Este documento describe el proceso de liofilización para preservar microorganismos. La liofilización involucra congelar la muestra, luego sublimar el agua congelada bajo vacío para secarla. El proceso preserva microorganismos por décadas manteniendo su viabilidad y pureza. Se requiere equipo de vacío como un liofilizador y viales de vidrio, además de seguir etapas como preparar la muestra, congelarla, liofilizarla y almacenarla sellada al vacío.
La liofilización es un proceso de conservación de microorganismos que involucra congelar el cultivo, luego someterlo a vacío para sublimar el agua congelada y dejar el microorganismo deshidratado. Este método permite mantener la viabilidad de los microorganismos por décadas almacenados en viales de vidrio. El proceso consiste en cuatro etapas: recepción del cultivo, verificación de pureza, liofilización propiamente tal y evaluación de la viabilidad post-liofilización. Aunque
TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACION.pdfMayraAlexandraLunaMe
La técnica de conservación de microorganismos por liofilización se originó en los Andes hace 2000 años y fue reinventada en el siglo XX. El proceso implica cuatro etapas: inspeccionar el cultivo, procesarlo e incubarlo, formular la muestra, congelarla y liofilizarla, y evaluar la viabilidad posterior. La liofilización interrumpe el crecimiento microbiano preservando la viabilidad y estabilidad genética por largos períodos sin requerir suministros constantes.
Este documento describe técnicas básicas para el cultivo y estudio de bacterias en el laboratorio, incluyendo cómo preparar el área de trabajo, transferir muestras de forma aséptica, y sembrar bacterias en medios líquidos, semisólidos y sólidos. Explica cómo aislar bacterias individuales para obtener cultivos puros mediante técnicas como la siembra por estría y cómo caracterizar bacterias basado en sus características culturales y microscópicas.
504-Texto del artículo-1163-1-10-20201007.pdfAleGinaGVidal
Este documento evalúa los resultados de la conservación de cepas microbianas como Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa mediante liofilización durante cinco años, utilizando leche descremada y glicerol al 20% como sustancias lioprotectoras. Los resultados mostraron que las cepas conservadas en leche descremada mantuvieron niveles adecuados de viabilidad durante los cinco años. El glicerol al 20% fue una buena sustancia lioprotectora para S. aureus, E. coli y
Práctica #2 Medios de cultivo y técnicas de tinciónHylaryQuistian
Esta práctica consistió en preparar un medio de cultivo selectivo para el crecimiento de Escherichia Coli en una muestra de heces fecales animales. Se utilizó el medio Agar Eosina y azul de Metileno para facilitar nutricionalmente el crecimiento de E. Coli. Se estrió la muestra en las placas de Petri y se incubó, observando luego la morfología de las colonias mediante tinción de Gram y microscopía.
El documento presenta los resultados de un informe sobre medios de cultivo utilizados para cultivar Escherichia coli. Se describen dos métodos de siembra: uno en un caldo nutritivo líquido y otro en agar MacConkey sólido. Tras la incubación, se observó el crecimiento de bacilos Gram negativos característicos de E. coli en el agar.
Este documento describe el material de laboratorio y medidas de seguridad necesarias para la práctica de microbiología. Detalla elementos clave como matraces Erlenmeyer, probetas, cajas de Petri, asas de cultivo, pipetas bacteriológicas y más. Explica que se deben seguir estrictamente las técnicas estándar, usar equipo de seguridad como guantes y bata, y aplicar medidas como limpiar el área de trabajo y desechar residuos de forma segura. El objetivo es reconocer el material y conocer procedimientos que redu
La liofilización es un proceso de conservación de microorganismos que involucra congelar el cultivo, luego someterlo a vacío para sublimar el agua congelada y dejar el microorganismo deshidratado. Este método permite mantener la viabilidad de los microorganismos por décadas almacenados en viales de vidrio. El proceso consiste en cuatro etapas: recepción del cultivo, verificación de pureza, liofilización propiamente tal y evaluación de la viabilidad post-liofilización. Aunque
TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACION.pdfMayraAlexandraLunaMe
La técnica de conservación de microorganismos por liofilización se originó en los Andes hace 2000 años y fue reinventada en el siglo XX. El proceso implica cuatro etapas: inspeccionar el cultivo, procesarlo e incubarlo, formular la muestra, congelarla y liofilizarla, y evaluar la viabilidad posterior. La liofilización interrumpe el crecimiento microbiano preservando la viabilidad y estabilidad genética por largos períodos sin requerir suministros constantes.
