Pensando en mañana: células madre en ginecología. Ponente: Prof. Pedro de la Fuente Pérez. Catedrático de Ginecología y Obstetricia de la Universidad Complutense de Madrid.
3. Mitosis. Después de inyección intravenosa de timidina (3H) a
primates
Padykula et al Biol Reprod 1989; 40: 681-90
4. MARCADORES de CELULAS MESENQUIMALES en ENDOMETRIO
Schwab and Gargett Human Reprod 2007; 22: 2903-11
5. Las SC están localizadas
En la capa basal
Hong et al Endoclinology 2012 April 2
as doi June (6)
Expresión de Wnt
6. INMUNO FLUORESCENCIA
del
EPITELO ENDOMETRIAL.
Expresión de 22 marcadores
moleculares
Nguyen et al Endoclinology 2012
April 2 as doi June (6)
7. ORIGEN DE LAS CELULAS MADRE DEL ENDOMETRIO
Transplante de MSC de medula ósea de varon
Cromos. Y
Ccaso nº.2
Ccaso nº.1
CONTROL
Lifoblasto X, Y
Ikoma et al Am J Obstet Gynecol 2009; 201: 608-e1-8
8. MSC de TRANSPLANTES DE MEDULA OSEA de VARON
detección del cromosoma Y en células del endometrio
Transplantada Tiempo en meses C. Epiteliales C. Estromales
Nº Transplante-Legrado XY XY
1 116 2.6% 9.2%
2 33 54% 9.8%
3 54 9.6% 8.2%
Ikoma et al Am Obstet Gynecol 2009; 201: 608-e1-8
1 132 1.07% 1%
2 30 0.5% 1.67%
3 210 0.81% 1.42%
4 116 0.85% 1.77%
5 45 0.45% 1.83%
Cervelló et al PLoS One2012; 7:):e30260. Epub 2012 Jan 19.
9. POSIBLES UTILIZACION DE SC ENDOMETRIALES
Síndrome de Asherman Nagori et al J Human Reprd Sci 2011; 4: 43-8
n
a
g
o
10. POSIBLE UTILIZACION DE LAS CELULAS MADRE
ENDOMETRIALES. Síndrome de Asherman
Gargett and Heally J Human Reprod 2011; 4: 49-52
Paciente de 33 años con síndrome de Asherman.
Tratada con adherensiolisis + DIU + Estr./Prog. 6 meses.
No respuesta a tratamiento Endomet. 3.2 mm.
Se realiza transplante inyectando bajo control ecográfico, después
de legrado, una mezcla de células. Las células fueron seleccionadas con tres
marcadores CD9, CD90 y CD133. Las células CD9 y CD90 son MSC y fibroblastos. Las
CD133 células madre endoteliares
Seguido de 4 ciclos Estr/Prog
Grosor endometrio a los 14 días 5.0 mm. después de 4 ciclos 6.9 mm.
mejora Doppler art. uterina
Se transfieren 3 embriones.
A los 15 días ßhCG positiva.
A los 8 semanas. Ecografía embrión normal
11. CD56
Marcador de superficie CD56
Moffett et al British Medical Journal 2004; 329: 1283-85
12. NUMERO DE NATURAL KILLER UTERINAS
Lee et al Clin Axp Reprod Med 2011; 38: 119-25
200
120
14. DIFERENCIAS ENTRE LAS NATURAL KILLER
BLASTOCISTO
Aumento del flujo sanguíneo
ENDOMETRIO/ DECIDUA
Interfase M/F
Remodelación de art. espir.
VEGF, PLGF, Angioprotein-2 y NKGS Migración del trofoblasto
citoquinas
IL-15 TNF-α, IL-10, GM-CSF
IL-1ß, TGF-1ß, CSF-1
IFNγ
eNK dNK
15. TRANSPLANTE de MEDULA
a
RATONAS con DEFICIT de NK
Ratones con deficiencia tglu 26.
frecuencia de NK <1%. Tienen
el 64% de perdidas fetales
A, C y E: transplantadas
B, D y F: no transplantadas
Guimond et al J Exp Med 1998; 187:217-23
19. EPITELIO de SUPERFICIE del OVARIO (albuginia) y CELULAS MADRE
Johnson et al 2004; 428: 145-50
Bromodeoxiuridine (BrdU rojo). MVH verde
20. CULTIVO de CELULAS
de la
SUPERFICIE OVARICA
Desarrollo del ovocito entre los
días 3 al 5
Cultivo de 5 días en medio DMEM-HG con rojo
fenol. a y b) células con fenotipo de ovocito
rodeadas de células de la granulosa.
