1. Medios de Contraste para
Microscopía Electrónica.
SALES DE PLOMO
Universidad de Chile
Escuela de Tecnología médica
Microscopía Electrónica 2014
Integrantes:
Rosario Lincopán
Francisco Martell M.

2. Plomo.
Corresponde a
un metal pesado.
Símbolo
Pb
Número atómico
82
Peso atómico
207,2 g/mol
Densidad
11,7 g/mol
Estructura
Cristalina.
Punto de fusión
327°C
Punto de
ebullición
1749°C

3. Tipos de Contraste en MET.
Las sales de Plomo se utilizan para la realización de
contraste positivo en cortes.
El plomo contrasta:
 Glicógeno (independiente de la fijación con glutaraldehído
u osmio).
 Ribosomas (RNA y proteínas).
 Nucléolos (RNA y proteínas).
 Membranas (en muestras post-fijadas con OsO₄).
El plomo intensifica el contraste de las sales de Uranilo.

4. Sales de Plomo utilizadas.
Característica Acetato de
Plomo (II)
Citrato de Plomo Nitrato de Plomo
(II)
Molécula
PM 325.29 g/mol 1053,82g/mol 331.21 g/mol
Punto de fusión 75°C - 290°C
Solubilidad en: Agua y glicerina Poco soluble en agua Agua alcalina (con
NaOH)
Apariencia Cristales blancos Polvo cristalino blanco Cristales blancos

5. El plomo en la MET.
1958 Watson utiliza por primera vez el contraste
con plomo en cortes ultrafinos de tejidos biológicos.
Este contraste se utiliza por contacto en forma de
hidróxido de plomo a pH alto.
El problema era que el plomo en contacto con el
CO2 del aire precipita, generándose carbonato de
plomo.

6. El plomo en la MET.
En 1963 Reynolds implementa el uso del citrato de
plomo a un pH alto (12).
Citrato de Plomo – Reynolds, 1963.
Nitrato de Plomo 1,33g
Citrato de Sodio 1,76g
Agua bidestilada 30 ml
NaOH 1N 8 ml
pH = 12,0

7. Protocolo de Reynolds (1963).

8. El plomo en la MET.
En 1965 Venable y Coggeshall modifican la técnica
de Reynolds, reduciendo la cantidad de plomo y
tiempo utilizado.
Citrato de Plomo – Venable & Coggeshall, 1965
 Agua bidestilada 10 ml
 Citrato de Plomo 0,04g
 NaOH 10N 0,1 ml
NaOH recién preparado y libre de CO2

9. Interacciones Químicas.
La interacción entre el plomo, y las células y/o tejidos,
ha sido ampliamente estudiado llegando a la
conclusión que este se relaciona mediante uniones
electroestáticas y puentes de hidrógeno.
En solución las sales de plomo se disocian formando:
 Iones (cationes) bivalentes.
 Hidróxidos de plomo complejos con carga positiva (Reynolds).
 Hidróxidos de plomo complejos con carga negativa (Karnowsky).

10. Interacciones Químicas.
A partir de sales de plomo bivalentes, se producen en
solución acuosa sales “básicas” de forma Pb(OH)2PbX2.
La sal catiónica resultante de esta disociación presenta
mayor afinidad por las estructuras tisulares y/o celulares,
que por el quelante (citrato). Estas estructuras
corresponden a grupos químicos como cisteínas (SH) o
grupos pirofosfatos u ortofosfatos (PO4).

11. Interacciones Químicas.
El NaOH utilizado en las técnicas mencionadas
previamente posee 2 funciones importantes:
 Aumentar el pH de la solución contrastante, permitiendo la
disolución de las sales de plomo.
 Capturar las moléculas de CO2 ambientales que podrían
interferir con el proceso de tinción y el almacenaje de las sales
de plomo.
Se postula que la unión entre glucosa y plomo no es de
carácter iónica, sino por la formación de complejos gluco-plúmbicos
unidos a través de puentes de hidrógeno.

12. Contraste con Sales de Plomo.

13. Contraste con Sales de Plomo.

14. Toxicidad del Plomo.
El plomo es una sustancia tóxica que se va acumulando afectando a
diversos sistemas del organismo.
El plomo se distribuye por el organismo hasta alcanzar el cerebro, el
hígado, los riñones y los huesos y se deposita en dientes y huesos, donde
se va acumulando con el paso del tiempo.
No existe un nivel de exposición al plomo que pueda considerarse seguro.
La intoxicación (saturnismo) por plomo es totalmente prevenible.

15. Daños al organismo.
 Irritación local.
 Abrasión.
 Irritación, rojez y dolor local.
 Absorción envenenamiento

16. Daños al organismo.
VENENO
 Dolor, espasmos
abdominales, náuseas,
vómitos.
 “Línea del plomo” en las
encías
 Irritación de los bronquios,
alvéolos.
 Absorción al punto de pasar
a la sangre.
 Dolor en el pecho.

17. Precauciones en la preparación de soluciones contrastantes.
Utilizar antiparras, guantes y mascarillas con filtro.
Usar campana de extracción de gases.
Preparar las soluciones en recipientes de plástico en
lugar de vidrio.
Evitar respirar cerca de la solución y el contacto con
el CO2 ambiental (formación de PbCO3).

18. Eliminación de soluciones.
Eliminar junto a otras soluciones
contrastantes en botellas de vidrio, enviar a
bioseguridad con rotulo especifico, para su
neutralización.
El rotulo debe precisar el reactivo, la
concentración de la solución, el laboratorio
que envía la solución.

19. Artefactos de Técnica.

20. Artefactos de Técnica.

21. Artefactos de Técnica.
¿Cómo evitarlos?
 Precauciones en la preparación, almacenamiento,
concentración y pH de la solución.
¿Cómo removerlos?
 Solución acuosa de acetato de uranilo 2% por 2-8 minutos a
temperatura ambiente.
 Solución acuosa de ácido acético 10% por 1-5 min

22. Artefactos de Técnica.

23. Referencias.
Arvid B. Maunsbach, Björn A. Afzelius. Biomedical Electron
Microscopy: Illustrated Methods and Interpretations.
Chapter 9, pag 207 to 227 (1999)
Reynolds, Edward S., The use of lead citrate at high pH as
an electron-opaque stain in electron microscopy.
Department of Anatomy, Harvard Medical School, Boston.
(1962)
Bozzola, John J. Russell, Lonnie D. Electron Microscopy:
Principles and Techniques for Biologists. Jones & Bartlett
Publishers. Inc, Canada. Chapter 19 Pag 470 (1999)
Hayat, MA. Principles and Techniques of Electron
Microscopy, Biological Applications. Fourth edition.
Cambridge University Press ,Pag 356 (2000)
Safety Datasheets.

24. Contraste glicógeno.
Al MET se observa:
 Forma alfa: rosetas o agrupaciones de partículas beta (60 a
250 nm de diámetro)
 Forma beta: partículas libres o formadoras de rosetas (20 a
40 nm de diámetro)

25. Contraste glicógeno.

26. Contraste glicógeno.