMB
Es utilizado para el
aislamiento selectivo de
bacilos Gram negativos
Permite el crecimiento de todas las
especies de la familia
Enterobacteriaceae.
Organismos capaces de utilizar la
lactosa y/o sacarosa: Está dada
por los indicadores eosina y azul
de metileno.
Muchas cepas de Escherichia coli
y Citrobacter spp. presentan un
característico brillo metálico.
Las cepas que utilizan la lactosa
poseen centro oscuro con periferia
azulada o rosada, mientras que las
que no lo hacen son incoloras

3. AGAR EMB
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm

4. AGAR EMB
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm

5. PETRIFILM E. COLI Y COLIFORMES
Las Placas 3M™ Petrifilm™ para recuento de E. coli y Coliformes
identifican E. coli y otros coliformes con resultados confirmados en
apenas 24 a 48 horas.
http://solutions.3m.com.mx/wps/portal/3M/es_MX/FSD_LA/FoodSafety/product-information/product-
catalog/?PC_Z7_RJH9U5230GUIE0IHTB4RIT0SH6000000_nid=C0WJ62882Vbe29BDXSBJ7Fgl

6. PETRIFILM E. COLI Y COLIFORMES
Contiene los nutrientes del medio bilis rojo violeta (VRB):
Un agente gelificante soluble en agua fría, un indicador de
actividad de la glucuronidasa y un indicador tetrazolio, que facilita
la enumeración de las colonias.
http://solutions.3m.com.mx/wps/portal/3M/es_MX/FSD_LA/FoodSafety/product-information/product-
catalog/?PC_Z7_RJH9U5230GUIE0IHTB4RIT0SH6000000_nid=C0WJ62882Vbe29BDXSBJ7Fgl

7. PETRIFILM E. COLI Y COLIFORMES
1. Preparar la muestra
2. Inocular y distribuir 1 ml de la
muestra sobre la placa PetrifilmMR
3. Incubar a la temperatura
apropiada durante 24 y 48 horas.
4. Colonias de color rojo asociadas
a gas como coliformes y todas las
colonias de color azul asociadas a
gas como E. coli
1. Aumento en la Productividad del
laboratorio, optimización de
recursos y mano de obra.
2. Estandarización de la
metodología, menor variabilidad y
resultados consistentes.
3. Confiabilidad 3M: Aprobadas y
fabricadas bajo normas ISO 9001.

8. AGAR PLATE COUNT
Caseína enzimática hidrolizada: Provee aminoácidos y otros
complejos de sustancias nitrogenadas.
Extracto de levadura: Provee complejo de vitamina B.
Trifenil cloruro de tetrazolio (TTC): Ayuda al reconocimiento de las
colonias de microorganismos debido a la formación del colorante
rojo insoluble (TTC es reducido)
www.marietta.edu

9. RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS
MESOFILOS
METODO DE RECUENTO EN PLACA (SPC): Determina células viables en
un alimento
Método: Recuento
por siembra de
inclusión
Siembra en caja de
Petri vacía
Añade muestra,
añade medio,
homogeniza
Todas las células
forman una colonia y
todas las colonias
nacen de una célula
Grado de
contaminación de
alimento en
cualquier proceso de
producción

10. AGAR PLATE COUNT
Incubar a 35 °C por
24 -48 horas
Contar colonias
Multiplicar por factor de
dilución
Aceptable: 30-300
Ufc/g
www.marietta.edu

11. Excesiva
contaminación de la
materia prima
Deficiente
manipulación
durante el proceso
de elaboración
La posibilidad de
que existan
patógenos para
humanos
La inmediata
alteración del
producto

12. PETRIFILM MESOFILOS
El muestreo de alimentos es simple con las
Placas, están diseñadas para determinar cuentas
totales de bacterias aeróbicas.
Siguiendo un procedimiento sencillo, puede
realizar pruebas anaerobias para bacterias ácido
lácticas en carne procesada y alimentos ácidos
con esta placa.
Las placas para recuento de mesófilos aerobios
están listas para usarse en cualquier momento
para pruebas de producto o proceso o monitoreo
ambiental.