Este documento describe técnicas básicas para el cultivo y estudio de bacterias en el laboratorio, incluyendo cómo preparar el área de trabajo, transferir muestras de forma aséptica, y sembrar bacterias en medios líquidos, semisólidos y sólidos. Explica cómo aislar bacterias individuales para obtener cultivos puros mediante técnicas como la siembra por estría y cómo caracterizar bacterias basado en sus características culturales y microscópicas.
504-Texto del artículo-1163-1-10-20201007.pdfAleGinaGVidal
Este documento evalúa los resultados de la conservación de cepas microbianas como Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa mediante liofilización durante cinco años, utilizando leche descremada y glicerol al 20% como sustancias lioprotectoras. Los resultados mostraron que las cepas conservadas en leche descremada mantuvieron niveles adecuados de viabilidad durante los cinco años. El glicerol al 20% fue una buena sustancia lioprotectora para S. aureus, E. coli y
Práctica #2 Medios de cultivo y técnicas de tinciónHylaryQuistian
Esta práctica consistió en preparar un medio de cultivo selectivo para el crecimiento de Escherichia Coli en una muestra de heces fecales animales. Se utilizó el medio Agar Eosina y azul de Metileno para facilitar nutricionalmente el crecimiento de E. Coli. Se estrió la muestra en las placas de Petri y se incubó, observando luego la morfología de las colonias mediante tinción de Gram y microscopía.
El documento presenta los resultados de un informe sobre medios de cultivo utilizados para cultivar Escherichia coli. Se describen dos métodos de siembra: uno en un caldo nutritivo líquido y otro en agar MacConkey sólido. Tras la incubación, se observó el crecimiento de bacilos Gram negativos característicos de E. coli en el agar.
Este documento describe el material de laboratorio y medidas de seguridad necesarias para la práctica de microbiología. Detalla elementos clave como matraces Erlenmeyer, probetas, cajas de Petri, asas de cultivo, pipetas bacteriológicas y más. Explica que se deben seguir estrictamente las técnicas estándar, usar equipo de seguridad como guantes y bata, y aplicar medidas como limpiar el área de trabajo y desechar residuos de forma segura. El objetivo es reconocer el material y conocer procedimientos que redu
Este documento presenta las normas generales y los procedimientos para realizar prácticas de microbiología de manera segura y estéril. En la Práctica 1, se describen los tipos de medios de cultivo, su preparación y esterilización, así como técnicas para manipular microorganismos como la esterilización de asas y la siembra en placas. El documento también incluye instrucciones detalladas para la Práctica 1 sobre la preparación de material estéril, una curva de crecimiento bacteriano y el aislamiento
Este documento presenta las normas generales y prácticas de microbiología para el laboratorio. Detalla los procedimientos para trabajar de manera estéril, incluyendo la esterilización de equipos como asas y pipetas, y la preparación y manipulación de medios de cultivo de manera estéril. También describe los diferentes tipos de medios de cultivo y su uso, así como los pasos para la Práctica 1 sobre trabajo en condiciones estériles y manipulación de microorganismos.
1) El documento presenta las normas y prácticas de microbiología para el laboratorio de segundo curso de la Licenciatura de Farmacia de la Universidad Miguel Hernández. 2) Se describen los procedimientos para trabajar de forma estéril y manipular microorganismos, incluyendo la esterilización de materiales y el uso de campanas de flujo laminar. 3) También se explican conceptos como los diferentes tipos de medios de cultivo, su preparación y esterilización.
CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN.pdfssuserd211c3
El documento describe el proceso de liofilización para la conservación de microorganismos. La liofilización consiste en la eliminación del agua de una sustancia congelada a través de la sublimación del hielo bajo vacío y temperaturas inferiores al punto triple del agua. Esto permite interrumpir el crecimiento microbiano y mantener la viabilidad y estabilidad genética de los cultivos por períodos prolongados. El proceso involucra equipos como un liofilizador con cámara de secado y condensador para
GUIA LABORATORIO PRIMER CORTE TÉCNICAS BÁSICAS DE LABORATORIO PARA AISLAMIENT...DAYANNAVANESSASANCHE
Este documento presenta las técnicas básicas de laboratorio para el aislamiento, cultivo y caracterización de bacterias. Describe los métodos de siembra, los tipos de medios de cultivo y sus usos, y el procedimiento para realizar siembras bacterianas en tubos y cajas de Petri para su posterior análisis e identificación.
