Este documento describe el protocolo para realizar la técnica de diafanización y tinción ósea con alizarina para estudiar la secuencia de aparición de centros de osificación en embriones y fetos bovinos. El protocolo incluye las etapas de fijación, deshidratación, tinción, diafanización y montaje permanente de los especímenes. Se presentan tablas con la edad gestacional y longitud crown-rump en la que aparecen diferentes huesos del cráneo y las extremidades en el periodo embrionario y fetal de

1. Secuencia de aparición de centros de
osificación en embriones y fetos bovinos
mediante la técnica de diafanización y
tinción ósea con alizarina
Carlos A. Mejía G.
Biólogo M. Sc.
Morfología, UdeA

5. PROTOCOLO
Técnica modificada de Dawson
• Etapas
• Fijación
• Deshidratación
• Tinción
• Diafanización

6. Fijación-Evisceración
• Formol 5%
• Especímenes pequeños
• Especímenes grandes
Extraer encéfalo
Extraer bloque toracoabdominal

7. Deshidratación- Coloración
• Etanol al 70% (1 día)
• Etanol al 70% + I2 (1 día)
• Etanol al 70% (1 día)
• KOH al 2% + Alizarina (1 día)

8. Diafanización y
Montaje permanente
• KOH al 2% (1 semana) (2 veces)
• KOH al 2%:NH4OH (v/v) (1:1) (1semana)(2
veces)
• KOH al 2%: NH4OH : GLICERINA (v/v) (1:1:1)
(1semana) (2 veces)
• NH4OH : GLICERINA (v/v) (1:1) (1semana) (2
veces)
• GLICERINA (v/v) (1semana) (2 veces)

10. Día 37

11. Día 40

12. Día 45

13. PERIODO EMBRIONARIO
Estructura ósea Edad (Días) Longitud C-R (cm) OSIFICACION
CLAVICULA 37 2.2 MEMBRANOSA
MANDIBULA 40 2.8 MEMBRANOSA
MAXILAR 45 3.5 MEMBRANOSA
PALATINO 45 3.5 MEMBRANOSA
FRONTAL 45 3.5 MEMBRANOSA
HUMERO 45 3.5 ENDOCONDRAL
FEMUR 45 3.5 ENDOCONDRAL
RADIO 45 3.5 ENDOCONDRAL
ULNA 45 3.5 ENDOCONDRAL
TIBIA 45 3.5 ENDOCONDRAL
FIBULA 45 3.5 ENDOCONDRAL
TEMPORAL 45 3.5 MEMBRANOSA
COSTILLAS 45 3.5 ENDOCONDRAL
NO osificación en CLAVICULA Día 47

14. Día 58

15. Día 60

16. Día 70

17. Día 76

18. Día 90

19. PERIODO FETAL (día 46 a día 90)
Edad: 58 días Longitud C-R: 6cm
ANILLO TIMPANICO ( E) ESCAPULA( E) PARIETAL (M) CIGOMATICO (M)
INCISIVO ( E) NASAL (M) LACRIMAL (M) OCCIPITAL BASILAR (E) APOFISIS
ESTILOIDES (E) OCCIPITAL ESCAMOSA (M) ALAS ESFENOIDES (M)
CUERPO VERTEBRAL C2 hasta L5 (E) ARCOS VERTEBRALES C1 hasta L2(E)
ILION (E) METACARPOS(E) METATARSOS (E) FALANGES DISTALES (E)
Edad: 60 días Longitud C-R: 7cm
ISQUION 50 7 (E) CUERPO ESFENOIDES (E)
Edad: 70 días Longitud C-R: 10.5cm
VOMERONASAL(M) FALANGE PROXIMAL (E)
Edad: 76 días Longitud C-R: 13cm
FALANGE MEDIA (E)
Edad: 90 días Longitud C-R: 14.5cm
CALCANEO (E) ESTERNEBRAS E1 A E5 (E)

30. Secuencia de aparición de centros de osificascion en la cabeza de bovinos

37. 1………………………… 2…………………………….. 3……………………………..
4. …………………………… 5……………………………… 6………………………………
Secuencia de aparición de centros de osificación en
las extremidades de los bovinos.

39. BIBLIOGRAFÍA
• Dawson, A. B. 1926. A note on the staining of the
skeleton of cleared specimens with alizarin red S.
Stain Tech., 1: 123-124.
• Barone R. (1976): Anatomie Comparée des
Mammifères Domestiques. Tome I: Atlas y texto.
Ostéologie. Ed. Vigot Fréres
• Mejía, C.A 1985. Observaciones sobre el
desarrollo del sistema esquelético en los
humanos durante las primeras 20 semanas de
gestación. Revista Actualidades Biológicas

40. Muchas gracias!!!
http://www.udea.edu.co/portal/page/portal/portal/A.InformacionInstitucional/H.Unida
desAcademicas/A.Facultades/Medicina/D.Departamentos/Morfologia?_piref359_39176
10_359_3917529_3917529.tabstring=LaboratorioTecnicasMorfologicas
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