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Inmunodifusión
Es una técnica que se utiliza en el laboratorio para la identificación
y cuantificación de cualquiera de las inmunoglobulinas.

Su base se encuentra en la presencia de un precipitado visible,
resultado de la combinación antígeno-anticuerpo en determinadas
circunstancias.
(Dreux 1908 - París 1985),
  “Doctor en Medicina en 1946 escribió algunas notas y
  clásicos en el que se describen las soluciones de
  antígenos y anticuerpos de inmunodifusión en gel de
  agar”


Recibió premio nobel en 1984 por las teorías en cuanto a
la especificidad del desarrollo y control del sistema inmune
y el descubrimiento del principio para la producción de
anticuerpos monoclonales.
(Estocolmo 1914-2004)
médico sueco Ouchterlony desarrollado en su tesis
un nuevo método analítico para la inmunodifusión .

Este método se llama a menudo el método de
Ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de
la inmunología durante décadas.
El método se usa en todo el mundo.
   Este método fue utilizado de manera sistemática en
    inmunología clínica:

     Determinaciones de inmunoglobulina
     Determinaciones transferían.
     Proteína C reactiva.
     Proteína embrionaria (α-fetoproteína)




        se asocia con ciertos tumores
                  hepáticos.
se asocian con
       asociados con                     malignidad
                                  Ig G
Ig G   enfermedades hepáticas            e induce a una perdida
       crónicas y mielomas .             de proteínas.


        se asocia a infecciones
                                  Ig A   Induce a una perdida
        crónicas, enfermedades
Ig A                                     de proteínas.
        hepáticas y mielomas.




                                           Deficiencia
       Se asocia a hepatitis,     Ig M
                                           de
Ig M   mieloma,                            anticuerpos.
       magroglobulinemia de
       waldenstrom’s .
   En la mayoría de las técnicas de inmunodifusion se
    utiliza agarosa, la cual se prepara hirviendo
    lentamente los gránulos en el baño de agua.

   La mayoría de los tipos de agarosa se disuelven
    poco mas de 90ºC y gelifican a 45ºC.

   En el soporte de agarosa se coloca el antígeno y el
    anticuerpo (es necesario conocer uno de ellos para
    identificar el otro).
   Ambos migran en todas las direcciones y cuando
    encuentran a su contrario presentan una banda de
    precipitación fácilmente observable

    Esta técnica constituye la base común de una
    gran variedad de técnicas que permite realizar
    desde un análisis cualitativo hasta una
    estimación cuantitativa de un antígeno.
   Técnica que cuantifica de manera sencilla y
    económica inmunoglobulinas
    de isotipo G, M y A ó antígenos
    solubles (C3, C4, transferrina,
    proteína C reactiva) presentes
    en muestras biológicas.

   La técnica se basa en la difusión de la muestra
    conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas
    ó
    antígenos solubles) en una
    matriz semisólida de agar en
     la que se encuentra disuelto
    el Ac específico.
    La muestra biológica se introduce en los orificios
    cilíndricos excavados en el agar y a medida que el
    antígeno difunde en forma radial, se alcanza la
    relación Ag-Ac que permite la formación
    precipitados visibles.




   Una vez finalizada la difusión se mide el radio (R)
    de los precipitados que es proporcional a la
    concentración de antígeno (C).
   La concentración de proteína en la muestra
    biológica (Cx) se calcula realizando una curva
    de calibración utilizando muestras patrones
    de concentración conocida



   La técnica se basa en la difusión de la muestra
    conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas
    ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de
    agar en la que se encuentra disuelto el Ac
    específico.
 colocamos   en la parte inferior del tubo un
 vol. de agar 1% fundido, mezclado con un
 vol. igual del antisuero.




 Dejamos solidificar y agregamos igual vol.
 de agar 0,5%, dejamos solidificar.
 Por
    ultimo agregamos agar 1% donde se
 encuentra disuelto el Ag.




 Tantoel Ag. como el Ac. migrarán hacia la zona
 media de menor concentración, de manera
 que, otra vez, se formarán gradientes que
 harán que en determinado punto los reactivos
 estén en equivalencia y precipiten.
   si la concentración de Ag. y Ac. están en relaciones
    óptimas (equivalentes) la banda se formará en un
    punto intermedio del tubo, mientras que
    si la cantidad de Ag.




