Resumen de las principales tinciones que se realizan habitualmente en un laboratorio de anatomía patológica.

1. ESQUEMA DE LAS
PRINCIPALES TINCIONES
EN EL LABORATORIO DE
ANATOMÍA PATOLÓGICA

2. 1. Introducción
• En líneas generales la mayoría de los colorantes tienen afinidad por el núcleo celular.
Así, es destacable la existencia de colorantes básicos con apetencia por los grupos
ácidos del ADN. Entre estos colorantes tenemos la gallocianina, el verde de metilo, la
fucsina básica, el azul de toluidina y el azul de metileno.
• Todos esos colorantes tienen importancia, pero el colorante nuclear por excelencia y
más utilizado en nuestro laboratorio es la hematoxilina.
• La hematoxilina (C16H14O6) es un colorante natural que se obtiene del árbol
Haematoxylum campechianum, palo de Campeche o palo azul de Centroamérica,
que en el comercio se expende en forma de polvos rosados o amarillentos solubles
en alcohol y en agua.
• Para que la hematoxilina pueda ser empleada como colorante en la técnica
histológica ha de ser oxidada previamente, formándose hemateína. Este proceso
oxidativo puede producirse de forma espontánea en contacto con el oxígeno
atmosférico a lo largo de 4-6 semanas, aunque también puede ser inducido mediante
el empleo de agentes químicos de carácter oxidante. En general este proceso se
llama maduración de la hematoxilina. En dicha maduración existen oxidantes
específicos tales como: el óxido de mercurio rojo para la hematoxilina de Harris, el
yodato sódico o yoduro sódico para la hematoxilina de Mayer, el yodato potásico en
la de Carazzi, o el permanganato potásico en la hematoxilina fosfotúngstica.
Asimismo, cabe matizar que existen hematoxilinas sin agentes oxidantes asociados,
como la de Regaud y la de Ehrlich, por ello deben madurar durante un tiempo
prolongado mínimo de 20-30 días.

3. • Tras la oxidación de la hematoxilina se debe
incrementar su capacidad tintorial; para ello
se emplean sales metálicas que reciben el
nombre de alumbres, de modo que,
dependiendo de la sal utilizada y del tipo de
hematoxilina que preparemos éste adquiere
distinta tonalidad.
• Para preparar las hematoxilinas siempre se
debe seguir de forma escrupulosa la receta de
la fórmula, agregándose todos los componentes
en el orden y cantidad establecidos.
• Vamos a distinguir coloraciones nucleares,
citoplasmáticas, de conjunto, técnicas
especiales de histopatología, histoquímicas y de
citología.

4. 2. Coloraciones nucleares
1) Hematoxilina de Harris.
• Oxidante: óxido de mercurio rojo (HgO).
• No necesita madurar.
• Filtrar antes de usar.
• Cortes teñidos en 2,5-5’.
1) Hematoxilina de Carazzi.
• Oxidante: yodato potásico (IO3K).
• Madurar una semana en frasco destapado.
• Filtrar antes de usar.
• Cortes teñidos en 2,5-5’.
1) Hematoxilina de Mayer.
• Oxidante: yodato sódico o yoduro sódico (IO3Na).
• No necesita madurar ni filtrar.
• Cortes teñidos en 5-7’.
1) Hematoxilina de Ehrlich.
• Sin agente oxidante asociado.
• Madurar como mínimo 3 semanas.
• No necesita filtrar.
• Cortes teñidos en 30’.
• Los cortes adquieren coloración azul.

5. 5) Hematoxilina de Regaud.
 Sin agente oxidante asociado.
 Madurar 15 días.
 No necesita filtrar.
 Cortes teñidos en 2,5-5’.
 Los cortes adquieren color marrón.
5) Reacción de Feulgen.
 Coloración muy específica de cromatina y núcleos.
 Rojo púrpura.
5) Técnica del carmín acético.
 Poco utilizada.
 Útil para frotis o preparaciones por aplastamiento
sin necesidad de fijación.

6. 3. Coloraciones citoplasmáticas
1. Eosina acuosa.
• 1 gr. de eosina en 100 cc de agua.
• No necesita madurar.
• Es conveniente filtrarla.
• Los cortes se tiñen en 1-3’.
2. Eosina alcohólica.
• 1 gr. de eosina en 100 cc de alcohol etílico de 70º.
• No necesita madurar.
• Es conveniente filtrarla.
• Los cortes se tiñen en 1-3’.
3. Gallocianina.
• Filtrar una vez fría la preparación.

7. 4. Coloraciones de conjunto
1. Técnica de hematoxilina-
eosina.
2. Técnica de Mallory (o de la
hematoxilina
fosfotúngstica).
• Oxidante: permanganato
potásico (MnO4K).
• Coloración de conjunto
para núcleo y citoplasma.
• Muy utilizada para una
correcta visualización de
fibras de colágeno.
• Favorece la observación
de mitocondrias.
Con la tinción de Mallory el tejido
conjuntivo se ilumina en tonos de azul, de
igual manera que el cartílago (pulmón).

8. 5. Técnicas especiales en
histopatología
1. Coloración tricrómica de Masson.
• Fibras de colágeno y
musculares.
• Estudio de tejido conjuntivo y
muscular.
2. Coloración tricrómica de Van
Gieson.
• Emplea hematoxilina de Weigert
(hematoxilina férrica). Ésta se
utiliza para la tinción de núcleos
cuando se emplea a
continuación una sustancia
ácida.
• Fibras de colágeno y
musculares.
• Permite diferenciar
cromáticamente las fibras
colágenas del tejido conjuntivo.
Sección de una muestra de 8μm de grosor
de una muestra de zona profunda de la
dermis.

9. 3. Técnica de la orceína.
• Fibras elásticas, identificación de proteínas
asociadas al Cu.
3. Técnica de Gomori.
• Fibras de reticulina.
Pabellón auricular con técnica de orceína.

11. 6. Técnicas histoquímicas
1. Técnica de PAS (ácido peryódico de Schiff).
• Muy útil para el estudio de mucopolisacáridos.
2. Técnica de PAS-azul alcián.
• Ídem anterior.
3. Técnica de azul de Prusia o técnica de Perls.
• Pone de manifiesto la presencia de Fe en los tejidos, ya sea Fe3+
o
Fe2+
.
4. Técnica de von Kossa.
• Muy útil en la identificación de carbonatos y fosfatos, ya sea en sales
de carbonato cálcico (CaCO3) o fosfato cálcico.
• Tiñe los núcleos en rojizo, el citoplasma en dorado y las sales de Ca
en negro.
5. Técnica de sudán rojo y negro.
• Son, junto con el Os, las técnicas más utilizadas para el estudio de
las grasas.

12. Azul de Prusia o técnica de Perls.
Intestino grueso de rata teñido con
azul alcián.
Hígado teñido con
von Kossa para ver
depósitos de Ca.
Grasa parda teñida
con sudán negro.

13. 7. Técnicas de citología
1. Método de Giemsa.
• Observación de glóbulos
blancos (polinucleares
neutrófilos, eosinófilos y
basófilos), linfocitos
pequeños, medianos y
grandes, monocitos y
plaquetas.
2. Técnica de Papanicolau.
• Muy utilizada en citología
ginecológica para la
determinación de
posibles alteraciones
celulares en la
prevención del cáncer de
cuello uterino.