1. Micromuestras y Life Sciences:
NanoDrop™
The world leader in serving science
Espectrofotometría y Fluorimetría
Página 329
Martín Míguez
martin.miguez@thermofisher.com
(+34) 699 055 538

2. Pág. 329
NanoDrop™ Products
Part of Thermo Fisher Scientific 2

3. Pág. 329
¿Qué es NanoDrop™? ¿Para qué es? Ventajas
Línea de productos Thermo Scientific NanoDrop™:
Línea de fotometría y de fluorimetría
Cuantificación y análisis de soluciones
Volúmenes de 0,5-2μl sin cubetas
Sin diluciones
Menos de 5 segundos por muestra
Part of Thermo Fisher Scientific 3

4. Pág. 329
NanoDrop™: Usuarios
DNA F Fluorimetría
L
U DNA y RNA: PicoGreen y RiboGreen
DNA cuali-cuati
O Óxido nitrico
Micro-arrays R Actividad enzimática
Cuanti RT-PCR E Proteínas fluorescentes
Secuenciación S
Moléculas marcadas
A
Diagnóstico molecular C
B
Compatibilidad en transplantes E
S Biobancos N
O Medicina legal (forense) C
R I
B A
A
N
C
I
Proteínas
A
Purificadas: Abs 280 y 205 nm
Extracto protéico: Bradford, Lowry, BCA, Pierce 660
Cristalografía
Marcación de proteínas con fluorocromos
Macro-arrays
Part of Thermo Fisher Scientific 4

5. Pág. 329
Fundamentos de la Tecnología (I)
Utiliza un exclusivo diseño basado en el pipeteo de micro-volúmenes
directamente sobre la superficie de un pedestal plano (el extremo de la fibra
óptica receptora):
• Permite albergar la muestra sin derramarse
• Posibilita el paso del haz de luz para la medición
• Permite limpiar o recuperar la muestra
El resistente material de los pedestales los hace compatibles con la mayoría
de los solventes comúnmente usados en los laboratorios, y con soluciones de
pH extremo
Part of Thermo Fisher Scientific 5

6. Pág. 329
Fundamentos de la Tecnología (II)
El sistema de retención de muestra aprovecha la Tensión Superficial para formar un
puente de líquido entre el pedestal inferior y un pedestal superior
Part of Thermo Fisher Scientific 6

7. Pág. 329
Espectrofotometría
Espectrofotómetros
DISCONTINUADO
NanoDrop™ 9.322 € 10.115 € 22.575 €
1000
NanoDrop™ 2000 y 2000c NanoDrop™ 8000
Part of Thermo Fisher Scientific 7

8. Pág. 329
Espectrofotometría: Teoría
CCD Array
Dispersion device
Entrance slit
Sample
Source
Part of Thermo Fisher Scientific 8

9. Pág. 329
Espectrofotómetros (I)
En los espectrofotómetros NanoDrop™:
• El pedestal superior es el extremo de una fibra óptica conectada a una fuente de
emisión de Xenón.
NanoDrop™ 2000 y 2000c
• Ambos pedestales definen un preciso y estrecho Paso Óptico cuya longitud varía
automáticamente con la concentración de la muestra, permitiendo hacer mediciones
en un rango muy amplio de concentraciones sin hacer diluciones.
Part of Thermo Fisher Scientific 9

10. Pág. 329
Espectrofotómetros (II)
NanoDrop™ 2000, NanoDrop™ 2000c y NanoDrop™ 8000 es la línea de
espectrofotómetros más completa, robusta y versátil para laboratorios de Life Sciences:
☺Reproducibilidad
☺Rango de cuantificación
☺Registro de espectro total
☺Sencillez y rapidez en el manejo
Su poderoso Software permite el análisis, archivo y manejo de datos usando constantes
de absortividad o curvas de calibración para todo tipo de muestras: DNA, RNA, Proteínas,
determinaciones UV-Visible, etc
Part of Thermo Fisher Scientific 10

