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1. UNIVERSIDAD ESTATAL DE MILAGRO
UNIDAD ACADÉMICA CIENCIAS DE LA SALUD Y SERVICIO SOCIAL
CARRERA DE ENFERMERÍA
CIENCIAS
DE LA SALUD

2. UNIVERSIDAD ESTATAL DE MILAGRO
UNIDAD ACADÉMICA CIENCIAS DE LA SALUD Y SERVICIO SOCIAL
CARRERA DE ENFERMERÍA
DOCENTE INVESTIGADOR AGREGADO 2 ACREDITADO
SENESCYT REGINV-18-03046.
https://orcid.org/0000-0002-2611-2428
Investigador: Web of Science ID AAO-6264-2020
Investigador: Pubmed PMID: 31543509
Investigador: publons.com / p / 32080928 /
Licenciada en Laboratorio Clínico con Énfasis en Salud Pública
Diplomado en Gerencia de Salud
Diplomado en Epidemiología
Diplomado en Malla Curricular por Competencia
Magister en Salud Pública
Magister en Microbiología Mención Biomédica
PhD (C) Ciencias de la Salud

3. MICROBIOLOGÍA Y
PARASITOLOGÍA
TEMA: 4.- Diagnóstico Microbiologico
UNIDAD 3
BACTERIOLOGÍA

4. SUBTEMAS
• SUBTEMA: 1.- Metodología de laboratorio y recomendaciones para el diagnóstico
microbiológico.
• SUBTEMA: 2.- Toma de muestras para el análisis microbiológico de: orina, líquidos
biológicos, tracto respiratorio, heridas y heces.
• SUBTEMA: 3.- Antibióticos y resistencia a antimicrobianos.
• SUBTEMA: 4.- Practica Nº 12: Pruebas de sensibilidad a antibióticos método de
Kirby-Bauer

5. OBJETIVOS
Conocer las recomendaciones para el
diagnostico, de los diferentes líquidos
biológicos, aislamiento e identificación
bacteriana y la utilidad del antibiograma
para el tratamiento de las infecciones.

6. ACTIVIDAD DE INICIO:
Videos de refuerzo
https://www.youtube.com/watch
?v=aG7Ukqy1e6k
https://youtu.be/zAMwwpCvaO
M
https://youtu.be/GYHf_jjCzaw
ACTIVIDAD DE DESARROLLO:
Análisis sobre los videos,
Clase magistral
ACTIVIDAD DE CONSOLIDACIÓN:
Conclusiones del Docente y
evaluación al estudiante.
Lección virtual en el aula
virtual (moodle)
Estrategias
(Enfoque Metodológico):

7. Laboratorio de Bacteriología
De la Toma de Muestras a la
Identificación del Microorganismo:
Un Reto de Todos los Días
UNIDAD 3
TEMA: 4.- Diagnóstico Microbiológico
SUBTEMA: 1.- Recomendaciones para el Diagnóstico Microbiológico

8. Solicitud de examen
al laboratorio
• Nombre, edad y sexo del paciente
• Si es mujer, indicar la presencia de embarazo.
• Existencia de patología de la vía a analizar
• Método empleado en la recolección de la muestra
• Diagnóstico clínico
• Uso previo de antibióticos
• Hora de obtención de la muestra

10. REQUISITOS DE UNA BUENA MUESTRA
 Muestra representativa del sitio de la infección
 Cantidad suficiente, en el momento adecuado.
 Técnica aséptica.
 Contenedor adecuado y estéril.
 Transporte óptimo al laboratorio.
(tiempo, Tº, medios de transporte)
 Correctamente identificada.
 Solicitud de examen completa con diagnóstico
presuntivo.