13. Su diseño exclusivo tiene una película cubierta con
nutrientes y agentes gelificantes.
Al utilizar las Placas Petrifilm que ahorran mano de
obra, usted contará con tiempo para monitorear
puntos críticos de control mas frecuentemente.
El resultado final es un mejor control del proceso y
un producto mejorado en calidad.
www.marietta.edu.co

14. RECUENTO DE COLONIAS DE ESPORAS DE
CLOSTRIDIUM SULFITO REDUCTOR
Agar Sulfito Polimixina
Sulfadiazina, SPS
Microroganismos anaerobios
obligados
(Bacillus, Clostridium...)
Crecen a bajos
potenciales redox, y
algunos únicamente
crecerán en ausencia de
oxígeno.
Suelen encontrarse en la
parte interna de los
alimentos no procesados
Presencia: Nos sirve
como indicador de
contaminación telúrica
remota por la presencia
de esporas resistentes.
Tratamientos térmicos:
70-80°C durante 10-15
minutos: destruir las
formas vegetativas y
revivificar tan solo los
esporos.
Al hacer recuento: Una
espora da lugar a una
colonia en el medio de
cultivo.

15. COMPOSICIÓN DEL MEDIO
.
El medio es selectivo para gérmenes sulfito- reductores.
• El sulfito sódico: Por acción sulfito reductora de los Clostridium, se reduce
a sulfuro.
El sulfuro reacciona con el citrato de hierro: Da lugar a sulfuro de hierro,
formando un precipitado negro alrededor de las colonias
• La sulfadiazina sódica es selectiva e inhibe el crecimiento de gérmenes
Gram negativos.
la lecitina de la yema de huevo: halo de precipitación alrededor de la colonia

16. Anaerogen
Incubar a 35° C por 24
horas
Se espera detectar >100 células/g o mL
www.marietta.edu.co

17. AGAR SABORAUD
Utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.
es.wikipedia.org

18. FUNDAMENTO
El pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los
hongos.
Ligeramente inhibitorio para las bacterias.
Gentamicina: Inhibe el crecimiento microorganismos Gram
negativos.
Cloranfenicol: Amplio espectro de acción.

19. OBJETIVO:
Eliminación del riesgo biológico
Buena limpieza y desinfección
Mohos y
Levaduras
Superficie de equipos
Cáscara de huevo
Pulmones de pollitos de 1
díaPenicilium y Aspergillus
es.wikipedia.org

20. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO PARA SALMONELLA
Utilizado para pre enriquecimiento de las
muestras
Se incuba a 42 °C y se pasa a Agar Salmonella
Pasan a 225 ml de
caldo salmonella
2250 de agua más 56.3
g del caldo salmonella y
un suplemento del vial
del caldo
Alcanza para 10

21. AGAR BRILLIANCE SALMONELLA
El extracto de levadura y peptonas: Aporta nutrientes
La lactosa y sacarosa con rojo fenol: Diferencia fermentadores de lactosa o sacarosa (p.
ej. E. coli), de los que no producen ácidos a partir de estos azúcares, como la salmonella
El verde brillante es el agente selectivo para inhibir la flora acompañante
www.solabia.fr

22. AGAR BRILLIANCE SALMONELLA
Incubar a 37 °C por
24 -48 horas
Muestra
Se pesan 25
g
Pasan a 225
ml de caldo
salmonella
• 2250 de agua más 56.3 g del caldo salmonella
y un suplemento del vial del caldo
• Alcanza para 10
Se incuba a 42
°C por 24 horas
Se siembra en agar
Salmonella
(agotamiento)
www.processalimentaire.com

23. www.processalimentaire.com

24. AGAR MAC CONKEY
Peptonas: Aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano.
Lactosa: Hidrato de carbono fermentable.
Las sales biliares y el cristal violeta: Agentes selectivos.
Rojo neutro: Indicador de pH
www.processalimentaire.com

