Procedimientos de tincion y montaje

1. TINCION Y MONTAJE
ESTUDIANTE : EMMANUEL F. MEJIA VILLEGAS
CARRERA : TEC. SUPERIOR LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLOGICA

2. ¿QUÉ ES TINCION?
UN COLORANTE O TINCION SE DEFINE COMO UNA SUSTANCIA CAPAZ DE DAR COLOR A
CÉLULAS, TEJIDOS, FIBRAS, ETCÉTERA, SON SALES NEUTRAS QUE TIENEN RADICALES
TANTO ÁCIDOS COMO BÁSICOS, POR LO QUE PUEDEN SER ÁCIDOS BÁSICOS Y NEUTRAS
LOS COLORANTES TIENEN LAS SIGUIENTES FUNCIONES:
 PERMITEN HACER VISIBLES A LOS OBJETOS MICROSCÓPICOS Y TRANSPARENTES.
 REVELAN SU FORMA Y TAMAÑO.
 MUESTRAN LA PRESENCIA DE ESTRUCTURAS INTERNAS Y EXTERNAS
 PRODUCEN REACCIONES QUÍMICAS ESPECÍFICAS.

3. TIPOS DE COLORANTES
COLORANTES ACIDOS
SON SALES NEUTRAS CUYA PROPIEDAD COLORANTE ESTA EN EL
RADICAL ACIDO, TIENEN CARGA NEGATIVA.
TIÑEN LAS ESTRUCTURAS DE COLOR ROJO A ROSADO Y ESTAS
ESTRUCTURAS SE LO DENOMINAN ACIDOFILAS EJ. EL
CITOPLASMA, FILAMENTOS CITOPLASMATICOS, FIBRAS
EXTRACELULARES
EJEMPLOS DE COLORANTES ACIDOS
EOSINA, FUCSINA ACIDA, NARANJA G ETC.

4. • COLORANTES BASICOS
• SON SALES NEUTRAS CUYA PROPIEDAD COLORANTE ESTA EN EL
RADICAL BASICO, TIENEN CARGA POSITIVA
• TIÑEN LAS ESTRUCTURAS DE COLOR AZUL O MORADO Y ESTAS
ESTRUCTURAS SON LLAMADOS BASOFILAS EJ. EL NUCLEO,
ACIDOS NUCLEICOS (ADN,ARN) GRUPOS CARBOXILO DE LAS
PROTEINAS ETC.
• EJEMPLOS COLORANTES BASICOS
• HEMATOXILINA, AZUL DE METILENO, AZUL DE TOLUIDINA,
SAFRANINA ETC

5. CLASIFICACION DE LAS COLORACIONES:
• COLORACIÓN DIRECTA O SUSTANTIVA:
• SE DENOMINA ASÍ CUANDO LA CÉLULA Y EL TEJIDO SE TIÑEN AL
PONERSE EN CONTACTO CON LA SOLUCIÓN COLORANTE, EL
RESULTADO INDICA UNA VERDADERA AFINIDAD ENTRE EL TEJIDO Y
EL COLORANTE.
• COLORACIÓN INDIRECTA O ADJETIVA:
• SE DENOMINA ASÍ CUANDO PARA LA COLORACIÓN SE NECESITA EL
EMPLEO DE SUSTANCIAS INTERMEDIARIAS QUE FACILITEN LA
ADHESIÓN DEL COLORANTE EN LAS ESTRUCTURAS TISULARES. LA
SUSTANCIA INTERMEDIARIA SE LLAMA MORDIENTE Y LA
COMBINACIÓN ENTRE EL MORDIENTE Y EL COLORANTE SE

6. • COLORACIÓN PROGRESIVA:
• SE DENOMINA ASÍ CUANDO LOS TEJIDOS SE PONEN EN CONTACTO
CON LA SOLUCIÓN COLORANTE PARA QUE, CONFORME
TRANSCURRE EL TIEMPO DE COLORACIÓN, EL TEJIDO, DE MANERA
PROGRESIVA, ALCANCE LA INTENSIDAD DE LA TINCIÓN DESEADA.
• COLORACIÓN REGRESIVA:
• EN ESTE CASO LOS TEJIDOS SE SOBRE COLOREAN PARA
SOMETERLOS DESPUÉS A UNA SUSTANCIA DENOMINADA
DIFERENCIADOR ESTE EXTRAE PARTE DEL COLORANTE Y CON EL
MICROSCOPIO SE DETIENE CUANDO SE ENCUENTRA LA
COLORACIÓN DESEADA.

