Endonucleasas de restriccion.pdf

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
BIOTECNOLOGIA
“Endonucleasas de restricción”
Docente:
Dr. Hébert Hernán Soto Gonzales
Presentado por:
Anco Mena, Cinthia Samanda
Ilo, Moquegua, Perú
2022

INDICE
1. INTRODUCCION ................................................................................................................ 3
2. OBJETIVOS ......................................................................................................................... 3
2.1 Objetivo general............................................................................................................ 3
2.2 Objetivos específicos..................................................................................................... 3
3. Marco teorico ........................................................................................................................ 3
3.1 Enzimas de restricción .................................................................................................. 3
3.2 Importancia en la biología molecular............................................................................ 4
3.3 Tipo de enzimas de restricción...................................................................................... 4
3.3.1 Tipo I y tipo II....................................................................................................... 4
3.3.2 Tipo II.................................................................................................................... 4
3.4 Aplicaciones de las enzimas de restriccion ................................................................... 4
3.5 Tipos de cortes en el ADN............................................................................................ 5
3.5.1 cohesivos o pegajosos ........................................................................................... 5
3.5.2 Abruptos................................................................................................................ 5
3.6 Factores que puedes afectar la actividad enzimática..................................................... 5
3.7 Descripción general de NEB......................................................................................... 6
3.7.1 Biolabs de Nueva Inglaterra.................................................................................. 6
3.7.2 Ciencia básica........................................................................................................ 6
3.8 Recopilación de 30 enzimas de restricción ................................................................... 6
Conclusiones ............................................................................................................................... 37
Bibliografía ................................................................................................................................. 37

1. INTRODUCCION
Las enzimas de restricción se denominan también nucleasas de restricción, endonucleasas
de restricción y en ocasiones restrictasas. Pertenecen a este grupo una gran diversidad de
endodesoxirribonluceasas, descubiertas como enzimas propias de distintas bacterias. Se dispone
hoy comercialmente de un gran número de ellas con elevada especificidad, estabilidad y pureza.
Se descubrieron en los años 60 y su uso en biología molecular empezó en los 70
permitiendo el desarrollo de las tecnologías de ADN recombinante. Las enzimas de restricción
tienen actividad endonucleasa y cortan enlaces fosfodiéster en las dos cadenas del ADN.
Reconocen ciertas secuencias en el ADN. Las enzimas de restricción de Tipo I y III reconocen
una secuencia específica, pero cortan a una distancia variable del sitio de reconocimiento (sitio
de restricción). Las enzimas de restricción de Tipo II reconocen una secuencia específica conocida
como secuencia diana y siempre cortan entre los mismos nucleótidos. De ahí que generen siempre
los mismos fragmentos de restricción. La secuencia diana es de tamaño variable, la mayoría de 4
y 6 nucleótidos, y con frecuencia es parcialmente palindrómica. Algunas enzimas de restricción
cortan generando extremos llamados romos mientras que otras cortan generando extremos
llamados cohesivos.
La importancia de las enzimas de restricción radica en su gran especificidad para
reconocer una secuencia corta de DNA bicatenario e hidrolizar un enlace fosfodiéster en cada
hebra, siempre en la misma posición. Cada enzima se caracteriza, pues, por su sitio o secuencia
de reconocimiento o de restricción, o secuencia diana. Los fragmentos de DNA resultantes son
útiles para iniciar la clonación celular o acelular, para el análisis del DNA, para elaborar mapas
físicos de restricción o para la detección de polimorfismos (BIOTED, 2019).
2. OBJETIVOS
1.1 Objetivo general
• Desarrollar el conocimiento y familiarizarse con conceptos básicos de enzimas
de restricción.
1.2 Objetivos específicos
• Identificar y seleccionas 30 tipos de enzimas de restricción
• Reconocer sus propiedades y conceptos importantes acerca de cada una.
• Identificar la sección de corte de cada una de las enzimas
3. Marco teorico
3.1 Enzimas de restricción
Una enzima de restricción es una proteína aislada a partir de bacterias que cortan
secuencias de ADN en sitios específicos de la secuencia, lo que produce fragmentos de ADN con