11. UNIDAD 3
TEMA: 4.- Diagnóstico Microbiológico
SUBTEMA: 2.- Infecciones. Urinaria, Hematógena, Líquidos Biológicos, Heridas, Heces.
TIPOS DE MUESTRAS
Urocultivos
Hemocultivos
Trácto respiratorio
inferior
Trácto respiratorio
superior

12. TIPOS DE MUESTRAS
Secreción vaginal y uretral
Piel y tejidos blandos
Heces
Líquidos biológicos

13. CONDICIONES AMBIENTALES IDONEAS PARA EL
CRECIMIENTO BACTERIANO
TEMPERATURA
Clasificación Rango Optima
Termófilos 25 - 80 °C 50 - 60 °C
Mesófilos 10 - 45 °C 20 - 40 °C
Psicrófilo -5 - 30 °C 10-20 °C
Ph
Clasificación pH externo pH interno
Acidófilos 1.0 - 5.0 6.5
Neutrófilos 5.5 - 8.5 7.5
Alcalófilos 9.0 - 10.0 9.5

14. TIPOS DE
MUESTRA
Método
Invasivos
Punción supra
púbica
Cateterización
Vesical
Método
No Invasivos
Orina por
recolección
Punta de Catéter
TIPOS DE MUESTRA

15. Identificar si es periférico o central
Examen: HEMOCULTIVO TRADICIONAL
aerobio, anaerobio, hongos
Preparación
paciente:
Afebril
Antes uso de antimicrobianos
Técnica de
recolección:
Antisepsia de piel con OH 70%
Desinfección de tapa con OH 70%
Simultáneos, pero distintos sitios
punción
Material: Frascos de hemocultivo (mínimo 2) OJO
nunca refrigerar los frascos
Transporte: < 2 h, Tº amb.
Cantidad: 3-5 ml niños, OJO SEGÚN PESO
Nota: No escribir en el código de barra

17. LÍQUIDOS BIOLÓGICOS
LIQUIDO CEFALORRAQUÍDEO
LCR POR PUNCIÓN LUMBAR
• - Campos estériles.
• - Guantes estériles.
• - Gasas estériles.
• - Alcohol etílico o isopropílico al
70%.
• - Yodo povidona al 10%.
• -Jeringas de 5-10 ml.
• -Agujas de punción IM.
• -Trócares de punción lumbar varios
MATERIAL
NECESARIO.
https://fundacionannavazquez.wordpress.com/
2007/07/27/puncion-lumbar/

18. Examen: CULTIVO SEMICUANTITATIVO
PUNTA DE CATETER
Preparación
paciente:
Piel y CVC
Antes uso de antimicrobianos
Técnica de
recolección:
Retiro de catéter con
técnica aséptica
Material: Pinzas, tijeras, tubo o frasco estéril
Transporte: Inmediato, Tº amb.
Cantidad: Trozo 6 -7 cm.
Nota: NUNCA ENVIAR EN MEDIO
TRANSPORTE

19. Muestra respiratoria de calidad
• Paciente con tos productiva
• No tenga saliva y sea secreción
respiratoria
• Dar bien instrucciones al paciente
• Si es necesario obtener con ayuda
kinésica
• En contenedor boca ancha y estéril
• OJO: si se solicita cultivo de koch…. Los
bacilos de koch se mueren con la luz UV
Expectoración:

20. Aspirado endotraqueal
 Tubo T estéril
 Indicar si paciente está en
ventilación mecánica “ recuento”
 Bien tapado y en bolsa
 Bien rotulado
 No diluir con suero
Si la muestra es por endoscopia: el transporte
debe ser inmediato
http://www.madrid.org/cs/Satellite?blobcol=urldata&blobheader=applica
tion%2Fpdf&blobkey=id&blobtable=MungoBlobs&blobwhere=135283738
2621&ssbinary=true

21. PIEL- TEJIDOS BLANDOS - HERIDAS
Secreciones siempre en Stuart (celeste)
Realizar asea previo de la zona con suero fisiológico estéril
Frasco (JERINGA SIN AGUJA) (STUART)

22. DEPOSICIONES
 Vigilancia enterococo
– UNICA muestra de deposicion
toma en Stuart
 Coprocultivo corriente
– Se toma en medio Cary blair ( blanco)