Este documento describe los cultivos celulares, incluyendo su definición e historia, los tipos de cultivos, los medios de cultivo, las dificultades de la implantación en organismos vivos, las rutinas de trabajo, las técnicas, los equipos necesarios, sus aplicaciones y ventajas y desventajas.
Trabajo de 1er curso del ciclo superior de Anatomía Patológica. Asignatura Biología Moplecular. El trabajo habla sobre los distintos tipos de cultivos celulares, historia, técnicas, equipos, ventajas, desventajas, medios de cultivo...
Un proceso de fermentación típico requiere la propagación del inóculo para aumentar la biomasa microbiana antes de la fermentación a gran escala. Esto implica pasar el microorganismo a través de medios de cultivo crecientes en volumen para alcanzar concentraciones óptimas del 0.1-10% dependiendo del microorganismo. El objetivo es obtener un inóculo fisiológicamente adecuado y genéticamente idéntico al cultivo original para iniciar la fermentación a gran escala.
Este documento describe un procedimiento de laboratorio para aislar y cultivar microorganismos de diferentes fuentes, incluyendo material vegetal enfermo, suelo y aire. El procedimiento involucra la desinfección de las muestras, su siembra en medios de cultivo específicos y la incubación para permitir el crecimiento microbiano. Los resultados incluyeron cultivos puros de bacterias gram positivas, gram negativas y hongos.
LA TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACION.pdfAngelaSanchez75472
La liofilización es un proceso de conservación de microorganismos que data de los incas y vikingos. Consiste en eliminar el agua de una sustancia congelada mediante sublimación directa del hielo a vapor de agua, sin pasar por la fase líquida. Esto se logra mediante bajas temperaturas y presión en un liofilizador, protegiendo la viabilidad de los microorganismos. Se requiere equipamiento como liofilizadores, viales de vidrio, tapas, crimpadores y congeladores para realizar el
Este documento presenta el plan de prácticas de microbiología de alimentos para estudiantes de ingeniería agrícola. El objetivo es que los estudiantes aprendan técnicas microbiológicas como el cultivo de microorganismos, tinción, recuentos bacterianos y más. Incluye 12 prácticas de microbiología general y 4 prácticas enfocadas en alimentos, examinando la contaminación microbiológica de alimentos, ambientes y manipuladores. El documento también proporciona normas de seguridad para el trabajo en el labor
El documento describe los métodos para estudiar microorganismos en el laboratorio, incluyendo el cultivo de microorganismos en medios de cultivo esterilizados y en condiciones asépticas para obtener cultivos puros, así como técnicas para observarlos al microscopio después de teñirlos.
Este documento presenta las normas de seguridad y los materiales utilizados en un laboratorio de microbiología. Incluye instrucciones sobre el uso adecuado de equipos como mecheros, placas de Petri, asas y pipetas para realizar trabajos de manera segura. También describe los principales riesgos en el laboratorio y las medidas para prevenirlos.
Este documento presenta los objetivos, materiales, procedimientos y cuestionario para una práctica de laboratorio sobre la observación y cultivo de hongos levaduriformes. Los estudiantes diferenciarán macroscópica y microscópicamente bacterias y levaduras e identificarán Candida albicans mediante la observación de tubos germinales y el cultivo en diferentes medios.
Este documento describe un proyecto sobre la tecnología de probióticos. Se utilizaron cepas de Lactobacillus y Bifidobacterium que mostraron alta concentración celular y supervivencia a bajas temperaturas de almacenamiento. Los cultivos congelados y liofilizados mostraron buena viabilidad celular durante el almacenamiento. Las cepas probióticas fermentaron con éxito la leche y produjeron productos lácteos con buenas propiedades organolépticas y tecnológicas.
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros.
Este documento describe diferentes técnicas de asepsia y esterilización utilizadas en un laboratorio de biotecnología. Explica métodos como la antisepsia, esterilización por calor húmedo usando autoclaves, esterilización por llama y filtración. También describe el uso de campanas o cabinas de flujo laminar para proveer un ambiente limpio y libre de partículas durante procedimientos que requieren asepsia.
