modelo de diapositivas de tesis

1. PATROCINADOR: Gustavo A. Gutierrez, Ph.D.
Co-Patrocinador: F. Abel Ponce de León B. Ph.D.
ALUMNA: Blga. Mayra Nohelia Mendoza Cerna
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA
ESCUELA DE POSGRADO – MAESTRIA EN PRODUCCIÓN
ANIMAL
“MAPA FISICO DE MARCADORES
MOLECULARES Y GENES DE ALPACA
(Vicugna pacos) MEDIANTE LA TECNICA
DE HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE in situ
(FISH)”

2. INTRODUCCIÓN
 La Alpaca (Vicugna pacos), es un camélido nativo de América del
Sur perteneciente a la familia Camelidae, es una especie
domesticada, adaptada a las condiciones de clima de los Andes
(4000 – 5000 msnm).
 Perú, 83% de población mundial. Mayor Exportador de fibra.

3. JUSTIFICACIÓN
 No existe un mapa físico y/o genético de polimorfismo de
nucleótido simple (PNSs) y genes candidatos para
características productivas importantes en alpacas.
 Identificar y mapear PNSs para aplicar selección genómica.
 Mapear genes candidatos ya reportados en asociación a
características como el color y diámetro de fibra, y poder
asociarlo con PNSs, también contribuirá a implementar la
selección asistida por marcadores en alpacas.

4. OBJETIVOS
Objetivo General
 Desarrollar un mapa físico de grupos de marcadores ligados de
polimorfismo de nucleótido simple (PNSs) y genes candidatos
para características de diámetro y color de fibra de alpaca,
basado en la localización física a nivel de cromosomas,
mediante la técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH).
Objetivos Específicos
 Estandarizar un protocolo de cultivo de linfocitos de alpaca.
 Asignar PNSs y genes candidatos para características de
diámetro y color de fibra a regiones cromosómicas mediante
FISH

5. HIPÓTESIS
 Los marcadores moleculares de polimorfismo de nucleótido
simple (PNS) y genes candidatos para características de
diámetro y color de fibra, podrán ser asignados a regiones
cromosómicas, y localizados físicamente mediante la técnica
de Hibridación fluorescente in situ (FISH).

6. METODOLOGÍA
Técnica FISH para el
mapeo de PNSs y
genes
Búsqueda de
genes
candidatos
relacionados a
diámetro y
color
Identificació
n de PNSs a
mapear
Cultivo
de
linfocitos
de alpaca
1.
2.
3.

7. 1. Estandarización de protocolo de
cultivo de linfocitos de Alpacas
TOMA DE MUESTRA, COLECTA DE SANGRE
Identificación del Animal
Limpieza del área y
punción
Movilización de la
muestra al laboratorio.
PREPARACIÓN DEL CULTIVO CELULAR
Incubación 37° x 72h
Agregar timidina
– inc. 17h más
Lavados y
centrifugados –
AGREGAR BrdU
5 ½ horas
después agregar
COLCEMID
1 ½ horas
después se
agrega KCl y se
fija en carnoy
Centrifugaciones
y goteo en
láminas.
4 alpacas (2 hembra, 2
machos).
Sangre periférica

8. RESULTADOS
PREVIOS
Aumento 40x Vicugna pacos
Lugar: Rigoranch – UNALM / Laboratorio de Citogenética -
UNMSM
Supervisión: Dr. Jaime Descailleaux, Blga. Margarita Velásquez,
Dr. Abel Ponce de León, Dr. Gustavo Gutierrez
Fecha: 12/12/2016 – 16/12/2016

9. 2. Identificación de PNSs y genes a mapear
PNSs:
Reportados en el
proyecto.
GENES:_Búsqueda
de bibliografía/
Secuencias en NCBI
Diseño primers overgo:
Spling.
Diseño de cebadores:
Primer3.
“Establecimiento de un mapa físico preliminar
de marcadores moleculares de Polimorfismo
de Nucleótido Simple (SNP) en Alpaca
(Vicugna pacos) en base a información
obtenida con un chip de Bovinos (Bovine HD
Genotyping Beadchip)”

10. Resultados previos
RESULTADOS
PREVIOS

11. 3. Asignación de genes y PNSs a regiones
cromosómicas mediante FISH
Rodriguez Martinez et al, 2013.
PREPARACIÓN DE LA
SONDA
Cultivo
bacteriano
Marcación
radioactiva
PCR
SONDA
MARCAJE DE LA SONDA
BAC – CHORI
246
DUTP nick
translation
Denaturación
HIBRIDACIÓN Y LAVADO
Sonda sobre
lamina a 37°
Tinción con
DAPI
Sellar con PPD-
11

12. ACTIVIDADES FUTURAS
 Diseño de cebadores overgo, y primers.
 Entrenamiento en uso de la técnica FISH en el “Molecular
Cytogenetics and Genomics Laboratory” de la Universidad Texas A&M
 Acceso a biblioteca BAC y filtros representativos para identificar y
aislar los clones BAC a localizar por FISH.
 Implementación de técnica FISH en la UNALM.

13. AGRADECIMIENTOS Y
COLABORADORES
 FONDECYT Convenio 215-2015: “Establecimiento de un mapa físico preliminar de
marcadores moleculares de Polimorfismo de Nucleótido Simple (SNP) en Alpaca
(Vicugna pacos) en base a información obtenida con un chip de Bovinos (Bovine HD
Genotyping Beadchip)”.
 Convenio VLIR-UNALM, Proyecto “Investigación en Sistemas Agrarios”, Subproyecto
“Mejorando los sistemas de producción de alpacas en pastizales de la Sierra Central
del Peru”

14. Gracias por su
atención

15. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
 AVILA, F; BAILY, M; PERELMAN, P; DAS, P; PONTIUS, J; CHOWDHARY, R; OWENS, E;
JOHNSON, W; MERRIWETHER, D; RAUDSEPP, T. 2014b. A Comprehensive Whole-Genome
Integrated Cytogenetic Map for the Alpaca (Lama pacos). Cytogenet Genome Res 2014;
144:193–204.
 BERTOLINI, F; ELBELTAGY, A; PONCE DE LEON, FA; GUTIÉRREZ, GA; ROTHSCHILD, MF.
2016. Applicability of using bovine, ovine and caprine SNP chips for alpaca and dromedary
genomic studies. ISAG P4013.
 FARRAR, K; DONNISON, IS. 2007. Construction and screening of BAC libraries made from
Brachypodium genomic DNA. Nature protocols vol.2 no.7.
 FERNANDEZ, D; 2015. Búsqueda de genes relacionados a la síntesis de la fibra y marcadores
SSR en los ESTs de piel de alpaca Vicugna pacos. Tesis Blg. Genética y Biotecnología. Lima,
Perú, UNMSM.
 RAUDSEPP, T; CHOWDHARY BP. 2008. FISH for Mapping Single Copy Genes. Methods Mol
Biol. 422:31-49.