1. Histoquímica
Dr. Giovanni Arnoldo Molina Paredes
Residente de Primer Año de Patología
Agosto 2012

2. Introducción.
 Las imágenes producidas por absorción, en
preparaciones coloreadas, son mucho más
fáciles de interpretar que las imágenes de
difracciones dada por preparaciones no
coloreadas.
 Los diversos elementos de los tejidos poseen
más o menos el mismo índice de refracción,
lo que hace que el reconocimiento sea una
tarea difícil.
 Estos dos argumentos hacen comprender la
necesidad de las coloraciones para el
estudio morfológico de células y tejidos.

3. Introducción.
 Coloración: es el proceso mediante el
cual un cuerpo es teñido por una
sustancia colorante, sin perder el color
cuando es lavado con el disolvente
utilizado al preparar la solución colorante.

4. Introducción.
 Colorantes: reciben esta denominación las
sustancias que pueden conferir color a otros
cuerpos. poseen tres componentes
importantes: un esqueleto incoloro, que
normalmente es un anillo aromático de
benceno, al cual se le unen dos tipos de
radicales: uno que aporta el
color, denominado cromóforo, y otro que
posibilita la unión a elementos del tejido
denominado auxocromo. Al conjunto de
estos tres elementos unidos en una molécula
se denomina cromógeno.

5. Introducción.

6. Introducción.
 Las coloraciones pueden ser:
 Ortocromáticas: los tejidos adquieren un
color igual al de la solución colorante
empleada.
 Metacromáticas: una sustancia o un
componente celular se tiñe con un color
diferente al del colorante empleado.

7. Introducción.
 Métodos de coloración:
 Coloración directa: existe verdadera afinidad entre el
colorante y el objeto.
 Coloración indirecta: requiere intervención de intermediarios
o mordientes.
 Coloración progresiva: se hace actuar el colorante hasta que
llegue a su punto óptimo.
 Coloración regresiva: se realiza primero una sobrecoloración y
luego se elimina el resto del colorante por medio de
diferenciadores.
 Coloración simple: se colorean solamente algunos elementos
del preparado.
 Coloración combinada: se tiñen elementos nucleares y
citoplasmáticos.
 Coloración panóptica: coloración combinada realizada
sucesivamente por colorantes neutros.
 Coloración pancrómica: en un solo baño colorante actúan
todos los colorantes neutros que se necesiten.

8. Batería de coloración H-E.
 Desparafinar los cortes con dos
baños de xileno de 10 a 15 min.
c/u.
 Eliminar el solvente por sucesivos
baños en alcohol de 100°, 96°, 70°
de 1 a 2 min. c/u.
 Hidratar en agua destilada durante
1 a 2 min.
 Tinción nuclear en hematoxilina
durante 2 a 12 min. de acuerdo a
la formula utilizada.
 Viraje de la hematoxilina en agua
corriente hasta desprendimiento
total del color (3 a 5 min.).
 Coloración citoplasmática con
eosina durante 15 a 30 seg.
 Lavado en agua destilada.
 Deshidratar, aclarar y montar.
 Los pasos de la deshidratación
pueden ser suplidos dejando secar
el corte en estufa a 37° por 15 a 20
min.

9. Colorantes y reacciones histológicas
comunes.
 Hematoxilina: Núcleo y regiones ácidas.
 Eosina: Regiones básicas y colágena.
 Tinciones argénticas: Fibras reticulares.
 Hematoxilina férrica: Músculo, eritrocitos.
 Ácido peryódico de Schiff: Moléculas ricas
en carbohidratos y glucógeno.
 Colorantes de Wright y Giemsa: Eritrocitos y
gránulos de eosinófilos; Núcleos de
leucocitos y gránulos de basófilos;
Citoplasma de monocitos y linfocitos.
 Tricrómica de Masson: Núcleos;
Músculo, queratina y citoplasma;
Mucinógeno, colágena.