Bukovsky et al Repr Biol Endocrinol 2005; 3: 17
21. Ovario de ratona C57L/6 de 7 días
7 días
20 µm 30 µm 30 µm
12 días
100 µm 40 µm 15 µm
Kerr et al Reproduction 2006; 132: 95-109 PCAN = antígeno de proliferación nuclear celular
22. Ovario de ratones C57L/6 recuento de folículos
F. Antrales
3500
F. Primarios
3000
Primordiales
con ovocito
número / ovario
2500
2000
1500
1000
500
0
7 12 50 100 200
días postnacimiento
Kerr et al Reproduction 2006; 132: 95-109
23. GENERACION de OVOCITOS a PARTIR
de
CELULAS de MEDULA OSEA
Ciclofosfamida + Bisulfan
60 días Ovario sin
folículos
Injerto med. Ósea
60 días
Johnson et al Cell 2005; 122:303-15
24. ¿Existen células madre adultas en el ovario
procedentes de medula ósea?
Ratona creando Análisis de sangre
circulación quimera
sistémica común Superovulación de
la pareja
Análisis de
ovocitos
Unió durante fluorescentes
6 a 8 meses
Eggan et al Nature 2006; 241: 1109-14
25. ¿Existen células madre adultas en el ovario procedentes de medula ósea?
Quimioterapa con Parabiosis con Análisis de
Ciclofamida y compañera no sangre hemat.
fulfamida tratada con GFP
Superovulación Fluorescentes
de ambas
Ovocitos
fluorescentes
Parabiosis Unidas 2
a las 24 h. sem. a 4
quimiot. meses
Eggan et al Nature 2006; 441: 1109-14
26. Ratonas FORKO tratadas con transplante de medula ósea
ausencia de receptores FSH
Antes del transplante de medula ósea Después del transplante de medula ósea
Ghadami et al PloS One 2012: 7: e32462 Epub 2012 Mar 7
27. HORMONAS ANTES y DESPUESLES del TRANSPLANTE de MEDULA
En ratas FORKO (recptores FSH negativos)
ng/ml F S H en suero pg/ml E2 en suero
P<0.03 P<0.03
P<0.03 P<0.03 P<0.03
70 70
P<0.02
P<0.03
P<0.04 P<0.05
50 50
P<0.05
30 30
10 10
Ghadami et al PloS One 2012: 7: e32462 Epub 2010 Mar 7
29. RECUPERACION de la FETILIDAD DESPUES Enf. MALIGNA
Niña con anemia de Fanconi.
Tratada con radioterapia + Ciclofosfamida.
Transplante de medula ósea.
6 años después tiene sus reglas
A los 20 años embarazo. Niña viva
Veitia et al sten Cell 2007; 25: 1334-5
30. RECUPERACION de la FETILIDAD DESPUES Enf. MALIGNA
Niña con anemia de Fanconi.
Tratada con radioterapia + Ciclofosfamida.
Transplante de medula ósea.
6 años después tiene sus reglas
A los 20 años embarazo. Niña viva
Pruebas biológicas de la madre
Veitia et al sten Cell 2007; 25: 1334-5
31. RECUPERACION de la FETILIDAD DESPUES de CANCER
Hipótesis de dos tipos de SC
Bhartiya et al Obstet Gynecol Int 2012. Epub 2012 Apr 2
33. CULTIVO de CELULAS GERMINALES ADULTAS
BrdU
Células progenitoras femeninas aisladas por
inmuno magnetismo y con alta actividad
telomerasa cultivadas mas de 6 meses
BrdU + DAPI
105
BrdU + DAPI
1 año
7 semanas
Zou et al Nat Cell Biol 2009; 11: 631-6
34. CULTIVO de CELULAS GERMINALES ADULTAS
transplante a ratonas esterilizadas con bisulfan y ciclofosfamida
GFP
Oct DA
4 PI
Transplante intraovárico
Zou et al Nat Cell Biol 2009; 11: 631-6
35. CULTIVO de CELULAS GERMINALES ADULTAS
Transplante a ratones infértiles
Zou et al Nat Cell Biol 2009; 11: 631-6
37. GENERACION DE OVOCITOS HUMANOS EN TEJIDO OVARICO
Después del xerotransplante Antes del xerotransplante
White et al Nat Med 2012; 18:413-21
38. Mouse OSCs generate functional eggs after intraovarian transplantation
Recibieron OSCs con expresion de GFP entre 5 y 6 meses antes
White et al Nat Med 2012; 18:413-21
39. Células adultas
generadoras ovocitos
Criopreservación en
banco con o sin Expandir Célula Madre
expansión transplantarla en ovario
Aumenta el nº de
procedimientos para
FIV
Maduración in vitro
de células madre
Ovocitos para FIV
Incremento del la reserva
ovárica