   Esta en exceso necesitará recorrer una mayor
    distancia para alcanzar una dilución tal que se
    encuentre en equivalencia con el Ac. y así la banda
    se formará más cerca del fondo.
   Constituye un método muy completo ya que
    permite obtener mas información que los
    anteriores.




   Consiste en colocar en una placa de Petri agar
    1,5% al cual luego de solidificar se le realizan
    perforaciones en forma de pocillos a distancia
    conveniente y en dichas perforaciones se colocan
    pequeñas cantidades de Ag. y Ac.
   En este caso los reactivos difunden en forma radial
    a partir del pocillo generando bandas de
    precipitación cuyas características dependerán de
    varios factores.
 Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar
  la existencia o no de determinantes comunes entre
  Ag. según las características de las bandas formadas.
 cuando las concentraciones colocadas en los pocillos
  estén cerca de la equivalencia la banda se formará a
  mitad de distancia entre ellos.




Nos permite tener idea de los PM de cada reactivo ya que
al tratarse de una difusión radial, la concavidad de la
banda estará hacia el lado del pocillo donde se halla
colocado el reactivo de mayor PM, y viceversa, si ambos
PM son semejantes la banda será recta.
   la posibilidad de hacer varios pocillos en una
    placa permite obtener información sobre
    similitud de los Ag. reaccionantes.



   Las macromoléculas antigénicas tienen en su
    superficie zonas llamadas determinantes
    antigénicos y que son los sitios reconocidos por el
    Ac.
   Para determinar la relación Ag/Ac (prueba
    CUALITATIVA), encontramos tres patrones básicos:

1. Identidad:


                                             Los dos Ag tienen
                                             los mismo epitopos
                                             reconocidos por el
                                             suero y se forma
                                             una banda de
                                             precipitación con
                                             forma de arco
                                             continuo.
2. No Identidad:




             Los Ag son distintos y se forman bandas
             de precipitación independientes y no dan
             un arco continuo. Aparece una figura con
             forma de aspa.
3. Identidad Parcial:




         Los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de
         ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por
         el suero y se forma un arco de precipitación al
         que le sale un espolón.
Mediante la técnica de Ouchterlony podemos
determinar la existencia o no de determinantes
comunes entre Ag. según las características de
             las bandas formadas.
Inmunodifusión
 http://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedi
  a/40399/inmunodifusi%C3%B3n
 http://es.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-Tecnicas

 Inmunologia diagnostico e interpretacion de
  pruebas de laboratorio
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Inmunologi
  a.htm
 Inmunologia una ciencia activa edicion 2