23. CLASIFICACIÓN DE LOS
ANTIBIÓTICOS
BETA LACTAMICOS
MECANISMO DE ACCION
La actividad antibacteriana de los beta
lactámicos se debe a la inhibición de la
síntesis de la pared celular bacteriana.
UNIDAD 3
TEMA: 2.- Bacterias Gram negativas
SUBTEMA: 3.- Metodología de laboratorio; Definición de los antibióticos

24. PENICILINAS
Naturales:
•Penicilina G (via oral o intramuscular).
•Penicilina G Sodica o Potasica (endovenosa).
•Penicilina V (via oral).
Penicilinas resistentes a las penicilinasas.
•Meticilina (via parenteral).
•Nafcilina (via parenteral).
•Isoxazolilpenicilinas.
•Cloxacilina (via oral).
•Dicloxacilina (via oral).
•Flucloxacilina (via oral).
Aminopenicilinas.
• Ampicilina (via parenteral).
• Amoxicilina (via oral).
Penicilinas antipseudomonas:
• Carboxipenicilinas e Indanilpenicilinas.
• Indanilcarbenicilina (via oral).
• Ticarcilina (via parenteral).
• Ureidopenicilinas de espectro extendido.
• Azlocilina (via parenteral).
• Mezlocilina (via parenteral).
Piperacilina (via parenteral).

25. CEFALOSPORINAS
De Primera Generación:
•via oral:
•Cefalexina.
•Cefadroxilo.
•via parenteral:
•Cefalotina (EV).
•Cefazolina (EV o IM).
•Cefapirina.
•Cefradina.
De Segunda Generación
• vía oral:
• Cefaclor.
• Cefuroxima.
• Cefprozil.
• Loracarbef.
• via parenteral:
• Cefuroxima.
• Cefamicinas.
• Cefoxitina.
• Cefotetan.
• Cefmetazole.
• Cefamandole.
• Cefocinid.

26. De Tercera Generación
• via oral:
• Cefixima.
• Cefpodoxima.
• Ceftibuten.
• Cefdinir.
• via parenteral:
• Cefotaxima.
• Ceftizoxima.
• Ceftriaxona
• Ceftazidima*
• Cefoperazona*
De Cuarta Generación
• Cefepime.
• Cefpirome.
* Activos Contra Pseudomonas.

27. MONOBACTAMICOS
• Aztreonam.
CARBAPENEMAS
• Imipenem.
• Meropenem
• Ertapenem.
INHIBIDORES DE LAS BETA LACTAMASAS
• Acido clavulánico.
• Sulbactam.
• Tazobactam.

28. MACROLIDOS
ANTIGUOS MACROLIDOS
• Eritromicina.
• Oleandomicina.
• Espiramicina.
NUEVOS MACROLIDOS
• Claritromicina.
• Azitromicina.
• Roxitromicina (farmaco de uso en investigacion).
• Diritromicina.
• Josamicina.
• Miocamicina.
• Midecamicina.

29. • Estreptomicina.
• Dehidroestreptomicina.
• Neomicina.
• Paromomicina.
• Aminosidina.
• Kanamicina.
PRIMERA
GENERACION
• Gentamicina.
• Amikacina.
• Dibekacina.
• Sisomicina.
• Netilmicina.
• Tobramicina.
• Ribostamicina.
• Espectinomicina.
SEGUNDA
GENERACION
AMINOGLUCOCIDOS

30. Metodología de laboratorio
La prueba de sensibilidad
antimicrobiana es una de las
tantas armas con las que
contamos en el laboratorio
para ayudar a los profesionales
en medicina controlar los
procesos infecciosos que se
desarrolla en los pacientes
UNIDAD 3
TEMA: 4.- Diagnóstico Microbiológico
SUBTEMA: 4.- Pruebas de sensibilidad antimicrobiana.