7. • COLORACIÓN SIMPLE:
• ES EL PROCEDIMIENTO DONDE SE UTILIZA UN SOLO
COLORANTE PARA TEÑIR AL COMPONENTE CELULAR O TISULAR.
• COLORACIÓN COMPUESTA O COMBINADA:
• CONSISTE EN LA APLICACIÓN, A UNA MUESTRA DE TEJIDO U
ÓRGANO, DE VARIOS COLORANTES CON LA FINALIDAD DE
DESTACAR, MEDIANTE COLORES DIFERENTES, ESTRUCTURAS
ESPECÍFICAS QUE FORMAN PARTE DE ELLA

8. • COLORACIÓN ORTOCROMÁTICA:
• ES LA ACCIÓN DE TINCIÓN QUE EJERCE UN COLORANTE AL
COLOREAR UNA DETERMINADA ESTRUCTURA CON SU PROPIO
COLOR. LA MAYORIA DE LOS COLORANTES PRODUCE UNA
COLORACIÓN ORTOCROMÁTICA.
• COLORACIÓN METACROMÁTICA:
• ES LA TINCIÓN EN LA CUAL, UN COLORANTE ADEMÁS DE CEDER
SU PROPIO COLOR A UNA ESTRUCTURA CELULAR O TISULAR
TAMBIÉN TIÑE DE COLOR DISTINTO A OTRAS ESTRUCTURAS

9. TINCION DE HEMATOXILINA -EOSINA
(H&E)
LA COLORACIÓN DE HEMATOXILINA
- EOSINA SE CONSIDERA COMO LA
TÉCNICA DE TINCIÓN DE USO MÁS
FRECUENTE EN EL ESTUDIO DE
CÉLULAS Y TEJIDOS, A TRAVÉS DEL
MICROSCOPIO
TINCIÓN HISTOLÓGICA GENERAL
JUNTO CON EOSINA.
TIÑE ESPECÍFICAMENTE NÚCLEOS,
ÁCIDOS NUCLEICOS (AZUL) Y
ESTRUCTURAS BASOFÍLICAS:
RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO
RUGOSO O ERGASTOPLASMA (AZUL)
Y
MITOCONDRIAS

10. • EOSINA
• TINCIÓN HISTOLÓGICA
GENERAL JUNTO CON
HEMATOXILINA.
• TIÑE PROTEÍNAS Y
ESTRUCTURAS CON AFINIDAD
POR LOS ÁCIDOS EN
DIFERENTES TONOS DE ROJO:
FIBRAS ELÁSTICAS (ROSA),
FIBRAS RETICULARES (ROSA)

11. • LA TINCION CON HEMATOXILINA. AUNQUE HAY UNA TINCION
GLOBAL DE LA MUESTRA. LOS COMPONENTES Y LAS ESTRUCTURAS
QUE TIENEN UNA ALTA AFINIDAD POR EL COLORANTE SE TIÑEN CON
MAYOR INTENSIDAD (P. EJ., EL ADN NUCLEAR Y LAS ÁREAS DE LA
CÉLULA QUE CONTIENEN ARN CITOPLASMÁTICO
• LA EOSINA (LA CONTRATINCION) TAMBIÉN TIENE UN EFECTO DE
TINCIÓN GLOBAL CUANDO SE USA SOLA. SIN EMBARGO, SE APRECIA
QUE EL NÚCLEO ES MENOS VISIBLE QUE EN LA MUESTRA TEÑIDA SOLO
CON HEMATOXILINA.