 Manual depracticas de inmunologia, adriana
  garibay Escobar, edicion 2006

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Inmunodifusión

  • 2. Es una técnica que se utiliza en el laboratorio para la identificación y cuantificación de cualquiera de las inmunoglobulinas. Su base se encuentra en la presencia de un precipitado visible, resultado de la combinación antígeno-anticuerpo en determinadas circunstancias.
  • 3. (Dreux 1908 - París 1985), “Doctor en Medicina en 1946 escribió algunas notas y clásicos en el que se describen las soluciones de antígenos y anticuerpos de inmunodifusión en gel de agar” Recibió premio nobel en 1984 por las teorías en cuanto a la especificidad del desarrollo y control del sistema inmune y el descubrimiento del principio para la producción de anticuerpos monoclonales.
  • 4. (Estocolmo 1914-2004) médico sueco Ouchterlony desarrollado en su tesis un nuevo método analítico para la inmunodifusión . Este método se llama a menudo el método de Ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de la inmunología durante décadas. El método se usa en todo el mundo.
  • 5. Este método fue utilizado de manera sistemática en inmunología clínica:  Determinaciones de inmunoglobulina  Determinaciones transferían.  Proteína C reactiva.  Proteína embrionaria (α-fetoproteína) se asocia con ciertos tumores hepáticos.
  • 6. se asocian con asociados con malignidad Ig G Ig G enfermedades hepáticas e induce a una perdida crónicas y mielomas . de proteínas. se asocia a infecciones Ig A Induce a una perdida crónicas, enfermedades Ig A de proteínas. hepáticas y mielomas. Deficiencia Se asocia a hepatitis, Ig M de Ig M mieloma, anticuerpos. magroglobulinemia de waldenstrom’s .
  • 7. En la mayoría de las técnicas de inmunodifusion se utiliza agarosa, la cual se prepara hirviendo lentamente los gránulos en el baño de agua.  La mayoría de los tipos de agarosa se disuelven poco mas de 90ºC y gelifican a 45ºC.  En el soporte de agarosa se coloca el antígeno y el anticuerpo (es necesario conocer uno de ellos para identificar el otro).
  • 8. Ambos migran en todas las direcciones y cuando encuentran a su contrario presentan una banda de precipitación fácilmente observable Esta técnica constituye la base común de una gran variedad de técnicas que permite realizar desde un análisis cualitativo hasta una estimación cuantitativa de un antígeno.
  • 9. Técnica que cuantifica de manera sencilla y económica inmunoglobulinas de isotipo G, M y A ó antígenos solubles (C3, C4, transferrina, proteína C reactiva) presentes en muestras biológicas.  La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico.
  • 10. La muestra biológica se introduce en los orificios cilíndricos excavados en el agar y a medida que el antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relación Ag-Ac que permite la formación precipitados visibles.  Una vez finalizada la difusión se mide el radio (R) de los precipitados que es proporcional a la concentración de antígeno (C).
  • 11. La concentración de proteína en la muestra biológica (Cx) se calcula realizando una curva de calibración utilizando muestras patrones de concentración conocida  La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico.
  • 12.  colocamos en la parte inferior del tubo un vol. de agar 1% fundido, mezclado con un vol. igual del antisuero.  Dejamos solidificar y agregamos igual vol. de agar 0,5%, dejamos solidificar.
  • 13.  Por ultimo agregamos agar 1% donde se encuentra disuelto el Ag.  Tantoel Ag. como el Ac. migrarán hacia la zona media de menor concentración, de manera que, otra vez, se formarán gradientes que harán que en determinado punto los reactivos estén en equivalencia y precipiten.
  • 14. si la concentración de Ag. y Ac. están en relaciones óptimas (equivalentes) la banda se formará en un punto intermedio del tubo, mientras que si la cantidad de Ag.  Esta en exceso necesitará recorrer una mayor distancia para alcanzar una dilución tal que se encuentre en equivalencia con el Ac. y así la banda se formará más cerca del fondo.
  • 15. Constituye un método muy completo ya que permite obtener mas información que los anteriores.  Consiste en colocar en una placa de Petri agar 1,5% al cual luego de solidificar se le realizan perforaciones en forma de pocillos a distancia conveniente y en dichas perforaciones se colocan pequeñas cantidades de Ag. y Ac.
  • 16. En este caso los reactivos difunden en forma radial a partir del pocillo generando bandas de precipitación cuyas características dependerán de varios factores.
  • 17.  Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar la existencia o no de determinantes comunes entre Ag. según las características de las bandas formadas.  cuando las concentraciones colocadas en los pocillos estén cerca de la equivalencia la banda se formará a mitad de distancia entre ellos. Nos permite tener idea de los PM de cada reactivo ya que al tratarse de una difusión radial, la concavidad de la banda estará hacia el lado del pocillo donde se halla colocado el reactivo de mayor PM, y viceversa, si ambos PM son semejantes la banda será recta.
  • 18. la posibilidad de hacer varios pocillos en una placa permite obtener información sobre similitud de los Ag. reaccionantes.  Las macromoléculas antigénicas tienen en su superficie zonas llamadas determinantes antigénicos y que son los sitios reconocidos por el Ac.
  • 19. Para determinar la relación Ag/Ac (prueba CUALITATIVA), encontramos tres patrones básicos: 1. Identidad: Los dos Ag tienen los mismo epitopos reconocidos por el suero y se forma una banda de precipitación con forma de arco continuo.
  • 20. 2. No Identidad: Los Ag son distintos y se forman bandas de precipitación independientes y no dan un arco continuo. Aparece una figura con forma de aspa.
  • 21. 3. Identidad Parcial: Los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por el suero y se forma un arco de precipitación al que le sale un espolón.
  • 22. Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar la existencia o no de determinantes comunes entre Ag. según las características de las bandas formadas.
  • 24.  http://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedi a/40399/inmunodifusi%C3%B3n  http://es.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-Tecnicas  Inmunologia diagnostico e interpretacion de pruebas de laboratorio  http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Inmunologi a.htm  Inmunologia una ciencia activa edicion 2  Manual depracticas de inmunologia, adriana garibay Escobar, edicion 2006