25. AGAR MAC CONKEY
Incubar a 37 °C por
24 -48 horas
Sembrar por
agotamiento
Determinación de
E. coli,
fermentador de
lactosa
www.processalimentaire.com

26. AGAR CETRIMIDE
Aislamiento y identificación de Pseudomonas aeruginosa.
Cetrimida: Detergente catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno
y el fósforo de las células de la flora acompañante
Cloruro de magnesio y el sulfato de potasio: Promueven la formación de piocianina,
pioverdina, piomelanina y fluoresceína de P. aeruginosa.
www.cresa.cat

27. AGAR FLUOROCULT
Peptonas de soya y caseína: Proporciona los nutrientes
necesarios para el desarrollo de los microorganismos aerobios y
anaerobios.
Cloruro de sodio: Mantiene el equilibrio osmótico.
www.cresa.cat

28. AGAR FLUOROCULT
Incubar a 37 °C por
24 -48 horas
www.techno-lab.de

29. CALDO CASOY
Pluri peptona y extracto de carne que constituyen la fuente de
carbono y nitrógeno necesarias para el adecuado desarrollo
bacteriano.
Pre enriquecimiento para E. coli en muestras de control de
calidad de superficies e implementos del laboratorio.
www.fcm.uncu.edu.ar

30. AGAR MUELLER HINTON
Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el
desarrollo microbiano.
www.fcm.uncu.edu.ar

31. AGAR MUELLER HINTON
Toma inoculo de 2-
3 colonias de
interés
Se suspende en
Caldo BHI
0.5 turbidez de
McFarland
Se pasa la
suspensión a agar
Mueller Hinton
Siembra masiva
Colocar sensidiscos
específicos
Incubar a 37 °C por
24 -48 horas
Observar los halos de
sensibilidad
www.fcm.uncu.edu.ar

32. ANTIBIÓTICOS USADOS EN PIMPOLLO
ANTIBIOTICO SENSIBLE INTERMEDIO RESISTENTE
Amoxacilina 18 16-17 15
Ciprofloxacina 21 16-20 15
Eritromicina 18 14-17 13
Fosfomicina 18 14-17 13
Gentamicina 15 13-14 12
Norfloxacina 17 13-16 12
Streptomicina 15 12-14 11
Trimetoprim sulfa 16 11-15 10
Penicilina 29 20-27 19
Pimpollo S.A.S

33. PREMI TEST
Determinación de antibióticos en carnes
partnerlab.ru

34. Detecta
antibióticos
En carne,
huevos,
pescado,
piensos, y la
orina con los
kits Premi®
Test rápidos
Usando la pipeta,
se añade 100 ul
de la muestra a
una ampolla, que
se incuba a 65 °C
en baño maría
Color amarillo:
Prueba negativa
Color morado:
Prueba positiva
Prueba de
Indol: Rompe
el indol del ami
noácido triptóf
ano

35. TUBOS DE ENSAYO DURHAM
Se utilizan: Para determinar la
producción de gases de
microorganismos.
Determinación de E. coli,
indicadores:
Turbidez
Presencia de gas
Florescencia (luz ultravioleta)
Calidad: Furgones, superficies
y equipos.
blogdelorenna. com

36. AGAR SANGRE
El cloruro de sodio: Permite el balance osmótico.
La infusión de musculo de corazón y la peptona: Otorgan un alto
valor nutritivo.
www.sanidadanimal.info

37. AGAR SANGRE
Incubar a 37 °C por
24 -48 horasSe inocula la muestra
por agotamiento
Determinación de especies de
Staphylococcus y Streptococcus
www.sanidadanimal.info

38. AGAR BAIRD PARKER
Medio selectivo y de diferenciación para el
aislamiento y recuento de Staphylococcus aureus
en alimentos, muestras ambientales y clínicas.
Utiliza la capacidad de los estafilococos de
reducir el telurito a telurio y detectar la
lecitinasa a partir de la lecitina del huevo.
virus.usal.es

39. AGAR BAIRD PARKER
Contiene las fuentes de
carbono y nitrógeno
necesarias para el
crecimiento.
La glicina, el cloruro de litio
y el telurito potásico actúan
como agentes selectivos.
La yema de huevo
constituye el sustrato para
determinar la producción de
lecitinasa y, además, la
actividad de lipasa.
Los estafilococos producen
colonias de color de gris
oscuro a negro debido a la
reducción del telurito
Los estafilococos que
producen lecitinasa
descomponen la yema de
huevo y crean zonas
transparentes alrededor de
las colonias
correspondientes.
Es posible que se forme una
zona de precipitación debido
a la actividad de lipasa.