12. EL PROCEDIMIENTO DE COLORACIÓN DE H & E
1. DESPARAFINAR LOS CORTES EN - XILOL – 3- 7 MINUTOS X 3
2. HIDRATAR LOS CORTES EN BAÑOS DECRECIENTES DE ALCOHOL
- AGUA CORRIENTE-5 MINUTOS. - AGUA DESTILADA (2
BAÑOS)-1 MINUTO (CADA UNO)
3. 3. COLOREAR CON LA SOLUCIÓN DE HEMATOXILINA. EN ESTE
PASO ES CONVENIENTE RESPETAR EL TIEMPO DE COLORACIÓN
QUE RECOMIENDA CADA TIPO DE SOLUCIÓN DE HEMATOXILINA.
DEPENDIENDO DE LA FÓRMULA DE PREPARACIÓN EL TIEMPO
PUEDE VARIAR DE 3 A 20 MINUTOS.
4. LAVADO EN AGUA DESTILADA (2 BAÑOS)-UN MINUTO CADA
UNO.
5. COLOREAR CON UNA SOLUCIÓN DE EOSINA 3 A 5 MINUTOS
6. DESHIDRATAR EN BAÑOS CRECIENTES DE ALCOHOL ETÍLICO POR
3 BAÑOS
7. MONTAJE

13. OTRAS TINCIONES ESPECIALES
• PAS (ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF)
• SE USA CON FRECUENCIA PARA
MEMBRANA BASAL, FIBRAS
RETICULARES
• DETECCIÓN DE CARBOHIDRATOS.
• TIÑE ESPECÍFICAMENTE GLUCÓGENO
Y OTROS CARBOHIDRATOS
(MAGENTA).

14. PROCEDIMIENTO PAS (ÁCIDO PERYÓDICO DE
SCHIFF)
5 MIN EN H2O DESTILADA
 SOLUCION “A” ÁCIDO PERYÓDICO AL 0.5 % DURANTE 5- 10 MIN
 2 MIN LAVADO EN H2O DESTILADA
SOLUCION “B” REACTIVO DE SCHIFF DURANTE 15-30 MIN (EL TIEMPO
DEPENDE DE LA TEMPERATURA)
2 MIN LAVADO EN H2O DESTILADA
 3-5 MIN EN HEMATOXILINA
5 MIN EN AGUA CORRIENTE
5 MIN EN H2O DESTILADA
MONTAJE

15. TINCIÓN TRICRÓMICA DE MASSON
• TINCIÓN TRICRÓMICA.
• SE USA CON FRECUENCIA PARA TEJIDO
CONJUNTIVO.
• TIÑE ESPECÍFICAMENTE CARTÍLAGO, EL
COLÁGENO Y EL HUESO (AZUL/VERDE)
FIBRAS MUSCULARES Y QUERATINA
(ROJO), Y LOS NÚCLEOS APARECEN EN
MARRÓN O NEGRO

16. PROCEDIMIENTO TRICRÓMICA DE MASSON
3 MIN EN AGUA DESTILADA
SOL. BOUIN 7-15 MIN O ESTUFA A 10 MIN
 2 MIN LAVADO H2O DESTILADA
5 MIN EN HEMATOXILINA FÉRRICA DE WEIGERT (10 MIN SI EL COLORANTE LLEVA MÁS DE 5
DÍAS HECHO).
2 MIN LAVADO H2O DESTILADA
FUCSINA ÁCIDA 7-10 MIN
2 MIN LAVADO H2O DESTILADA
ACIDO FOSFOTUNSTICO 8 – 10 MIN
AZUL DE ANILINA 4-6 MIN
2 MIN LAVADO H2O DESTILADA
ACIDO ACETICO 1% DE 3-5 MIN
2 MIN LAVADO H2O DESTILADA
DESHIDRATADO RAPIDO EN SOLUCIONES DE ALCOHOL DE GRADUACION CRECIENTE
MONTAJE

17. TINCIÓN ROJO CONGO
• TINCIÓN PARA PROTEÍNAS. SE
UTILIZA CON
HEMATOXILINA/EOSINA EN
PATOLOGÍA CUANDO SE BUSCA
AMILOIDE. TIÑE EL AMILOIDE DE
UN INTENSO COLOR ROJO.