10. Tinciones histoquímicas.
 Suponen una reacción química en la que
intervienen moléculas pertenecientes al propio
tejido.
 Su objetivo es poner de manifiesto una molécula
o familia de moléculas presentes en una sección
histológica y estudiar su distribución tisular "in situ".
Estas moléculas son difícilmente discernibles con
colorantes generales.

11. Tinciones histoquímicas.
 Durante el procesamiento del tejido previo a la
reacción histoquímica, como la fijación o la
inclusión, hay que evitar dañar a la molécula que
se quiere detectar porque de otra manera
resultaría en falsos negativos, es decir, no tener
tinción cuando en realidad la molécula de interés
sí está presente en el tejido, aunque deteriorada.

12. Tinciones histoquímicas.
 Periodic acid–Schiff (PAS).
 Es una técnica extremadamente útil y
agradable estéticamente. Las sustancias
que contienen grupos glicol o sus
derivados amino o alquilaminos son
oxidados por el ácido periódico para
formar dialdehídos, que se combinan con
el reactivo de Schiff para formar un
compuesto insoluble de color magenta.
 Demuestra el glucógeno y
mucosustancias neutrales, esboza las
membranas basales, y pone en evidencia
la mayoría de los tipos de hongos y
parásitos.
 Como curiosidad, cabe añadir que
también es útil para la demostración de
los cristales intracitoplasmáticos en el
sarcoma alveolar de partes blandas.

13. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones para microorganismos.
 Incluyen técnicas para las bacterias gram-positivas y
gram-negativas, micobacterias ácido-resistentes,
hongos y parásitos.
 La tinción de Gram permite la separación de las
bacterias en aquellas que retienen el complejo violeta-
yodo (gram positivos) y aquellas que se decoloran por
tratamiento del alcohol o acetona y son teñidas por
safranina o fucsina.
 Depende del alta contenido lipídico (ácidos micólicos
y çacidos grasos de cadena larga) en las paredes
celulares de las micobacterias, que confieren a la
célula la capacidad de formar complejos colorantes
básicos (tales como carbolfucsina) y para retenerlos
tras la fuerte decoloración con alcohol ácido.
 Las técnicas de este grupo más utilizados son el de
Brown y Brenn (B &B; como una modificación de la
tinción de Gram), la tinción de Ziehl-Neelsen (de
microorganismos ácido-alcohol resistentes), Grocott
hexamina y plata (para los hongos y Pneumocystis),
PAS (para los hongos, amebas y tricomonas), y Dieterle
o una de sus modificaciones (para Helicobacter,
Legionella y organismos de la sífilis y enfermedad de
Lyme).

14. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones argentafines y argirófilas.
 La reacción argentafín depende de la
presencia en el tejido de una sustancia, a
menudo del grupo fenólico (tales como las
catecolaminas o indolaminas), que reduce
las sales de plata (y otros metales); por lo
general se utiliza la técnica de Fontana-
Masson en el material incluido en parafina.
 En la reacción argirofílicas, es añadido un
agente reductor tal como la hidroquinona o
la formalina; generalmente se emplea la
técnica de Grimelius no modificada.
 Se utilizan principalmente para la
identificación de las células
neuroendocrinas y sus tumores, también
para la demostración de fibras de
reticulina, melanina y calcio.

15. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones para amiloide.
 La tinción llamada rojo
Congo es considerada
como la técnica más
fiable y práctica para
detectar amiloide.

16. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones de retículo.
 Demuestran tanto las fibras reticulares
como materiales de la membrana basal.
Consisten en fibras muy finas de colágeno
tipo III, muy extendidas en el tejido
conectivo. Las membranas basales se
compone principalmente de colágeno tipo
IV y laminina. En ambos casos, parece que
la adsorción de la plata y su PAS positividad
se deben a un revestimiento de
proteoglicanos consolidados.
 Tradicionalmente, sus principales
aplicaciones (como Gomori, Wilder, y
Gordon y Sweet) en la patología tumoral
han sido para distinguir: neoplasias
epiteliales de no epiteliales, diversas
neoplasias mesenquimales de otras, y
carcinoma in situ o invasor.

17. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones tricrómicas.
 En los métodos tricrómicos, tales como
los elaborados por Masson, Van
Gieson, y Mallory, ácido fosfotúngstico
o fosfomolíbdico se utilizan en
combinación con varios colorantes
aniónicos.
 El valor principal de este grupo de
tinciones es en la evaluación del tipo y
cantidad de material extracelular.
 Las tres estructuras tisulares
demostradas por los tres
componentes de los tintes son los
núcleos, el citoplasma, y el colágeno
extracelular, respectivamente.

18. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones de Perls, Fontana-Masson y von Kossa.
 Las tinciones de hemosiderina (Perls), melanina
(Masson-Fontana) y calcio (Von Kossa).
 En la técnica de Perls, el ácido clorhídrico se
separa de la proteína unida al
hierro, permitiendo que el ferrocianuro de
potasio pueda combinarse específicamente
con el hierro férrico para formar ferrocianuro
férrico (azul de Prusia).
 En el método de Fontana-Masson para
melanina, una solución de plata amoniacal se
utiliza sin un baño de reducción. Solamente
aquellas sustancias capaces de reducir las
sales de plata directamente (es
decir, argentafines), como la melanina, se
demuestran.
 En el método de von Kossa para el calcio, la
plata es sustituida por sales de calcio; que
luego es reducida a una plata metálica negra
por el uso de la luz o un revelador fotográfico.

19. Tinciones histoquímicas.
 Tinciones para mucina.
 La mucina es el término tradicional utilizado
para un gran grupo de macromoléculas que
contiene un grupo ácido, que se divide en dos
categorías principales: las epiteliales O-
glicoproteínas (unido a la membrana o
secretado) compuesto de un núcleo de
proteína y un ácido siálico que contiene resto
de carbohidrato (si sulfatado o no) y los
glicosaminoglicanos del estroma, que
contienen ácido hialurónico y que también
puede ser sulfatado.
 Varias tinciones están disponibles para la
demostración específica de mucinas
altamente ácidas. Estos incluyen el azul de
Alciano, hierro coloidal, de hierro de alta-
diamina, y el clásico mucicarmín Mayer.
 Se utilizan para clasificar a la metaplasia
gástrica incompleta en subtipos (que
contienen sialomucina y sulfomucina), que
tienen un potencial maligno supuestamente
diferente.

20. Tinciones histoquímicas.
 Tinción de Giemsa.
 La técnica es muy útil para la
demostración de varios
elementos hematolinfoides
(incluyendo los mastocitos) y
microorganismos.
 Los núcleos celulares se tornan
de un violeta intenso, la
granulación eosinófila de un
pardo rojizo, el citoplasma de
linfocitos de un azul definido y
sus núcleos de violeta variable.

21. Tinciones histoquímicas.
 Tinción para fibras elásticas.
 Las técnicas tipo Weigert son
bastante específicas para la
elastina, y son consideradas por
muchos como el método de elección
para la demostración de estas fibras
extracelulares.
 Sin embargo, la tinción de Gieson
Verhoeff-van (VVG) es más popular
porque es rápida y se esbozan las
fibras elásticas con un fuerte color
negro.
 Ambas técnicas se suelen establecer
en el contexto tricrómico
proporcionado por la tinción de Van
Gieson.
 Como resultados, los núcleos celulares
se tiñen de marrón a negro, la
colágena de rosa a rojo y el músculo
y citoplasmas de amarillo.

22. Bibliografía.
 Rosai and Ackerman's Surgical
Pathology, 10th Edition, By Juan Rosai.
 Laboratorio de Anatomía Patológica, 1a
edición, 1993.