una secuencia conocida en cada extremo. El uso de enzimas de restricción es sumamente
importante para determinados métodos de laboratorio, tales como la tecnología de ADN
recombinante y la modificación genética. (NIH, 2021).
3.2 Importancia en la biología molecular
Las enzimas de restricción son una herramienta básica en Biología molecular: en
laboratorios de PCR, creación de sondas para hibridación, laboratorios de secuenciación de ADN,
ingeniería genética, procesos de clonación, manejo de genotecas y en muchas otras áreas de
genómica.
3.3 Tipo de enzimas de restricción
1.2.1 Tipo I y tipo II
a) Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación (metilan).
b) Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan
lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Las Tipo
III cortan de 5-8 bases antes o despúes de la secuencia que reconocen.
c) Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de
reconocimiento hasta el sitio del corte.
1.2.2 Tipo II
a. Sólo tienen actividad de restricción.
b. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que
reconocen.
c. Sólo requieren Mg++ como cofactor.
d. No necesitan ATP.
3.4 Aplicaciones de las enzimas de restriccion
a. Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago.

b. Fragmentar DNA genómico para separación de electroforesis y “Southern
Blot”.
c. Generación de fragmentos para ser usados como sondas marcadas en
“Southern”y “Northern” blotting.
d. Generación de fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados,
creación de DNA recombinante.
Las endonucleasas se nombran a partir de las bacterias de las que son extraídas,
su nombre está dado según el género y la especie de la bacteria de donde se aisló por
primera vez esta enzima. La primera letra representa el género de la bacteria, las
próximas dos indican la especie, una cuarta letra indica la cepa, y un número al final
indica la cantidad de enzimas que se han aislado de esa cepa. Ejm:
Eco RI → E = género Escherichia
co = especie coli
R = cepa RV 13
I = primera endonucleasa aislada de esta cepa.
3.5 Tipos de cortes en el ADN
1.2.3 cohesivos o pegajosos
GAATTC GATCC AAGCTT
CTTAAG CCTAGG AACGAA
EcoRI BamHI HindIII
1.2.4 Abruptos
AATATT CCCGGG
TTATAA GGGCCC
SspI SmaI
3.6 Factores que puedes afectar la actividad enzimática
Pureza del DNA – la reacción de enzimas es muy dependiente de la pureza,
contaminantes como proteínas, fenol, cloroformo, etanol, EDTA, SDS, altas
concentraciones de sal, etc. inhiben la endonucleasa (Rivera Denizard & Jesus
maldonado, 2018)
• Temperatura y pH – las enzimas son muy sensitivas a temperatura y pH en lo
que respecta a su estabilidad y actividad.
• DNAsas – Las DNAsas degradan el DNA en presencia de Mg++ .
• Contaminantes con carga (-).
• DNA contaminado con otro DNA.
• Grados de metilación – algunas endonucleasas son inhibidas por metilación.
• Tipo de molécula de DNA – si el DNA no tiene la secuencia que es reconocida
por la enzima accesible, esta no puede cortar el material genético (ej. si el DNA
está superenrrollado el lugar de restricción no va a estar accesible para la
enzima).
• Buffer adecuado – este provee el ambiente que necesita la enzima para trabajar
en condiciones óptimas.

3.7 Descripción general de NEB
Fundada a mediados de la década de 1970 como un colectivo de científicos
comprometidos con el desarrollo de productos innovadores para la industria de las
ciencias de la vida, New England Biolabs es ahora un líder mundial reconocido en el
descubrimiento y producción de enzimas para aplicaciones de biología molecular.
3.7.1 Biolabs de Nueva Inglaterra
Creado "por científicos para científicos", NEB es reconocido por brindar constantemente
una calidad de producto excepcional y un soporte técnico insuperable. Durante más de cuatro
décadas, NEB ha dado forma al panorama de la investigación en biociencia al descubrir,
desarrollar y respaldar reactivos de investigación superiores. Desde sus principios fundacionales,
colocar el avance de la ciencia y la administración del medio ambiente como nuestras principales
prioridades, hasta su cultura corporativa única, la filosofía de NEB se puede resumir en tres
valores fundamentales: pasión, humildad y ser genuino.
Como proveedor elegido por científicos de todo el mundo, NEB ofrece la mayor selección
de enzimas nativas y recombinantes para la investigación genómica. Si bien las enzimas de
restricción siguen siendo parte de nuestra cartera de productos principal, nuestro catálogo en
constante expansión también incluye productos relacionados con PCR, expresión génica,
preparación de muestras para secuenciación de próxima generación, biología sintética,
glicobiología, epigenética y análisis de ARN. Además, NEB se enfoca en fortalecer alianzas que
permitan que las nuevas tecnologías lleguen a sectores clave del mercado, incluido el desarrollo
de diagnóstico molecular (NEB, 2020)
3.7.2 Ciencia básica
Los laboratorios de New England Biolabs se parecen más a los de un instituto de
investigación que a los de una empresa de biotecnología, y con razón; los más de 100 científicos
del NEB se dedican a la investigación en áreas que incluyen el análisis y la ingeniería de enzimas,
la epigenética, la biología del ARN y la parasitología. Como resultado, los científicos del NEB
han publicado más de 1100 artículos hasta la fecha. En un esfuerzo por fomentar la educación
científica, los científicos de NEB también supervisan a los asociados posdoctorales, estudiantes
en prácticas y Ph.D. estudiantes involucrados en proyectos de investigación. Con este doble
enfoque en la investigación básica y aplicada, la cultura de NEB es colaborativa y académica.
3.8 Recopilación de 30 enzimas de restricción

