Tinción de contraste para Microscopia Electrónica. Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Laboratorio de Morfofisiología 2602

1. Tinciones en Histología:Tinción de Hidróxido de Plomo Alcalino. Domínguez Villa Francisco X.Gama Brambila Rodrigo A.Núñez Luna Isboset G.Grupo 2602Equipo 10. Universidad Nacional Autónoma de México.Facultad de Estudios Superiores CuautitlánLaboratorio de Morfofisiología

2. Generalidades y Fundamento Provee de un alto contraste al tejido. [Tinción negativa] Contrarresta los problemas de contraste en la utilización de resinas epóxicas. Es una solución que en presencia del dióxido de carbono , forma carbonato de plomo, generando sales indeseables. Ventajas Desventajas

3. Técnica de preparación. Solución: Preparar una solución al 1 % de hidróxido de plomo. Mantener agitación por 2 minutos. Filtrar la solución y colocarla en un tubo de ensaye. En cada tubo se coloca una pequeña capa de aceite mineral para protegerlo del aire. Si la solución se torna turbia, adicionar 2 a 3 gotas de hidróxido de sodio al 40%.

4. Metodología Se lleva a cabo en una caja de petri grande que contiene una capa de 1.5cm de cera de dentista. En el centro se corta una zona de cera de 5cm de diámetro que se llena con pastillas de NaOH para absorber el CO2. En el resto de la superficie se preparan pozos separados 2 ó 3 cm, el fondo de cada pozo se tapa con un poco de papel para lente. La rejilla unida al corte que se quiere teñir y se mantiene abajo mientras se llena el borde hasta el fondo con colorante de plomo.. Luego se pone un cubreobjeto sobre el pozo y se coloca la tapa de la caja de petri. Se deja actuar el colorante por 5 min. La rejilla se lava en agua destilada (20 inmersiones) empleando un vaso adicional por rejilla a lavar. La rejilla se pone sobre papel filtro y se deja secar. Los pozos de la caja de tinción se limpian retirando el exceso de líquido con una pipeta Pasteur.

5. Aplicación El hidróxido de plomo reacciona con el osmio reducido en los tejidos comportándose como un colorante general. En los tejidos fijados con tetraóxido de osmio, el plomo tiñe las membranas celulares, al combinarse con el óxido de plomo. Tiñe además los carbohidratos, producto quizás de la quelación del plomo por los abudantes grupos hidroxilo.

6. Ejemplo de tinción con hidróxido de plomo. Fig. 1. Tumor mamario de ratón

7. Referencias. FELDMAN, G.D. (1962) A method of staining thin sections with lead hydroxide for precipitate-free sections. Disponible en línea: http://jcb.rupress.org/content/15/3/592.full.pdf [Consulta: 7/IV/2010] MONTUENGA, B.L. (2009). Técnicas en Histología y Biología Celular. Disponible en línea: http://books.google.com.mx/books?id=EwbAJcs0ZGoC&pg=PA80&dq=tinciones+histologicas&cd=4#v=onepage&q=hidr%C3%B3xido%20de%20plomo&f=false [Consulta 08/IV/2020] MATTHEW, J.L.; et al. (1977). Métodos de laboratorio. Volumen II. Segunda Edición. Interamericana S.A. de C.V. México, D.F. pp 1165-6.