31. HALOS DE INHIBICION
AGENTE
ANTIMICROBIANO
GEN SIGLA POTENCIA RESISTENTE SUSCEPTIBLE
AMIKACINA AK 30 mcg 14 mm 17 mm
AMPICILINA A 10 mcg 13 mm
(28)*(18)H(16)E(23
)Sb
17 mm
(29)*(22)H(17)E(24)Sb
AZTREONAM AZ 30 mcg 15 mm (25)H 22 mm (26)H
CEFADROXILO (1) CPH 30 mcg 14 mm 18 mm
CEFACLOR (2) FAC 30 mcg 14 mm(16)H 18 mm(20)H
CEFALOTINA (1) CF 30 mcg 14 mm 18 mm
CEFAZOLINA (1) CEZ 30 mcg 14 mm 18 mm
CEFAMANDOL (2) CMA 30 mcg 14 mm 18 mm
CEFEPIME (4) CPM 30 mcg 14 mm
(30)N(25)H(21)Sv(2
3)Sb
18 mm (31)N(26)H(24)Sv,Sb

32. La prueba de sensibilidad adquiere una mayor importancia para
algunas especies bacterianas que no tienen una sensibilidad
predecible. Ejemplos claros de este último tipo de microorganismos
son: Staphylococcus sp., Enterococcus sp., Pseudomonas sp. y los
miembros de la familia Enterobacteriaceae

33. Para efectuar las pruebas de sensibilidad, se cuenta
con los siguientes métodos
A. Difusión en agar (Técnica de Bauer & Kirby)
B. Dilución en agar
C. Macrodilución en caldo
D. Microdilución en caldo
E. Epsilon test (E test)
F. Métodos aumatizados
G. Pruebas especiales

34. • Densidad del inóculo mal
estandarizado
• Usar cultivos no puros
• Humedad o sequedad excesiva del
medio de cultivo
• Deterioro de los discos de aplicación.
Errores al
realizar un
Antibiograma

35. CONDICIONES QUIMICAS PARA EL
CRECIMIENTO BACTERIANO
AGUA
PH ADECUADO
MINERALES ESENCIALES
FUENTES DE CARBONO
ENERGIA
NITROGENOS ADECUADOS
VITAMINAS
AMINOACIDOS
QUE LA CELULA NO PUEDE SINTETIZAR Y QUE
DEBEN SER APORTADOS EN EL MEDIO
NUTRIENTES
ESENCIALES
OTROS MICRORGANISMOS NECESITAN
UNIDAD 3
TEMA: 4.- Diagnóstico Microbiológico
SUBTEMA: 5.- Medios de cultivo para el aislamiento e Identificación bacteriana.

36. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
LIQUIDOS
SÓLIDOS
SEMI
SÓLIDOS
No contiene agar, se utilizan para la realización
de Muchas pruebas bioquímicas
Son aquellos en los que la proporción de agar está
siempre por encima del 15% Permiten el
aislamiento, purificación y visualización de las
colonias
POR SU CONSISTENCIA
Su proporción en agar suele ser inferior al 5 % Son
útiles para determinadas pruebas de bioquímica o de
movilidad

37. POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS
NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgánicos e inorgánicos se encuentran
en la naturaleza, Ej. Leche, suero sanguíneo incluso la papa
MEDIOS
SEMISINTETICOS
Parte de su composición corresponde a estratos naturales. Ej.
Levadura, Patata, Sangre, etc. A los que se añade los constituyentes
sintéticos o químicamente definido para el crecimiento microbiano
MEDIOS
SINTETICOS
Son combinaciones sintéticas mas o menos puras y químicamente
definida
MEDIOS
COMPLEJOS
Su composición no está definida, y su materia prima suele ser de
carne de músculo, de corazón , clara o yema de huevo, azúcares,
peptona, etc.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

38. AGAR BASE SANGRE
38
Medio utilizado para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad
de microorganismos, adicionado de sangre es útil para el cultivo de
microorganismos fastidiosos.
COMPOSICION (gr/l)
 20 gr. Extracto de corazón y peptona
 5 gr. Cloruro sódico
 15 gr. Agar agar
 5 gr. Extracto de Levadura
 5 – 10 ml c/100 ml agarAditivo sangre de cordero