Ítem ENDONUCLEASAS DE
RESTRICCIÓN
CARACTERÍSTICAS
1 Acc65I
➢ Calificado para la
digestión en 5 – 15 min,
en las condiciones de
reacción recomendadas.
Sitio de corte: G/GTACC
Es un neoesquizómero de KnpI.
Puede exhibir actividad estelar en
NEBuffer 2.1.
FUENTE DEL PRODUCTO: Una
cepa de E. coli que porta el gen
Acc65I clonado de Acinetobacter
calcoaceticus 65 (SK Degtyrev)
REACTIVOS
SUMINISTRADOS: Los
siguientes reactivos se suministran
con esta endonucleasa.
DEFINICIÓN DE UNIDAD: La cantidad de enzima necesaria
para digerir 1 µg de ADN de pBC4 en 1 hora a 37 °C en un
volumen de reacción total de 50 µl.
CONDICIONES DE REACCIÓN:
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
TEMPERATURA ÓPTIMA DE INCUBACIÓN: 37°C
INACTIVIDAD TÉRMICA: 65°C durante 20 minutos.
SENSIBILIDAD A LA METILACIÓN:
Metilación de dam: No sensible.
Metilación de dcm: Bloqueada por algunas combinaciones de
superposición.
Metilación de CpG: Bloqueada por algunas combinaciones de
superposición.
APLICACIONES: Clonación rápida y Digestión de enzimas
de restricción.
Mas información en:
https://international.neb.com/products/r0599-
acc65i#Product%20Information
Imagen referencial

2 AccI
➢ Calificado para la digestión
en 5 – 15 minutos.
➢ 100 % de actividad en el
búfer rCutSmart TM
(hay
más de 210 enzimas
disponibles en el mismo
búfer) lo que permite
digestiones dobles más
sencillas.
➢ Sitio de corte: GT/MKAC
Los polienlazadores que se
encuentran en los vectores de
clonación M13 y pUC contienen un
solo sitio AccI. AccI requiere al
menos 13 pares de bases más allá
del final de su secuencia de
reconocimiento para dividirse de
manera eficiente. Se ha demostrado
que esta enzima tiene menor
actividad en algunos plásmidos
superenrollados y se requiere más
de 1 unidad para digerir 1 µg de
ADN plasmídico.
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que porta
el gen AccI de Acinetobacter calcoaceticus (R. Roberts).
REACTIVOS SUMINISTRADOS: Los siguientes reactivos
se suministran con esta endonucleasa.
DEFINICIÓN DE UNIDAD: La cantidad de enzima
requerida para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un
1X Tampón rCutSmart TM
Incubar a 37 °C
TEMPERATURA ÓPTIMA DE INCUBACIÓN:37 °C
INACTIVIDAD TÉRMICA: 80 °C durante 20 min.
Metilación de dam: No sensible.
Metilación de dcm: No sensible.
Metilación de CpG: Bloqueada por superposición.
de restricción.
Mas información en:
acci#Product%20Information
Imagen referencial:

3 AlwNI
➢ 100% de actividad en el
búfer rCutSmart™ (hay
más de 210 enzimas
sencillas.
➢ Sitio de corte:
CAGNNN/CTG
el gen AlwNI clonado de Acinetobacter Iwoffii N (R. Morgan).
se suministran con este producto:
1X Tampón rCutSmart™
Incubar a 37°C
Metilación de dam: No sensible
Metilación de dcm: Bloqueada por superposición
Metilación de CpG: No sensible
de restricción.
Más información en:
alwni#Product%20Information
Imagen referencial:

4 BmtI
➢ Versión de alta fidelidad
(HF®)
de 5 – 15 minutos, con la
flexibilidad de digerir
durante la noche sin
degradación del ADN.
➢ Tiene una actividad del
100% en el tampón
rCutSmart™ buffer, la
simplicidad de un solo
búfer significa un
procesamiento de muestras
más sencillo y optimizado.
➢ Sitio de corte: GCTAG/C
Es un neoesquizómero de NheI. No es sensible a la metilación
de CpG, dcm o dam. La actividad estelar puede resultar de una
digestión prolongada.
el gen BmtI clonado de Bacillus megaterium S2 (SK
Degtyarev).
requerida para digerir 1 µg de pXba en 1 hora a 37°C en un
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
Metilación de dcm: No sensible
APLICACIONES: Digestión de enzimas de restricción.
bmti#Product%20Information
Imagen referencial:

5 BpuEI
➢ 100% de actividad en el
más de 210 enzimas
sencillas.
➢ Las enzimas de restricción
tipo IIS reconocen
secuencias de ADN
asimétricas y se escinden
fuera de su secuencia de
reconocimiento.
➢ Sitio de corte: CTTGAG
(14/16)
Puede exhibir actividad estelar en NEBuffer r1.1 y NEBuffer
r3.1. En función de la estabilidad de la enzima en la reacción,
las incubaciones de más de 1 hora no mejorarán la digestión, a
menos que se agregue enzima adicional. BpuEI requiere S-
adenosilmetionina (SAM) en la mezcla de reacción para una
actividad óptima (SAM se suministra en la formulación
enzimática).
el gen BpuEI clonado de Bacillus pumilus 2187 a (C.
Nkenfou).
Incubar a 37°C
de restricción
bpuei#Product%20Information
Imagen referencial:

6 BstXI
en 5 -15 minutos.
➢ Sitio de corte:
CCANNNNN/NTGG
La actividad estelar puede resultar de una concentración de
glicerol >5%
el gen BstXI clonado de Bacillus stearothermophilus X1 (N.
Weiker).
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
Metilación de dcm: Bloqueada por algunas combinaciones
superpuestas
APLICACIONES: Clonación rápida
bstxi#Product%20Information
Imagen referencial:

7 CviKI-1
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte: RG/CY
Es una endonucleasa de restricción con 4 sitios de
reconocimiento esperados, así como hasta once sitios relajados
no afines (sitios estrella). Según la estabilidad de la enzima en
la reacción, las incubaciones de más de 1 hora no mejorarán la
digestión, a menos que se agregue enzima adicional. La
actividad estelar puede resultar de una digestión prolongada,
una alta concentración de enzimas o una concentración de
glicerol >5%
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que lleva
el gen de restricción CviKI clonado y modificado derivado de
CA-1A, un virus Chlorella.
REACTIVOS SUMINISTRADOS: Los siguientes reactivos se
suministran con este producto:
para digerir 1 µg de ADN de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un
Incubar a 37°C
INACTIVIDAD TÉRMICA: No
https://international.neb.com/products/r0710-cviki-
1#Product%20Information
Imagen referencial:

8 DraI
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Se suministra con 1 vial de
Gel Loading Dye, Morado
(6X)
➢ Sitio de corte: TTT/AAA
Es un isoesquizómero de AhaIII. No es sensible a la metilación
de CpG, dcm o dam.
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que porta el
gen DraI de Deinococcus radiophilus (ATCC 27603).
DEFINICIÓN DE UNIDAD: La cantidad de enzima requerida
para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de
reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
INACTIVIDAD TÉRMICA: 65°C durante 20 minutos
APLICACIONES: Clonación rápida y Digestión de enzimas de
restricción.
drai#Product%20Information
Imagen referencial:

9 EciI
más de 210 enzimas
sencillas
tipo IIS reconocen
secuencias de ADN
reconocimiento
➢ Sitio de corte: GGCGGA
(11/9)
Según la estabilidad de la enzima en la reacción, las
incubaciones de más de 1 hora no mejorarán la digestión, a
menos que se agregue enzima adicional. La actividad estelar
puede resultar de una digestión prolongada.
gen EciI clonado de Escherichia coli T-8 (R. Croft)
Incubar a 37°C
superposición
ecii#Product%20Information
Imagen referencial:

10 EcoNI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte:
CCTNN/NNNAGG
EcoNI produce fragmentos de ADN que tienen una extensión
5´ de una sola base que son más difíciles de ligar que los
fragmentos de extremos romos.
el gen EcoNI clonado de Escherichia coli CDC A-193 (ATCC
12041)
Incubar a 37°C
restricción.
econi#Product%20Information
Imagen referencial:

11 EcoRI
en 5-15 minutos
(HF®) suministrada con
rCutSmart™ Buffer
➢ Viene con 1 vial de Gel
Loading Dye, Purple (6X)
Sitio de corte: G/AATTC
Puede exhibir actividad estelar en
NEBuffer r2.1 o rCutSmart Buffer. Se
ha demostrado que esta enzima tiene
menor actividad en algunos plásmidos
superenrollados, y se requiere más de 1
unidad para digerir 1 μg de ADN
plasmídico. Bloqueado por algunas
combinaciones de metilación de CpG
superpuestas. Además, tiene una
versión de alta fidelidad (EcoRI-)
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que porta el gen
EcoRI clonado de E. coli RY13 (RN Yoshimori).
DEFINICIÓN DE UNIDAD: La cantidad de enzima requerida para
digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción
total de 50 µl.
1X NEBuffer™ EcoRI/SspI
Incubar a 37°C
superposición.
restricción.
Más información en: https://international.neb.com/products/r0101-
ecori#Product%20Information
Imagen referencial:

12 FspEI
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Especificidad para
modificaciones de ADN
epigenéticamente
relevantes (5-mC y 5-hmC)
Sitio de corte: CC (12/16)
Esta enzima se ha utilizado para el
análisis epigenético en el que FspEI
escinde el ADN objetivo que
contiene sitios CpG metilados en
ambas cadenas para generar
fragmentos de 32 pb que contienen
los sitios CpG metilados. Los
fragmentos de 32 pb aislados
pueden secuenciarse para revelar
sitios de modificación de 5 mC
(Cohen-Karni et al., (2011) PNAS
108: 11040-11045). El uso de
exceso de enzima inhibe la escisión.
Puede ser necesaria la optimización
de la cantidad de enzima necesaria
para la digestión completa para
cada sustrato de ADN.
La actividad estelar, incluida la digestión de sustratos de ADN
no metilados, puede deberse a condiciones de reacción no
óptimas, como un tiempo de digestión prolongado, una
concentración alta de enzima o activador o una concentración
de glicerol >5 %.
La especificidad óptima de la escisión en los sitios de 5 mC se
puede lograr manteniendo la relación molar de FspEI a los
sitios objetivo de 5 mC entre 0,1:1 y 1:1 en presencia de la
solución activadora de enzimas 1X y la digestión durante hasta
60 minutos. (La molaridad de FspEI~0,6 μM).
el gen FspEI sintético de la especie Frankia EAN1pec.
requerida para digerir 1 µg de ADN de pBR322 (dcm +) en 1
hora a 37°C en un volumen de reacción total de 50 µl.
Suplemento de tampón 1X rCutSmart™
con solución de activador de enzimas 1X
Incubar a 37 °C
APLICACIONES: Enzimas de restricción para epigenética y
Digestión de enzimas de restricción.
fspei#Product%20Information

13 HaeII
➢ Calificado para la
digestión en 5-15
minutos
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte:
RGCGC/Y
Según la estabilidad de la enzima en la reacción, las
incubaciones de más de 1 hora no mejorarán la digestión, a
menos que se agregue enzima adicional. Bloqueado por
metilación de CpG.
el gen HaeII de Haemophilus aegypticus (ATCC 11116).
Incubar a 37°C
Metilación de CpG: Bloqueada
haeii#Product%20Information
Imagen referencial:

14 HinfI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte: G/ANTC
el gen HinfI de Haemophilus influenzae Rf (ATCC 49824).
necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en una
Incubar a 37°C
superposición.
de restricción.
hinfi#Product%20Information
Imagen referencial:

15 HphI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
tipo IIS reconocen
secuencias de ADN
reconocimiento
➢ Sitio de corte de enzimas
de restricción: GGTGA
(8/7)
Se ha sugerido que HphI puede
escindirse en N9/N8 dependiendo de
la secuencia entre los sitios de
reconocimiento y de escisión
(Kang, C. y Wu, C.-W. (1987)
Nucl. Acids Res. 15, 2279-2294
Cho, S.-H. y Kang, C. (1990) Mol.
Cells 1, 81-86). La incubación de >
12 unidades durante más de 4 horas
en el ADN de ΦX174 da como
resultado productos de escisión
adicionales.
Todavía no se ha demostrado que esto ocurra en otros ADN. El
pH bajo y la alta concentración de glicerol mejoran esta
actividad. Esta enzima está bloqueada por la metilación de la
presa. Esta enzima está bloqueada por la metilación de dcm. La
actividad estelar puede resultar de una digestión prolongada,
una alta concentración de enzimas o una concentración de
glicerol >5%
el gen HphI de Haemophilus parahaemolyticus (ATCC
49700).
Incubar a 37°C
Metilación de dam: Bloqueada
Metilación de dcm: Bloqueada
de restricción.
hphi#Product%20Information
Imagen referencial:

16 I-CeuI
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Esta es una endonucleasa
autodirigida y requiere
períodos de incubación de 3
horas.
➢ Tolera cierta degeneración
de secuencia dentro de la
secuencia de
reconocimiento
➢ Sitio de corte:
TAACTATAACGGTCCTAAGGTAGCGAA(-
9/-13)
I-CeuI puede permanecer unido al
ADN después del corte y alterar la
velocidad de migración del ADN
durante la electroforesis. Para
interrumpir la unión, agregue SDS a
una concentración final de 0,5 % o
purifique el ADN antes de la
electroforesis.
Las endonucleasas autodirigidas no
tienen secuencias de
reconocimiento estrictamente
definidas como las enzimas de
restricción.
Es decir, los cambios de una sola base no suprimen la escisión
sino que reducen su eficiencia en grados variables. El límite
preciso de las bases requeridas generalmente no se conoce. La
secuencia de reconocimiento enumerada es un sitio que se sabe
que se reconoce y escinde.
Se suministra con ADN plásmido. El pBHS linealizado con
ScaI se suministra a 0,5 mg/ml en Tris-HCl 10 mM (pH 8,0),
EDTA 1 mM. La escisión de este plásmido de 3,5 kb da
fragmentos de 2100 y 1400 pares de bases.
el gen I-CeuI de Chlamydomonas eugametos (C. Lemieux).
necesaria para escindir 1 µg de plásmido de control linealizado
con pBHS ScaI en 3 horas a 37 °C en un volumen de reacción
total de 50 µl.
Incubar a 37°C
https://international.neb.com/products/r0699-i-
ceui#Product%20Information

17 KpnI-HF®
➢ Enzimas de restricción de
alta fidelidad (HF).
Diseñado para mejorar el
rendimiento
➢ 100% de actividad en
rCutSmart Buffer
en 5-15 minutos
➢ Actividad estelar reducida
(6X)
➢ Sitio de corte: GGTAC/C
Es un isoesquizómero de KpnI.
KpnI produce una extensión de 3´
de 4 bases, mientras que Acc65I
produce una extensión de 5´ de 4
bases.
Para las enzimas que no se pueden
inactivar con calor, recomendamos
usar una columna para la limpieza o
ejecutar la reacción en un gel de
agarosa y luego extraer el ADN, o
realizando una extracción con
fenol/cloroformo.
el gen KpnI clonado y modificado de Klebsiella pneumoniae
OK8 (ATCC 49790)
necesaria para digerir 1 µg de ADN de pXba en 1 hora a 37 °C
en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
https://international.neb.com/products/r3142-kpni-
hf#Product%20Information
Imagen referencial:

18 MboI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
(6X)
➢ Sitio de corte: /GATC
BfuCI, DpnII y Sau3AI son
isoesquizómeros de MboI. MboI se
escinde para dejar una extensión
GATC de 5' que se puede ligar
eficazmente en fragmentos
escindidos BamHI, BclI, BglII,
BstYI, DpnII o Sau3AI.
Según la estabilidad de la enzima
en la reacción, las incubaciones de
más de 1 hora no mejorarán la
digestión, a menos que se agregue
enzima adicional.
Bloqueado por la metilación de dam y deteriorado por la
metilación de CpG superpuesta.
gen MboI de Moraxella bovis (ATCC 10900).
para digerir 1 µg de ADN λ (dam-) en 1 hora a 37°C en un
Incubar a 37°C
Metilación de dam: Bloqueada
Metilación de CpG: Deteriorada por superposición
mboi#Product%20Information
Imagen referencial:

19 MnlI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
tipo IIS reconocen
secuencias de ADN
reconocimiento
➢ Sitio de corte de enzimas
de restricción: CCTC (7/6)
MnlI produce fragmentos de ADN que tienen una extensión 3´
de una sola base que son más difíciles de ligar que los
fragmentos de extremos romos.
el gen MnlI de Moraxella nonliquefaciens (ATCC 17953).
Incubar a 37°C
de restricción
mnli#Product%20Information
Imagen referencial:

20 Nb.BbvCI
más de 210 enzimas
sencillas
de corte
➢ Genera moléculas de ADN
que están "cortadas", en
lugar de escindidas
➢ Sitio de corte: CCTCAGC
Es una endonucleasa de corte que corta solo una cadena de
ADN en un sustrato de ADN de doble cadena.
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que
expresa una forma alterada de los genes de restricción BbvCI
de Bacillus brevis (L. Ge)
para convertir 1 µg de ADN plasmídico superenrollado en
forma circular abierta en 1 hora a 37°C en un volumen de
Incubar a 37°C
APLICACIONES: Enzima de mellado y amplificación por
desplazamiento de hebra.
nbbbvci#Product%20Information
Imagen referencial:

21 Nb.BssSI
de corte
➢ Genera moléculas de ADN
que están "cortadas", en
lugar de escindidas
➢ Esta es una Enzima para la
Innovación (EFI). Estas
enzimas tienen propiedades
interesantes y
especificidades únicas.
➢ Sitio de corte: CACGAG
La incubación a 50°C da como resultado una actividad 3 veces
mayor. No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam.
FUENTE DEL PRODUCTO: Una cepa de E. coli que porta el gen
Nb.BssSI clonado y modificado de Bacillus stearothermophilus.
DEFINICIÓN DE UNIDAD: La cantidad de enzima requerida para
convertir 1 μg de ADN pUC19 superenrollado en forma circular
abierta en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
Más información en: https://international.neb.com/products/r0681-
nbbsssi#Product%20Information
Imagen referencial:

22 NlaIV
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte: GGN/NCC
NaCl y KCl inhiben la actividad.
gen NlaIV de Neisseria lactamica (NRCC 2118).
para digerir 1 µg de ADN de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un
Incubar a 37°C
Metilación de dcm: Bloqueada por superposición
Metilación de CpG: Bloqueada por superposición
nlaiv#Product%20Information
Imagen referencial:

23 NmeAIII
más de 210 enzimas
sencillas
tipo IIS reconocen
secuencias de ADN
reconocimiento
➢ Requiere dos o más sitios
para la escisión. Revise la
lista de enzimas y las
recomendaciones en la
siguiente tabla , así como
el artículo de información
general.
➢ Sitio de corte: GCCGAG
(21/19)
No se recomienda la sobredigestión
con > 5 unidades de NmeAIII por
µg de ADN.
NmeAIII requiere S-
adenosilmetionina (SAM) en la
mezcla de reacción para una
actividad óptima (SAM se
suministra en la formulación
enzimática).
Además, requiere dos copias de su secuencia de
reconocimiento para que se produzca la escisión. Por tanto, el
único sitio NmeAIII en pUC19 es resistente a la escisión. Una
sobredigestión de 10 veces corta menos de la mitad del
ADN.El punto de división puede cambiar un par de bases
según el contexto de la secuencia de ADN entre el sitio de
reconocimiento y la posición de división. Para una secuencia
dada, generalmente predominará un sitio de corte.
Se produce una escisión significativa en hielo ya 25°C.
NmeAIII produce un patrón de digestión parcial estable
incluso con exceso de enzima.
gen NmeAIII clonado de Neisseria meningitidis2491
(Achtman, M.)
para digerir 1 µg de ADN de ΦX174 RF I en 1 hora a 37 °C en
un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
APLICACIONES: Digestión de enzimas de restricción
nmeaiii#Product%20Information

24 PvuI
en 5-15 minutos
rCutSmart™ Buffer
(6X)
➢ Sitio de corte: CGAT/CG
La escisión del ADN genómico de mamíferos está bloqueada
por la metilación de CpG. Tiene una versión de alta fidelidad
(PvuI-HF®).
gen PvuI clonado de Proteus vulgaris (ATCC 13315)
para digerir 1 µg de ADN de pXba en 1 hora a 37 °C en un
volumen de reacción total de 50 µl
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
restricción.
pvui#Product%20Information
Imagen referencial:

25 PI-SceI
autodirigida y requiere
períodos de incubación de 3
horas.
➢ Tolera cierta degeneración
de secuencia dentro de la
secuencia de
reconocimiento
➢ Sitio de corte:
ATCTATGTCGGGTGCGGAGAAAG
AGGTAAT(-15/-19)
La inteína que codifica PI-SceI está
presente en el gen VMA ATPasa
Saccharomyces cerevisiae (1,5). El
gen ha sido modificado para
expresión independiente en E. coli
utilizando un sistema de expresión
de polimerasa de ARN T7 (2).
Suministrado con ADN plasmídico:
pBSvdeX linealizado con XmnI se
suministra 0,5 mg/ml en Tris-HCl
10 mM (pH 8,0), EDTA 1 mM. La
escisión de este plásmido de 3,7 kb
con PI-SceI da fragmentos de 2550
y 1150 pares de bases.
Las endonucleasas autodirigidas no
tienen secuencias de
reconocimiento estrictamente
definidas como las enzimas de
restricción.
Es decir, los cambios de una sola base no suprimen la escisión
sino que reducen su eficiencia en grados variables. El límite
preciso de las bases requeridas generalmente no se conoce. La
secuencia de reconocimiento enumerada es un sitio que se sabe
que se reconoce y escinde.
PI-SceI puede permanecer unido al ADN después del corte y
alterar la velocidad de migración del ADN durante la
electroforesis.
el gen VMA1 ATPasa de Saccharomyces cerevisiae (J.
Thorner).
necesaria para escindir 1 μg de plásmido de control linealizado
con pBSvdeX XmnI en 3 horas a 37 °C en un volumen de
reacción total de 50 μl.
Suplemento 1X NEBuffer™ PI-SceI
con BSA purificado
Incubar a 37 °C
https://international.neb.com/products/r0696-pi-
scei#Product%20Information

26 RsaI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
(6X)
➢ Sitio de corte: GT/AC
gen RsaI de Rhodopseudomonas sphaeroides (S. Kaplan).
Incubar a 37°C
superposición
restricción.
rsai#Product%20Information
Imagen referencial:

27 SphI
rCutSmart™ Buffer
➢ Sitio de corte: GCATG/C
Se escinde para dejar una extensión CATG 3' que puede ligarse
eficientemente a fragmentos de ADN generados por NlaIII. La
actividad estelar puede resultar de una digestión prolongada.
gen SphI de Streptomyces phaeochromogenes (NRRL B-
3559).
1X NEBuffer™ r2.1
Incubar a 37°C
sphi#Product%20Information
Imagen referencial:

28 SwaI
en 5-15 minutos
➢ Sitio de corte:
ATTT/AAAT
gen SwaI de Staphylococcus warneri (B. Frey).
para digerir 1 µg de ADN de pXba en 1 hora a 25 °C en un
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 25°C
restricción.
swai#Product%20Information
Imagen referencial:

29 TfiI
en 5-15 minutos
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte: G/AWTC
La escisión del ADN genómico de mamíferos está bloqueada
por algunas combinaciones de metilación de CpG
superpuestas.
gen TfiI clonado de Thermus filiformis (D. Cowan, University
College London).
para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 65 °C en un volumen
de reacción total de 50 µl.
1X tampón rCutSmart™
Incubar a 65 °C
superposición
restricción
tfii#Product%20Information
Imagen referencial:

30 ZraI
más de 210 enzimas
sencillas
➢ Sitio de corte: GAC/GTC
Es un neoesquizómero de AatII. La escisión del ADN
genómico de mamíferos está bloqueada por la metilación de
CpG.
el gen ZraI clonado de Zoogloea ramigera 11, (SK
Degtyarev).
Incubar a 37°C
zrai#Product%20Information
Imagen referencial:

Conclusiones
El uso de las enzimas de restricción es muy importante en la biotecnología molecular,
este tipo de enzimas reconocen y cortan las moléculas de ADN por secuencias nucleótidos
específicas, aunque estas enzimas desempeñan una función propia, son particularmente
importantes por su empleo experimental en varias áreas de la biología molecular; en especial, se
utilizan ene l proceso de la clonación molecular. Además de diferentes aplicaciones de genoma
en polimorfismos.
Cada una de las enzimas poseen un protocola definido para su uso y sus aplicaciones, su
características y propiedades son propias de cada enzima. Y a su vez cada una posee su propia
sección de corte.
Bibliografía
BIOTED. (2019). Introduccion a los enzimas de restriccion. Obtenido de
https://www.bioted.es/protocolos/INTRODUCCION-ENZ-RESTRICCION.pdf
NEB. (2020). New england BioLabs. Obtenido de https://international.neb.com/about-neb/neb-
overview
NIH. (2021). National Human Genome Research Institute. Obtenido de
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Enzima-de-restriccion
Rivera Denizard, O., & Jesus maldonado, I. (2018). Enzimas de Restriccion y electroforesis.
Obtenido de https://academic.uprm.edu/~jvelezg/EnzimasDNA.htm

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