Este documento describe un estudio sobre la expresión de osteoprotegerina (OPG) y factor de diferenciación osteoclástica (ODF) durante la erupción dental en ratones y ratas. Los resultados mostraron que el gen OPG se expresa en el folículo dental pero disminuye los días 3 y 5 postnatales en ratas y ratones respectivamente. La expresión de OPG se inhibe en células del folículo dental tratadas con PTHrP o CSF-1. El CSF-1 inhibe la expresión de OPG después de 12 horas de incubación. Esto sugi

1. Osteoprotegerina y Factor de Diferenciación Osteoclastica en la Erupción Dental Universidad El Bosque Biología del Movimiento Luis Lerzundy R1 Ortodoncia

2. Materiales y Métodos De la Universidad de LousianaState se escogieron Ratones Swiss-Webste Ratas HarlanSprague- Dawley Remoción de los 1 y 2 molares Inf de ratas con 6 y 7 dias de edad Remoción de los 1 y 2 molares Inf de ratones con 3 y 4 días de edad Los folículos Dentales y el Órgano del Esmalte fueron microdiseccionados seguidos por trypsinizacion. Las células del folículo fueron cultivadas y se usaron las células del quinto pasaje

3. Experimentos In vivo e In vitro In vitro Células de quinto pasaje tanto de ratas como de ratones fueron tratadas con PTHrP humano y CSF-1 humano en estudios de tiempo y dosis dependiente Para los experimentos tiempo dependiente de PTHrP se incubaron las células con una dosis de 10ng/mL durante 5 min, 30 min, 1 hry 3 hrs. Para la CSF-1tiempo dependiente misma dosis de 10ng/mL por 5min,15 min,30 min, 1hr, 3 hrs,12 hrs,24 hrs y 48 hrs Para los dosis dependiente se trataron las celulas con 1, 10, 25, 50 o 100 ng/mL de PTHrP por 30 min o 24hrs.

4. Experimentos In vivo e In vitro In vivo Los folículos dentales fueron removidos de las ratas recién nacidas y ratones acecinados los días 1,3,5,7 y 10. Seis folículos se requirieron en cada edad para proveer una suficiente cantidad de ARN para análisis en expresión de OPG

5. Aislamiento de ARN y Transcripción-Reversa/RT-PCR Un total de 2 ug de ARN fue usado para la síntesis de la primera hebra de ADNc a través de M-MLV Seleccionaron primers específicos basados en la secuencia de nucleótidos de el ADNc El ADNc fue amplificado por PCR bajo condiciones especificas Los productos de PCR fueron sometidos a electroforesis en un gel de agarosa de un 1% visualizado con bromuro de etidio

6. Inmunolocalizacion de ODF Las ratas con una edad post-natal comprendida entre el 1 y 10 días fueron acecinadas y removidas quirúrgicamente las mandíbulas, para luego fijarlas en un buffer neutro de formalina al 10% por 48 hrs a 4 grados C en 10 mM PBS y decalcificado en ac. Formico al 5% por 7 días Para la localización de ODF se uso anticuerpo policlonal de cabra-antiraton diluido en 20 ug/mL de PBS

7. Resultados El gen de OPG es expresado in vivo del folículo dental del ratón y la rata. Hay una caída relativa al tercer día postnatal en la rata y al quinto día en el ratón In vitro la expresión de OPG en el folículo dental de la rata es inhibida cuando las células son incubadas en PTHrP En las células del folículo de las ratas incubadas con CSF-1 inhibe la expresión del gen OPG En estudios tiempo dependiente muestran que el CSF-1 inhibe la expresión de OPG después de 12 hrs incubado

8. Discusiones (Simonet et al,. 1997; Yasuda et al., 1998b, 1999)Opg inhibe la formación y activación osteoclastica, una reducción en la expresión de OPG podría inhibir los osteoclastos. Consecuentemente expresión de OPG en el folículo dental o carencia podría regular la formación osteoclastica El gen de OPG también es expresado en células humanas mesenquimaticas dentales. Estudios recientes muestran transcripción de OPG presentes en fibroblastos gingivales, células del ligamento periodontal y células de la pulpa (Sakata et al., 1999) Se demostró que la hormona paratiroidea inhibe la expresión de OPG en células medulares óseas de ratones (Lee y Lorenzo, 1999)