18. PROCEDIMIENTO ROJO CONGO
• H2O DESTILADA 3 MIN
• SUMERJA ROJO CONGO 30 – 45 MIN
• SUMERJA EN HIDROXIDO DE SODIO 1 % 15- 20 SEG
• ENJUAGUE H2O DESTILADA
• SUMERJA EN HEMATOXILINA 3 MIN
• DESHIDRATAR EN ALCOHOL 3 CAMBIOS DE 1 MIN
• ACLARAR XILENO 3 CAMBIOS 1 MIN
• MONTAJE

19. EL AZUL DE TOLUIDINA
• ES UN COLORANTE QUE SE USA
PARA TINCIONES RÁPIDAS EN
HISTOLOGÍA
• . ES MUY FÁCIL DE PREPARAR Y EL
TIEMPO DE TINCIÓN ES MUY CORTO,
ADEMÁS, PRODUCE UNA REACCIÓN
METACROMÁTICA, ES DECIR, ES
CAPAZ DE DAR COLOR DIFERENTE A
DIFERENTES ESTRUCTURAS.

20. PROCEDIMIENTO AZUL DE TOLUIDINA
• SUMERGIR EN H20 DESTILADA 3 MIN
• SUMERGIR SOLUCION DE TOLUIDINA 2- 3 MIN
• VIRAR H20 CORRIENTE
• DEJAR SECAR MONTAR

21. PRINCIPIOS DEL MÉTODO DE PAPANICOLAOU
• TINCIÓN DEL NÚCLEO
• LA HEMATOXILINA POSEE CARGA POSITIVA
QUE SE UNE A LOS GRUPOS FOSFATOS DEL
ADN Y ARN LOS CUALES TIENEN CARGA
NEGATIVA
• A TRAVÉS DE ESTA REACCIÓN SE EXPLICA
SU AFINIDAD POR LA CROMATINA
NUCLEAR, LA CUAL SE TIÑE DE COLOR
AZUL A VIOLETA OSCURO.
• TINCIÓN DEL CITOPLASMA
• EL ORANGE G ES UN COLORANTE ÁCIDO
MONOCROMÁTICO PROTEICO DE COLOR
• AMARILLO-ANARANJADO. COLOREA LAS
CÉLULAS MADURAS Y QUERATINIZADAS,
• PENETRA RÁPIDAMENTE TIÑE DE COLOR
NARANJA BRILLANTE CON DIFERENTE

22. EA-50
• El colorante EA está formado por Eosina y Light
Green
• La Eosina EA-50 es una solución policroma que
permite diferenciar el epitelio escamoso simple,
contiene colorante verde luz, café Bismark, y es
el ácido fosfotúngstico presente en esta solución
• Quien determina la coloración del citoplasma,
porque actúa como mordiente uniendo el verde
luz con las proteínas de las células.
• Tiñe aquellas células que son metabólicamente
activas como las parabasales, intermedia,
columnares, histiocitos y leucocitos.

23. PROCEDIMIENTO DE PAPANICOLAOU
ETANOL 20- 25 MIN
ENJUAGUE H2O
SUMERGIR EN HEMATOXILINA 2 -3 MIN
ENJUAGUE H2O (VIRAR)
SUMERGIR EN ORANGE G 2 MIN
EMJUAGUE EN ALCOHOL X 2 X 1 MIN
SUMERGIR EN EA -50 2 MIN
ENJUAGUE EN ALCOHOL X 2 X 1 MIN
XILOL 1 MIN
MONTAJE

24. MONTAJE
• CONCLUIDO EL PROCESO DE LA TINCIÓN DE LOS
CORTES, ÉSTOS SE DEBEN COLOCAR EN CONDICIONES DE
PROTECCIÓN Y DE PODERLOS UTILIZAR INFINIDAD DE
VECES SIN QUE SE DETERIOREN.
• PARA ALCANZAR TALES PROPÓSITOS SE RECURRE AL
ÚLTIMO PROCEDIMIENTO QUE ES EL MONTAJE

25. • ESTE PROCEDIMIENTO CONSISTE EN COLOCAR
ENCIMA DEL CORTE COLOREADO UNA GOTA DE
UNA SUSTANCIA ADHERENTE, DILUIDA,
GENERALMENTE EN XILOL (RESINA NATURAL
COMO EL BÁLSAMO DE CANADÁ O RESINAS
SINTÉTICAS
• ESCOGER EL CUBRE OBJETOS CON EL TAMAÑO
DESEADO
• RUEDE EL CUBRE OBJETOS SOBRE LA LAMINA PARA
EXPULSAR EL AIRE ATRAPADO
• LIMPIE EL EXCESO DE MEDIO DE MONTAJE DE LOS
BORDES
• CON GASA HUMEDECIDA EN EL SOLVENTE