Este documento presenta las normas generales y los procedimientos para realizar prácticas de microbiología de manera segura y estéril. En la Práctica 1, se describen los tipos de medios de cultivo, su preparación y esterilización, así como técnicas para manipular microorganismos como la esterilización de asas y la siembra en placas. El documento también incluye instrucciones detalladas para la Práctica 1 sobre la preparación de material estéril, una curva de crecimiento bacteriano y el aislamiento
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1) El documento presenta las normas y prácticas de microbiología para el laboratorio de segundo curso de la Licenciatura de Farmacia de la Universidad Miguel Hernández. 2) Se describen los procedimientos para trabajar de forma estéril y manipular microorganismos, incluyendo la esterilización de materiales y el uso de campanas de flujo laminar. 3) También se explican conceptos como los diferentes tipos de medios de cultivo, su preparación y esterilización.
CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN.pdfssuserd211c3
El documento describe el proceso de liofilización para la conservación de microorganismos. La liofilización consiste en la eliminación del agua de una sustancia congelada a través de la sublimación del hielo bajo vacío y temperaturas inferiores al punto triple del agua. Esto permite interrumpir el crecimiento microbiano y mantener la viabilidad y estabilidad genética de los cultivos por períodos prolongados. El proceso involucra equipos como un liofilizador con cámara de secado y condensador para
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Este documento describe un procedimiento de laboratorio para aislar y cultivar microorganismos de diferentes fuentes, incluyendo material vegetal enfermo, suelo y aire. El procedimiento involucra la desinfección de las muestras, su siembra en medios de cultivo específicos y la incubación para permitir el crecimiento microbiano. Los resultados incluyeron cultivos puros de bacterias gram positivas, gram negativas y hongos.
LA TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACION.pdfAngelaSanchez75472
La liofilización es un proceso de conservación de microorganismos que data de los incas y vikingos. Consiste en eliminar el agua de una sustancia congelada mediante sublimación directa del hielo a vapor de agua, sin pasar por la fase líquida. Esto se logra mediante bajas temperaturas y presión en un liofilizador, protegiendo la viabilidad de los microorganismos. Se requiere equipamiento como liofilizadores, viales de vidrio, tapas, crimpadores y congeladores para realizar el
Este documento presenta el plan de prácticas de microbiología de alimentos para estudiantes de ingeniería agrícola. El objetivo es que los estudiantes aprendan técnicas microbiológicas como el cultivo de microorganismos, tinción, recuentos bacterianos y más. Incluye 12 prácticas de microbiología general y 4 prácticas enfocadas en alimentos, examinando la contaminación microbiológica de alimentos, ambientes y manipuladores. El documento también proporciona normas de seguridad para el trabajo en el labor
El documento describe los métodos para estudiar microorganismos en el laboratorio, incluyendo el cultivo de microorganismos en medios de cultivo esterilizados y en condiciones asépticas para obtener cultivos puros, así como técnicas para observarlos al microscopio después de teñirlos.
Este documento presenta las normas de seguridad y los materiales utilizados en un laboratorio de microbiología. Incluye instrucciones sobre el uso adecuado de equipos como mecheros, placas de Petri, asas y pipetas para realizar trabajos de manera segura. También describe los principales riesgos en el laboratorio y las medidas para prevenirlos.
Este documento presenta los objetivos, materiales, procedimientos y cuestionario para una práctica de laboratorio sobre la observación y cultivo de hongos levaduriformes. Los estudiantes diferenciarán macroscópica y microscópicamente bacterias y levaduras e identificarán Candida albicans mediante la observación de tubos germinales y el cultivo en diferentes medios.
Este documento describe un proyecto sobre la tecnología de probióticos. Se utilizaron cepas de Lactobacillus y Bifidobacterium que mostraron alta concentración celular y supervivencia a bajas temperaturas de almacenamiento. Los cultivos congelados y liofilizados mostraron buena viabilidad celular durante el almacenamiento. Las cepas probióticas fermentaron con éxito la leche y produjeron productos lácteos con buenas propiedades organolépticas y tecnológicas.