40. OXIDASA
Enzima que cataliza una reacción
de oxidación/reducción empleando oxígeno molecular (O2) como aceptor de
electrones.
El oxígeno se reduce a agua (H2O) o a peróxido de hidrógeno (H2O2). Las oxidasas
son una subclase de las oxidorreductasas.
La prueba de la oxidasa se utiliza en la identificación de bacterias que producen
citocromo oxidasa (y por lo tanto utiliza oxígeno en la cadena de transporte de
electrones).
Identificar todas las especies de Neisseria (+)
Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.

41. CALDO BHI (INFUSIÓN CEREBRO CORAZÓN)
Usado para cultivar
microorganismos
patógenos y no
patógenos, Bacterias
aerobias y anaerobias
Caldo de cultivo nutritivo:
Infusión de cerebro,
tejido de corazón y
peptonas proporcional
proteínas y otros
nutrientes
El crecimiento en los
tubos es indicado por la
presencia de turbidez

42. CALDO BHI
FORMULA
Infusión Cerebro Corazón a partir de sólidos 6.0
gr
Tejido Animal digerido por Enzimas Pépticas 6.0
gr
Cloruro de Sodio 5.0 gr
Dextrosa 3.0 gr
Gelatina digerida por enzimas pancreáticas 14.5
gr
Fosfato di-sódico 2.5 gr
pH final 7.4+/-0.2
www.medioscultivo.com

43. COAGULASA
Es una proteína producida por
varios microorganismos que
permite la conversión
del fibrinógeno en fibrina.
Se usa para distinguir entre
diferentes tipos
de: Staphylococcus.
Un resultado coagulasa positivo:
Staphylococcus aureus.
La coagulasa reacciona con
la protrombina en la sangre, el
complejo resultante se llama
estafilotrombina, y permite que la
enzima proteasa convierta el
fibrinógeno en fibrina.
Estrechamente relacionada con
la superficie de la bacteria S.
aureus y puede revestir su
superficie con fibrina al entrar en
contacto con la sangre.
La cubierta de fibrina del
estafilococo es capaz de resistir
la fagocitosis haciendo esta
bacteria tenga un factor
de virulencia mayor.
www.medioscultivo.com

44. BATERÍA BIOQUÍMICA
PRUEBA DE INDOL
Pone de manifiesto la presencia de la enzima
Triptofanasa: si está presente degradará el
triptófano y liberará al medio Indol
Revelador: reactivo de
Kovac’s
POSITIVA: Un anillo
rojo en la superficie
NEGATIVA: Medio
amarillo.
Siembra: Caldo con
triptofano

45. TSI
cateterdoblejota.blogspot.com

46. ROJO DE METILO
cateterdoblejota.blogspot.com

47. LIA
La presencia de glucosa en los componentes del LIA
determina:
Reacción de fermentación, produciendo acidificación y cambio
de color del medio a amarillo
www.scielo.org.co
El pH favorable para la reacción de descarboxilacion que
ocurre después, volviendo a su color violeta original la
parte del fondo del tubo

48. BIBLIOGRAFIA
http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_me
dios.html
Negroni, Martha. Microbiologia ed. 2009. Pág 551 a 560
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-
Cultivos_celulares-protocolos.pdf
http://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-
Cultivo
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.ht
m
http://multimedia.3m.com/mws/mediawebserver?mwsId=S
SSSSu7zK1fslxtUmx_v58_9ev7qe17zHvTSevTSeSSSSSS--
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/seminarios/1
%20Medios%20de%20cultivo.pdf