La inmunodifusión de Ouchterlony es una técnica desarrollada por el médico sueco Ouchterlony para identificar y cuantificar antígenos e inmunoglobulinas mediante la difusión de estas sustancias en un gel de agar y la formación de líneas de precipitación cuando el antígeno y el anticuerpo se encuentran. Esta técnica se ha utilizado ampliamente en inmunología clínica para medir proteínas como las inmunoglobulinas y ha permitido avanzar significativamente en el desarrollo de la inmun

2. Es una técnica que se utiliza en el laboratorio para la identificación
y cuantificación de cualquiera de las inmunoglobulinas.
Su base se encuentra en la presencia de un precipitado visible,
resultado de la combinación antígeno-anticuerpo en determinadas
circunstancias.

3. (Dreux 1908 - París 1985),
“Doctor en Medicina en 1946 escribió algunas notas y
clásicos en el que se describen las soluciones de
antígenos y anticuerpos de inmunodifusión en gel de
agar”
Recibió premio nobel en 1984 por las teorías en cuanto a
la especificidad del desarrollo y control del sistema inmune
y el descubrimiento del principio para la producción de
anticuerpos monoclonales.

4. (Estocolmo 1914-2004)
médico sueco Ouchterlony desarrollado en su tesis
un nuevo método analítico para la inmunodifusión .
Este método se llama a menudo el método de
Ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de
la inmunología durante décadas.
El método se usa en todo el mundo.

5.  Este método fue utilizado de manera sistemática en
inmunología clínica:
 Determinaciones de inmunoglobulina
 Determinaciones transferían.
 Proteína C reactiva.
 Proteína embrionaria (α-fetoproteína)
se asocia con ciertos tumores
hepáticos.

6. se asocian con
asociados con malignidad
Ig G
Ig G enfermedades hepáticas e induce a una perdida
crónicas y mielomas . de proteínas.
se asocia a infecciones
Ig A Induce a una perdida
crónicas, enfermedades
Ig A de proteínas.
hepáticas y mielomas.
Deficiencia
Se asocia a hepatitis, Ig M
de
Ig M mieloma, anticuerpos.
magroglobulinemia de
waldenstrom’s .

7.  En la mayoría de las técnicas de inmunodifusion se
utiliza agarosa, la cual se prepara hirviendo
lentamente los gránulos en el baño de agua.
 La mayoría de los tipos de agarosa se disuelven
poco mas de 90ºC y gelifican a 45ºC.
 En el soporte de agarosa se coloca el antígeno y el
anticuerpo (es necesario conocer uno de ellos para
identificar el otro).

8.  Ambos migran en todas las direcciones y cuando
encuentran a su contrario presentan una banda de
precipitación fácilmente observable
Esta técnica constituye la base común de una
gran variedad de técnicas que permite realizar
desde un análisis cualitativo hasta una
estimación cuantitativa de un antígeno.

9.  Técnica que cuantifica de manera sencilla y
económica inmunoglobulinas
de isotipo G, M y A ó antígenos
solubles (C3, C4, transferrina,
proteína C reactiva) presentes
en muestras biológicas.
 La técnica se basa en la difusión de la muestra
conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas
ó
antígenos solubles) en una
matriz semisólida de agar en
la que se encuentra disuelto
el Ac específico.

10.  La muestra biológica se introduce en los orificios
cilíndricos excavados en el agar y a medida que el
antígeno difunde en forma radial, se alcanza la
relación Ag-Ac que permite la formación
precipitados visibles.
 Una vez finalizada la difusión se mide el radio (R)
de los precipitados que es proporcional a la
concentración de antígeno (C).

11.  La concentración de proteína en la muestra
biológica (Cx) se calcula realizando una curva
de calibración utilizando muestras patrones
de concentración conocida
 La técnica se basa en la difusión de la muestra
conteniendo el antígeno a medir (inmunoglobulinas
ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de
agar en la que se encuentra disuelto el Ac
específico.

12.  colocamos en la parte inferior del tubo un
vol. de agar 1% fundido, mezclado con un
vol. igual del antisuero.
 Dejamos solidificar y agregamos igual vol.
de agar 0,5%, dejamos solidificar.

13.  Por
ultimo agregamos agar 1% donde se
encuentra disuelto el Ag.
 Tantoel Ag. como el Ac. migrarán hacia la zona
media de menor concentración, de manera
que, otra vez, se formarán gradientes que
harán que en determinado punto los reactivos
estén en equivalencia y precipiten.

14.  si la concentración de Ag. y Ac. están en relaciones
óptimas (equivalentes) la banda se formará en un
punto intermedio del tubo, mientras que
si la cantidad de Ag.
 Esta en exceso necesitará recorrer una mayor
distancia para alcanzar una dilución tal que se
encuentre en equivalencia con el Ac. y así la banda
se formará más cerca del fondo.

15.  Constituye un método muy completo ya que
permite obtener mas información que los
anteriores.
 Consiste en colocar en una placa de Petri agar
1,5% al cual luego de solidificar se le realizan
perforaciones en forma de pocillos a distancia
conveniente y en dichas perforaciones se colocan
pequeñas cantidades de Ag. y Ac.

16.  En este caso los reactivos difunden en forma radial
a partir del pocillo generando bandas de
precipitación cuyas características dependerán de
varios factores.

17.  Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar
la existencia o no de determinantes comunes entre
Ag. según las características de las bandas formadas.
 cuando las concentraciones colocadas en los pocillos
estén cerca de la equivalencia la banda se formará a
mitad de distancia entre ellos.
Nos permite tener idea de los PM de cada reactivo ya que
al tratarse de una difusión radial, la concavidad de la
banda estará hacia el lado del pocillo donde se halla
colocado el reactivo de mayor PM, y viceversa, si ambos
PM son semejantes la banda será recta.

18.  la posibilidad de hacer varios pocillos en una
placa permite obtener información sobre
similitud de los Ag. reaccionantes.
 Las macromoléculas antigénicas tienen en su
superficie zonas llamadas determinantes
antigénicos y que son los sitios reconocidos por el
Ac.

19.  Para determinar la relación Ag/Ac (prueba
CUALITATIVA), encontramos tres patrones básicos:
1. Identidad:
Los dos Ag tienen
los mismo epitopos
reconocidos por el
suero y se forma
una banda de
precipitación con
forma de arco
continuo.

20. 2. No Identidad:
Los Ag son distintos y se forman bandas
de precipitación independientes y no dan
un arco continuo. Aparece una figura con
forma de aspa.

21. 3. Identidad Parcial:
Los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de
ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por
el suero y se forma un arco de precipitación al
que le sale un espolón.

22. Mediante la técnica de Ouchterlony podemos
determinar la existencia o no de determinantes
comunes entre Ag. según las características de
las bandas formadas.

24.  http://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedi
a/40399/inmunodifusi%C3%B3n
 http://es.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-Tecnicas
 Inmunologia diagnostico e interpretacion de
pruebas de laboratorio
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Inmunologi
a.htm
 Inmunologia una ciencia activa edicion 2
 Manual depracticas de inmunologia, adriana
garibay Escobar, edicion 2006