El documento describe el método de placas hemolíticas de Jerne para determinar las células formadoras de anticuerpos (CFA) en un cultivo in vitro. Las células B se activan por células T helper para diferenciarse en células plasmáticas que secretan grandes cantidades de anticuerpos. El método implica mezclar linfocitos con eritrocitos sensibilizados y agar para permitir la detección de zonas de lisis mediadas por anticuerpos, lo que indica la presencia de CFA. Se han propuesto varias modific

1. Determinación de células formadoras
de anticuerpos
Objetivo: Poner de manifiesto en un
cultivo in vitro la existencia de
células que producen anticuerpos
en un animal inmunizado.
Laboratorio de inmunología 2011

2. Célula formadora de anticuerpo
Las células plasmáticas pertenecen al sistema
inmunitario y su papel consiste en la secreción de
grandes cantidades de anticuerpos.
Célula Th
Se diferencian a partir de los linfocitos B gracias a
la estimulación de los linfocitos CD4+
Las células plasmáticas se originan en la médula
ósea, posteriormente se desplazan al bazo o a
los nódulos linfáticos para secretar anticuerpos
(aproximadamente 10 000 por segundo)
Célula B
Anticuerpos secretados
Célula plasmática

3. Método de Jerne
El método de placas
hemolíticas da la idea del
número de células formadoras de
anticuerpo en una población.
Las placas hemolíticas fueron
desarrolladas por Niels Jerne, en
1963.
Estas células se denominan
células formadoras de placa
(CFP).

4. Demostrar, en forma experimental, la
sensibilización previa de una animal
frente a un antígeno, estudiando in-
vitro la capacidad de los linfocitos B
para producir anticuerpos, y
analizando el fenómeno de la
interacción celular requerida tanto
durante la presentación del antígeno
como en el proceso de activación de la
célula B por la célula T
Medida cuantitativa de las células productoras de
anticuerpo contra un antígeno.
Las placas que se obtienen directamente, representan
principalmente células que producen IgM, pues este
anticuerpo tiene una alta eficiencia hemolítica.

5. Para demostrar células que sintetizan IgG
(placas indirectas)
Favorecer la unión del complemento al
complejo eritrocito- anticuerpo IgG,
añadiendo antes suero anti-IgG
Identificar distintas células, que fabriquen anticuerpos
pertenecientes a diferentes subclases, suponiendo que se
posea los antisueros apropiados.
Recubrir la superficie
del eritrocito

6. Modificaciones de la técnica de
Jerne
 Golub, Mishell y Dutton: Esta modificación emplea toxoide de difteria,
con la finalidad de obtener una mayor cantidad de anticuerpos.
 Schwartz Braun: Es una prueba con bacterina, emplea E.coli muertas
por calor. Se lleva a cabo con células del bazo + E. colì viva +
agar+MEM. Se le adiciona complemento y permite la lisis
 Nossal, Warner y Lewis: Inmuniza a conejo con Salmonella typhi;
emplea Células de ganglios linfáticos, Sangra al conejo a los 5 días y
un segundo conejo a los 21 días Observa una primera respuesta que
es IgM (respuesta primaria) y IgG (respuesta secundaria).
 Cunningham y Szemberg: Emplea portaobjetos en lugar de placas,
no utiliza agarosa. Emplea células+GRG+MEM

7. Metodologí
a
0.1 mL de GRC al 10 %

8. Metodologí
a
Extraer el bazo 5 mL Sol. Hank.
Macerar
Sacrificar. Organza sobre
dislocación un vaso de
cervical precipitados Dejar reposar
5 min.
La solución salina
balanceada de Hank es
un medio de cultivo
estándar utilizado para la
conservación celular.
Ph de 7.2

9. Metodologí
a
Incubar 37°C
45 min.
43°C
2 mL. agar al
0.8%
El anticuerpo
Dilución 1:5
secretado por una
Sol. Hank
célula se difundirá
a través del agar,
reaccionara con
S. Celular los eritrocitos, y
0.1 mL GRC formara un
0.15 mL complejo
localizado,
antígeno-
anticuerpo.

10. Incubar 37°C. 30 min.
 Cuando se añade complemento a la capa
1.5 mL. Suero de
de eritrocito-linfocito, solo aquellos
cobayo
eritrocitos que han reaccionado con el
1:10
anticuerpo se fijarán el complemento y se
consumara su lisis, estos producen zonas
localizadas de hemolisis.

11.  Células en el bazo
Dilución 1:5
Colorante Türk
Colorante de Türk.
Solución de violeta de genciana ácido
acético.
Para conteo de leucocitos en Cámara de
Neubauer
El acido acetico contenido en la solución
hemoliza los eritrocitos y el colorante
contenido tiñe los leucocitos

12. Resultados
# Promedio # leucocitos/0.1 CFA/10^6 células de bazo
de UFA mL bazo
1 577.33 18.9^6 30.54
2 267 16.25*10^6 164.3
3 350.33 8.85*^6 39.58
4 301.3 1.97*10^6 152.94
5 25 40.5*10^4 62.18
6 344-3 1.0 75*10^6 319.7

13. Referencias