BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR I

1. ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
BIOQUÍMICA II
Fecha:
Jueves 27 de Enero del 2011
Integrantes:
Bustos Claudia Espinoza Sofía
Cango Andrea Vargas Vanessa
Chalán Lucía
Objetivos:
Comprender el fundamento del método de cuantificación de DNA mediante el ensayo Quant-iT™
PicoGreen® dsDNA.
Analizar e interpretar los resultados de las muestras de ADN cuantificadas.
Introducción:
Quant-iT™ PicoGreen® dsDNA es un colorante ultra-sensible, para teñir ácidos nucleícos y cuantificar DNA
de doble cadena en solución. La detección y cuantificación de pequeñas cantidades de DNA es
extremadamente importante en una amplia variedad de aplicaciones biológicas. Aquellas incluye técnicas de
biología molecular estándar, tales como síntesis de ADNc (ADN copia), para la producción de librerías y
purificación de fragmentos de ADN para sub-clonaje, así como técnicas de diagnóstico tales como
cuantificación de productos de ADN amplificados y detección de moléculas de ADN en preparaciones que
contienen drogas.
El reactivo Quant-iT™ PicoGreen® dsDNA, ha sido recientemente usado para cuantificar productos de PCR
con el objetivo de realizar ciclos de secuenciación directa.
La técnica mas comúnmente usada para medir la concentración de ácidos nucleícos es la determinación de la
absorbancia a 260nm (A260). Las mayores desventajas de los métodos de absorvancia son las grandes
contribuciones relativas de nucleótidos y ácidos nucleícos de cadena sencilla que generan una señal, la
interferencia causada por contaminantes comúnmente encontrados en preparaciones de ácidos nucleícos, la
inhabilidad para distinguir entre ADN y ARN y la insensibilidad relativa del ensayo (una A260 de 0,1
corresponde a 5ug/mL de ADN de doble cadena en solución).
El Quant-iT™ PicoGreen® dsDNA permite cuantificar cantidades muy pequeñas de ADN, como 25 pg/mL de
ADN de doble cadena, con un espectro-fluorometro estándar y longitudes de onda de excitación y emisión,
mediante fluoresceína. Además la linearidad de los rangos de detección del ensayo Quant-iT™ PicoGreen®
dsDNA se mantiene en presencia de varios componentes que comúnmente contamina las preparaciones de
ácidos nucleícos, incluyendo sales, urea, etanol, cloroformo, detergentes, proteínas y agarosa. Este ensayo,
ha sido desarrollado para minimizar la contribución de fluorescencia del ARN y del ADN de cadena sencilla.
Métodos:
1. Preparar los calibradores para realizar la curva de calibración.

2. 2. Montar la placa con calibradores y muestras.
3. Organizar la placa en el fluorometro.
4. Realizar la lectura.
5. Analizar los datos obtenidos.
Resultados y discusión:
Mencionar los resultados de forma clara, y explicar la razón por la cual se presentaron.
Conclusiones:
Indicarlas de forma concreta.
Anexos:
Inserto Quant-iT™ PicoGreen ® dsDNA Reagent and Kits