39. 39
• La infusión de músculo de
corazón y la peptona de
caseína proporcionan la
fuente de:
 nitrógeno
 carbono
 aminoácidos
 Proteínas
• Este medio está relativamente
libre de azúcares reductores los
cuales interfieren en las
reacciones hemolíticas de
estreptococos.
• El patrón de las reacciones
hemolíticas puede variar
dependiendo del tipo de sangre
utilizada.
• El extracto de levadura provee
vitaminas y aminoácidos
esenciales.
• El cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico y el agar es
usado como agente
solidificante

40. 40
Streptococcus pyogenes
• Objetivo del Agar Sangre
Estudiar y determinación para aislar cultivar y estudiar reacciones hemolíticas de
una amplia variedad de microorganismos fastidiosos patógenos.
Clostridium perfringens

41. 41
 cumple con los requerimientos de la Organización Mundial de la Salud y
está especificado en la FDA. (Administración de Drogas y Alimentos de
los Estados Unidos).
 Este medio es el seleccionado por la NCCLS (Comité nacional de
estándares de laboratorio clínico).
 su bajo contenido de substancias inhibidoras y el crecimiento
satisfactorio que presentan la mayoría de los patógenos no fastidiosos.
Con este medio se han llevado a cabo una gran cantidad de estudios
sobre susceptibilidad antimicrobiana.
AGAR MUELLER HINTON
Medio utilizado para realizar las pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos
aeróbicos por el método de Bauer-Kirby.
 En este medio la infusión de carne y la peptona de
caseína proveen la fuente de nitrógeno, vitaminas,
carbón y aminoácidos.
 El almidón es agregado para absorber cualquier
metabolito tóxico y el agar es adicionado como
agente solidificante.

42. 42
En este medio se aíslan y diferencian bacilos entéricos Gram negativos
fermentadores y no fermentadores de la lactosa.
AGAR MAC CONKEY
El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado
para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos:
 Muestras clínica
 Alimentos
 Agua
 Productos lácteos
 Productos farmacéuticos

43. 43
Fundamento
La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH
alcalino, y este medio ha sido recomendado por
numerosos autores para incrementar la recuperación
de los mismos en materia fecal y otras muestras.
Agua Peptonada Alcalina
Medio de enriquecimiento
utilizado para la búsqueda de
Vibro spp. a partir de muestras
clínicas y de alimentos.

44. 44
Agua Peptonada Alcalina.
SIEMBRA
Heces: suspender 1 g de materia fecal o el contenido del hisopo en 10 ml de agua
peptonada alcalina.
Alimentos: 25 g del alimento en 225 ml de agua peptonada alcalina.
Agua: filtrar por membrana el volumen deseado. Colocar la membrana en un
recipiente conteniendo agua peptonada alcalina
Microorganismos: sembrar una colonia del microorganismo en 10 ml de agua
peptonada alcalina.

45. 45
Resultados Microorganismos Crecimiento
V. cholerae Bueno
V. parahaemolyticus Bueno
V. fluvialis Bueno
V. vulnificus Bueno
Control Negativo Resultado
Medio sin inocular Sin cambio
Incubación Aeróbica, a 35-37 ºC durante 4-6 horas. Luego transferir a
T.C.B.S. Medio.

46. Es utilizado como medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio
cholerae, (Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa).
• El extracto de levadura y las peptonas
proporcionan la fuente de nitrógeno, vitaminas y
aminoácidos.
• El citrato de sodio, el tiosulfato de sodio y la bilis
actúan como agentes inhibidores de
microorganismos Gram positivos y coliformes
dando alcalinidad al medio.
• La sacarosa es el carbohidrato fermentable.
• El cloruro de sodio promueve el crecimiento.
• El tiosulfato de sodio es la fuente de sulfuro y el
citrato de hierro es un indicador para detectar la
producción de H2S.
• El azul de timol y de bromotimol actúan como
indicadores de pH.
• El agar bacteriológico es agregado como agente
solidificante.
TCBS
AGAR TCBS
https://microbiologyinfo.com/thiosulfate-citrate-bile-salts-sucrose-
tcbs-agar-composition-principle-uses-preparation-and-colony-
morphology/

47. 47
Después de 18 a 24 horas de incubación,
la sacarosa es fermentada por los vibrios
quedan colonias de tamaño mediano,
lisas, opacas, de color amarillo
Si las muestras tienen que ser transportadas al laboratorio, se recomienda
utilizar el medio de Cary Blair como medio de transporte V.vulnifucus no
fermenta la sacarosa presentando una coloración verde.
Las muestras no deben ser congeladas. Incubar las placas protegidas de
la luz a 35 ± 2°C durante 18 a 24 horas. Si los resultados son negativos,
reincubar por 24 horas más.

