endodoncia

1. ALUMNA: M.C.D. Marivy Esparza Monreal.
DOCENTE: M.E.M.E. Georgina Y. Rangel
UNIVERSIDAD CUAUHTÉMOC
CAMPUS AGUASCALIENTES

2. OBJETIVO
Evaluar las comunidades bacterianas de las
obturaciones de los conductos radiculares
intrarradiculares, la biopelícula extraradicular y las
lesiones inflamatorias correspondientes de dientes
con periodontitis apical persistente mediante el uso
de una secuenciación Illumina de alto rendimiento.

3. INTRODUCCIÓN
Persistencia de la
periodontitis apical
De conductos radiculares apicales
y las regiones extraradiculares, son
un factor importante que afecta
las infecciones apicales
persistentes
10-20% La biopelícula bacteriana
En la superficie del
cemento desde la punta de la
raíz hasta la coronal, se
detectó en el 80-100% de
los tx de conducto
considerados como fracaso
No se controla fácilmente:
-Preparación
-Desinfección convencional
Biopelícula
extraradicular

4. Población de px y
examen clínico
• 10 muestras (8 px) con
periodontitis apical persistente.
• Tx de conducto y ReTx más de 1
año, con áreas radiolúcidas
periapicales y obturación y
restauración satisfactorias.
• Examinación mediante rayos X y
CBCT (obturación
MATERIALES Y MÉTODOS

5. Recolección de muestra
Todas las muestras se tomaron de:
 Las obturaciones del conducto radicular
 La superficie del extremo de la raíz y
 Las lesiones blandas periapicales
MATERIALES Y MÉTODOS
Comparaciones de diversidades alfa de muestras recolectadas del conducto radicular, biopelícula
extraradicular y lesiones periapicales. (A) diagrama esquemático del muestreo; (B) comparación del
índice de Shannon; (C) Comparación de OTU observadas.
•Cx: Enjuague con clorhexidina al 0,12%
•Se levantó un colgajo mucoperióstico.
•Recolección de muestras de tejido perióstico con curetas y
conos de papel.
•Las lesiones de periodontitis apical se enuclearon (cureta)
y se colocaron en un tubo de solución tamponada con
fosfato (PBS) y se congelaron a -20 °C.
•Los 3 mm apicales se lavaron con solución salina estéril
(sangre).
•Raspó la superficie del cemento (2 a 3 mm) y se colocaron
inmediatamente en tubos que contenían PBS estéril y luego
se congelaron a -20 °C.
•Resección de ápice. Las obturaciones del conducto
radicular se curetearon y se colocaron en tubos que
contenían PBS estéril y luego se congelaron a -20 °C.
•Preparación retrógrada C/ biocerámico para la obturación
•3mm se colocaron en tubos EP que contenían PBS estéril
y luego se congelaron en un a -20 °C.

6. Extracción de ADN y secuenciación del gen 16S rRNA
1. El ADN de las muestras se extrajo y purificó según el protocolo
del QIAamp DNA Mini Kit, luego se almacenó a -20 °C.
2. Se realizó la secuenciación Illumina Hiseq 2500.
3. Las reacciones de PCR utilizaron los cebadores especiales, 515F
y 806R.
4. La amplificación por PCR se realizó en reacciones de 30 µL que
contenían 15 µL mezcla maestra de PCR de alta fidelidad.
5. Las condiciones de temperatura fueron desnaturalización inicial
a 98°C, alternando temperaturas.
6. Todos los productos de PCR se analizaron y confirmaron
mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%. Utilizando el
fluorómetro QuantiFluor, se eligieron muestras con la tira principal
brillante entre 400 y 450 pb.
MATERIALES Y MÉTODOS

7. Resultados
Distribución de OTU en muestras recolectadas del conducto radicular, biopelícula extraradicular y lesiones periapicales. (A) el diagrama de Venn indica las OTU compartidas/únicas en muestras del
conducto radicular, biopelícula extraradicular y lesiones periapicales; (B) comparación de diversidades beta entre muestras dentro de cada grupo. Los valores P se calcularon utilizando la prueba t
de Student.
Se detectaron proteobacteria, firmicutes,
bacteroidetes y actinobacteria en todas las
muestras, con una abundancia relativa media
de: 31,5%, 20,9%, 13,2% y 10,5%,
respectivamente.
Representan el microbioma central de las
infecciones extrarradiculares e
intraradiculares asociadas con la
periodontitis apical persistente.

8. DISCUSIÓN
Sin tractos sinusales se
caracterizaron
por microbacterium y enterococcus
Streptococcus se detectó en
infecciones intrarradiculares y
extrarradiculares, especulamos
que pueden sobrevivir en
condiciones nutricionales adversas.
En el presente estudio, Porphyro
monas , Eubacterium , Treponema ,
Phocaeicola , Tannerella y Prevotell
a se asociaron más con infecciones
del tracto sinusal.
Porphyromonas , Eubacterium , Tre
ponema , Phocaeicola , etc. se
enriquecieron significativamente en
las muestras con tractos sinusales.
Proteobacteria , Firmicutes y Bacter
oidetes fueron reportados
previamente, como los filos más
dominantes en infecciones
primarias y persistentes Siqueira et
al., 2011
A nivel de género,
Fusobacterium con una abundancia
relativa media de 9,8% es el género
más abundante
Fusobacterium nucleatum fue la
especie más prevalente

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Se detectaron diversas bacterias tanto
en infecciones intrarradiculares como
extrarradiculares asociadas con
periodontitis apical persistente.
La aparición del tracto sinusal puede
estar relacionada con las comunidades
bacterianas extraradiculares.
Conclusiones