11. Pág. 329
Fluorimetría
Fluoroespectrómetro
10.250 €
NanoDrop™ 3300
Part of Thermo Fisher Scientific 11

12. Pág. 329
Fluorimetría: Teoría
Espectrofluorímetro:
Fluorómetro:
Part of Thermo Fisher Scientific 12

13. Pág. 329
Fluoroespectrómetro (I)
NanoDrop™ 3300 aporta la sensibilidad y especificidad de la
fluorimetría a la cuantificación en micro-muestras
No utiliza filtros
Utiliza tres diodos de emisión de luz:
UV-LED 365nm
Blue-LED 470nm
White-LED 460-650nm
No utiliza monocromadores
Utiliza un CCD Array Detector (400-700nm),
orientado a 90º respecto del haz de los LEDs
Part of Thermo Fisher Scientific 13

14. Pág. 329
Fluoroespectrómetro (II)
El software permite el análisis, archivo y manejo de datos de curvas
de calibración y resultados de muestras:
RiboGreen®, PicoGreen®, Sybr® Dyes, Quant-iTTM, Qdots® Dyes, Alexa Fluor® Dyes,
GFPwt, Hoecsht 33258, CyDyeTM, etc.
NanoDrop™ 3300
Sensibilidad
Muestra Reactivo Rango
(p/ 2μl)
Hoechst 33258 150 pg 75-1500 ng/ml
PicoGreen® 2 pg 1-1000 ng/ml
DNA Quant-iT™ dsDNA BR 20 pg 10-5000 ng/ml
Quant-iT™ dsDNA HS 2 pg 1-500 ng/ml
Sybr Green I
® 2 pg 1-1000 ng/ml
RNA RiboGreen ® 10 pg 5-1000 ng/ml
Fluorescamine 16 ng 8-500 μg/ml
FluoroProfile® 6 ng 3-100 μg/ml
Proteínas 15-1000 μg/ml
Fluoraldehyde™ OPA 30 ng
1-50 μg/ml
Quant-iT™ Protein 10 ng 5-500 μg/ml
Part of Thermo Fisher Scientific 14

15. Pág. 329
NanoDrop™ Products: Comparativa
Productos NanoDrop™
NanoDrop™ NanoDrop™ NanoDrop™ NanoDrop™
Equipos
2000c 2000 8000 3300
Número 1 8 1
Volumen 0,5-2 μl 1-2 μl 1-2 μl
Muestra Concentración 2,5-3.700
2,5-3.700 1-1.000 pg/μl
1-1.000 pg/μl
2-15.000 ng/μl
2-15.000 ng/μl
(dsDNA) ng/μl
ng/μl PicoGreen®
PicoGreen®
Ratios de
Sí Sí N/A
pureza
Paso óptico Automático 0,05-1 mm
0,05-1 mm 0,2-1 mm
0,2-1 mm N/A
UV-Vis
190-840 nm 220-750 nm 400-750 nm
(CCD Array)
Barrido Sí Sí N/A
Espectro
Exactitud 1 nm 1 nm 1 nm
Pedestal 3 nm (Hg 8 nm (Hg 546
Resolución <1,8 nm (Hg 253,7nm)
546 nm) nm)
Rango
(Escalado a 0,02-300 OD
0,02-300 OD 0,02-75 OD
0,02-75 OD N/A
10mm)
±0,003 OD
Absorbancia Exactitud (a
(1mm
0,76 OD y ±0,002 OD (1mm paso óptico) N/A
paso
257nm)
óptico)
Precisión 2% CV 2% CV N/A
<5% CV
Fluorescencia Precisión N/A N/A (Fluoresceí
na 10nM)
Part of Thermo Fisher Scientific 15

16. Pág. 329
NanoDrop™ 2000c: Cubeta
Productos NanoDrop™
Equipo NanoDrop™ 2000c
Número 1
CC (dsDNA) 0,4-750 ng/μl
0,4-750 ng/μl
Muestra
Cinéticas 37±0,5ºC
Cubeta
Agitación 150-850 rpm
Paso óptico Longitud 10, 5, 2, 1 mm
Rango (a 10
Absorbancia 0,002-1,5 OD
mm)
¡Muchas Gracias!
Part of Thermo Fisher Scientific 16