48. 48
CALDO DE SELENITO
PRINCIPIO
 La peptona proporciona el nitrógeno y carbono necesario para el crecimiento.
 La lactosa es la fuente de energía.
 Cuando el Selenito se reduce, alcaliniza el medio y la lactosa al ser fermentada
produce ácido, lo que ayuda a mantener neutro el pH.
 El selenito de sodio inhibe el crecimiento de coliformes y enterococos
principalmente en las 6 a 12 horas de incubación.
 Los fosfatos tiene un efecto regulador de pH.
 La cistina favorece el desarrollo de bacterias del género salmonella.
 El material en estudio se inocula en al caldo de selenito de cistina se incuba de 6
a 12 horas a 35 °C y resembrar en medio de cultivo selectivo de 24 a 48 horas a
35°C
Medio selectivo de enriquecimiento para recuperación de
microorganismos del género Salmonella impidiendo la multiplicación de
la flora asociada a partir de muestras alimenticias

49. 49
También conocido como Agar SS, es utilizado para el aislamiento de especies de
Salmonella y Shigella a partir de muestras clínicas y de alimentos, es una
modificación del Agar Desoxicolato y Citrato descrito por Leifson
AGAR SALMONELLA SHIGUELA
 Tiene un desempeño superior a otros medios para el aislamiento de especies de Salmonella y
Shigella.
 Tiene la ventaja de que puede ser utilizado con inóculos grandes de muestras clínicas en las que
se pretende poner de manifiesto la presencia de especies de Salmonella y Shigella caudill .
 Reportan resultados muy satisfactorios con el uso del Agar SS para el aislamiento de Shigella
Hormaeche.
 En este medio las sales biliares No. 3 y el verde brillante actúan como inhibidores de bacilos Gram
positivos, de la mayoría de bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp., mientras que
permiten el crecimiento de Salmonella spp.
 El tiosulfato de sodio y el citrato férico permiten la detección de la producción de H2S. La lactosa
proporciona la fuente de carbohidratos, el rojo neutro y el verde brillante actúan como
indicadores de pH y el agar es agregado como agente solidificante.

50. AGAR SALMONELLA SHIGUELA
 Las enterobacterias pueden ser diferenciadas en base a su
capacidad de fermentar la lactosa.
 Las especies de Salmonella y Shigella son no
fermentadoras de la lactosa y forman colonias incoloras en
el Agar SS.
 Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro
de hidrógeno desarrollan colonias con centro obscuro.
 E. coli produce colonias de color rosa a rojo y pueden
presentar una zona de precipitado. Las colonias de
Enterobacter aerogenes son de color rosa.
 Citrobacter y Proteus spp. Pueden crecer produciendo
colonias con centros de color gris o negro debido a la
producción de H2S.

51. UNIDAD 3
TEMA: 2.- Bacterias Gram negativas
SUBTEMA: 6.- Práctica No.12 Interpretar la sensibilidad bacteriana.
https://youtu.be/G7VXQ2vwA4M

52. BIBLIOGRAFIA
1. JAWETZ ERNEST. (2010). MICROBIOLOGÍA MÉDICA. : MC GRAW HILL.
2. PRATS GUILLEM. (2005). MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. : PANAMERICANA.
3. PICAZO. (2016). COMPENDIO DE MICROBIOLOGÍA. 2DA.ED. ELSEVIER.
Links
https://www.youtube.com/watch?v=aG7Ukqy1e6k
https://youtu.be/zAMwwpCvaOM
https://youtu.be/GYHf_jjCzaw