Augm Poster

La crianza de camélidos sudamericanos constituye una actividad económica de suma importancia para el desarrollo social y económico de las comunidades andinas del Noroeste argentino. De ello se aprovecha la carne y la fibra. La fibra de los camélidos se clasifica como fibra textil de origen animal de naturaleza proteica y es considerada dentro de las fibras textiles especiales. En particular, la fibra de vicuña es muy codiciada por ser la fibra animal más fina del mundo con altísimo valor comercial. Entre los camélidos sudamericanos silvestres, la vicuña está protegida por convenios internacionales por el “peligro de su extinción”; así gracias a un buen proyecto de conservación, la población de vicuñas aumentó y ha cambiado su estatus a “vulnerable”. Debido a ello, su aprovechamiento se basa solo en la obtención de la fibra mediante esquila. La calidad de fibra de vicuña ha sido evaluada en cuanto a sus parámetros físico-químicos, tales como grosor, largo de mecha, resistencia al lavado. Sin embargo, no existen estudios a nivel molecular tendientes a identificar los genes responsables de la calidad de la fibra de esta especie. En otras especies de animales productores de fibra como la oveja, se han identificado genes con herencia mendeliana para muchos caracteres importantes de la lana; siendo de particular importancia los genes que influyen en la pigmentación y la morfología de la fibra de la lana, en la que están involucradas proteínas tales como algunos tipos de queratinas. OBJETIVO GENERAL: Identificar genes que estén relacionados con la calidad de la fibra de vicuña. OBJETIVO ESPECÍFICO: Optimizar una técnica de obtención de ARN de células de folículos pilosos de vicuñas, con el fin de detectar secuencias de genes expresados. Muestras de pelos arrancados provenientes de distintos animales que conservan células del folículo piloso en la raíz. ABRA PAMPA - JUJUY Tubos estériles con solución de lisis para extracción de ARN (Tri-Reagent, MRC) Las muestras se mantuvieron en hielo hasta la llegada al laboratorio en Tucumán, donde fueron almacenadas a -70ºc INTRODUCCIÓN OBJETIVOS MATERIALES Y MÉTODOS 15 min Resuspender en 10 ul de H2O libre de RNA sas 0,2 vol de cloroformo. Incubar 5 min en hielo 3000 rpm 5 min 10000 rpm 15 min Recuperar fase acuosa 1 vol. de isopropanol. Incubar 10 min en hielo Descartar el sobrenadante Lavar con Etanol 75% 15000 rpm Se realizaron grupos de cuatro muestras de ARN provenientes de distintos individuos. Se purificó ARNm mediante un kit (GenElute Direct Mrna miniprep kit, Sigma) EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL Incubar a 42ºC 60 min. Desnaturalizar la Transcriptasa reversa a 94ºC 2 min. Buffer de la enzima (5 x) DNTPs 0.83 mM, c/u ADNc M-MLV RT 200 U Desnaturalización del ARN con 25 pmol de oligo dT (70 ºC, 5 min.) Enfriar en hielo Síntesis de ADNc RT-PCR en condiciones poco restrictivas Cebador V01 ACCACACCTTCCACTTCCTG Amplificación de fragmento de β actina Clonado y Secuenciación de fragmentos amplificados Los productos generados por RAP-PCR fueron ligados al vector PGEM T easy vector. Posteriormente se realizó la transformación de bacterias competentes obtenidas de la cepa DH5 α de Escherichia coli . Las secuencias fueron comparadas con otras secuencias existentes en las bases de datos de secuencias de nucleótidos y de proteínas disponibles en NCBI. Se utilizó el algoritmo BLAST y el programa Multalin. RESULTADOS TABLA 1: Similitudes entre fragmentos de ADNc obtenidos a partir de células del folículo piloso de vicuña y secuencias conocidas de las bases de datos consultadas. Longitud: cantidad de nucleótidos secuenciados (nt) Secuencias DISCUSIÓN ,[object Object],[object Object],[object Object],PROYECCIONES ,[object Object],[object Object],AGRADECIMIENTOS: Agradecemos al personal del INTA de Abra Pampa por su colaboración en el manejo de vicuñas durante la toma de muestras, y a las siguientes instituciones, que financiaron este trabajo: BANCO SANTANDER-RIO/UNIVERSIA y Agencia de Promoción Científica y Tecnológica. DETECCIÓN DE SECUENCIAS DE ADNc EN FOLÍCULOS PILOSOS DE VICUÑAS AUTORES: Daniela C. Garcia, Andrea E. Longo DIRECTORES: Mariela Roldán Olarte, Pablo A. Valdecantos y Dora C. Miceli Cátedra de Biología Celular y Molecular, Instituto de Biología de la Fac. de Bqca. Qca. y Fcia. de la UNT, Dep. de Biología del Desarrollo del INSIBIO La síntesis de ADNc fue comprobada mediante la amplificación con cebadores específicos para  actina. Alineamiento global entre secuencias clonadas y sus homólogas dani.c.garcia@gmail.com, emroldanolarte@fbqf.unt.edu.ar Clon BAC RP11-801O14 de Homo sapiens (AC092546.4) 688 V01-2 Extremo 3´ de ADNc 592589 MARC 6BOV de Bos taurus (CB419712.1) 874 V01-3 Extremo 3´del gen codificante de proteína hipotética “IQ motif containing F4” de Bos taurus (LOC785925) 629 V01-1 Extremo 5´de ADNc NT2RP3 de Homo sapiens (DA735974) 783 V01-4 Secuencias homólogas (código de acceso) Longitud (nt) Fragmento de ADNc 12000 rpm 15 min 500 pb FIGURA 2: Electroforesis en gel de agarosa al 1,5 %, de productos de amplificación generados mediante RT-PCR en condiciones poco restrictivas con el cebador V01. 1: Marcador de peso molecular (MP), 2: fragmentos amplificados. Se observan cinco bandas correspondientes a fragmentos de amplificación. Amplificación al azar de fragmentos de genes expresados 500 pb FIGURA 3: Electroforesis en gel de agarosa de productos de amplificación obtenidos mediante PCR de un lisado de células provenientes de 4 colonias distintas empleando el cebador V01 a una temperatura de hibridación de 55ºC. Cada colonia posee un fragmento clonado de diferente talla. MPM: Marcador de peso molecular de 100 pb, Col.: colonias 1, 2, 3 y 4. MPM col.1 col.2 col.3 col.4 Clonado FIGURA 1: Electroforesis en gel de agarosa de productos de ADNc amplificados por PCR, con cebadores de β actina. 1: Marcador de peso molecular (MP), 2: Muestra 1, 3: Muestra 2. 1 2 3 500 pb β actina aprox 250 pb Aislamiento de ARN y síntesis de ADNc 94  C 55  C 35  C 1´ 30 ciclos 72  C 94  C 10 ciclos 1´ 30´ 1´ 10´ 1´ 30´´ 1´ 72  C  4  C 94  C 72  C V01-1 V01-2 V01-3 V01-4

Augm Poster

Recomendados

Recomendados

Más contenido relacionado

La actualidad más candente

La actualidad más candente (20)

Similar a Augm Poster

Similar a Augm Poster (20)

Último

Último (20)

Augm Poster