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
Este documento describe el proceso de cultivo del hongo Pleurotus ostreatus realizado por estudiantes de biología en su escuela. Explica los pasos para preparar los medios de cultivo, esterilizarlos, inocular el micelio primario, multiplicarlo y finalmente hacerlo fructificar en paquetes de paja. A pesar de enfrentar dificultades como contaminaciones y la presencia de otro hongo, lograron repetir con éxito el proceso para obtener micelio de Pleurotus ostreatus. Aprendieron sobre técn
El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros.
Este documento describe diferentes técnicas de asepsia y esterilización utilizadas en un laboratorio de biotecnología. Explica métodos como la antisepsia, esterilización por calor húmedo usando autoclaves, esterilización por llama y filtración. También describe el uso de campanas o cabinas de flujo laminar para proveer un ambiente limpio y libre de partículas durante procedimientos que requieren asepsia.
Similar a TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN.pdf (20)
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TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN.pdf
1. BIOTECNOLOGIA
LA TECNICA DE CONSERVACIÓN DE
MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN
INTEGRANTE
CHUCUYA TICONA, Sarai Antonia
DOCENTE
Dr. SOTO GONZALES, Hebert Hernan
Junio del 2022
ILO – PERÚ
UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA
AMBIENTAL
2. ANTECEDENTES
Un proceso rudimentario de liofilización tuvo su origen en el
imperio Inca, alrededor del año 200 a.C. El proceso de
liofilización fue re-inventado en 1906 por Arsène d’Arsonval y
Frédéric Bordas, mientras que en el año 1911 surgen los
primeros métodos de liofilización para bacterias, empleando
suero y leche como agentes protectores. La técnica de
liofilización se desarrolla en forma industrial durante la
Segunda Guerra Mundial y fue aplicada, fundamentalmente, a
la liofilización de plasma humano y producción de penicilina.
La preservación de microorganismos es una tarea fundamental
en una colección de cultivos microbianos. En ella se debe
asegurar que la viabilidad y pureza de los microorganismos sea
mantenida durante décadas. Para cumplir con este objetivo
existen varias técnicas de preservación, siendo la liofilización
un método que cumple con los requisitos exigidos por la
Federación Mundial de Colecciones de Cultivo (WFCC).
Esquema 1: Proceso de preservación de microorganismos por
liofilización.
EQUIPAMIENTO NECESARIO PARA LA
LIOFILIZACIÓN
Liofilizador: Un liofilizador posee un sistema de vacío,
generado a través de una bomba de aceite que se encuentra
anexa al equipo principal. La bomba de aceite está conectada a
una trampa para evitar el paso del solvente desde el liofilizador
hacia el interior de la bomba. La función de la bomba es, en
primera instancia, eliminar el aire del interior de la cámara de
secado y luego generar el vacío suficiente para permitir la salida
del vapor producido durante la sublimación.
Insumos, accesorios y otros Equipos requeridos: Se
requieren viales de vidrio de 2 mL, que necesitan de una tapa
de goma para cerrarlos (Foto A). Posterior los viales son
sellados con una tapa metálica (Foto B) para evitar la entrada
de aire al material biológico contenido dentro del vial, lo cual
se realiza con un alicate llamado crimpador manual de viales
(Foto C).
Lugar para almacenar el material liofilizado: Para mantener
cepas a largo plazo en viales de vidrio, es recomendable
almacenarlos en gavetas o cajoneras que sean de un material
resistente a golpes y fuego. Mueble de seguridad metálico para
almacenar viales con material biológico liofilizado. Nótese que cada
cajón está rotulado con números y letras para registrar la ubicación
del vial
ETAPAS FUNDAMENTALES DEL PROCESO DE
LIOFILIZACIÓN
El proceso de liofilización comienza con la preparación de una
mezcla compuesta por el inóculo del microorganismo y la
sustancia lioprotectora disuelta en la solución. Luego, esta
mezcla es congelada y posteriormente transferida al equipo de
liofilización. Dentro del equipo ocurre el secado de la muestra
por sublimación del agua congelada y, cuando el proceso
concluye, la muestra es sellada con el tapón de goma, al vacío.
PROCEDIMIENTOS
La liofilización es un proceso que tiene como objetivo separar el agua
(u otro solvente) de una disolución mediante congelación y posterior
sublimación del hielo a presión reducida.
Etapa 1. Inspección primaria del cultivo microbiano
El proceso de liofilización se inicia con la recepción de un cultivo
microbiano. Al llegar la muestra al laboratorio, ésta debe ser
observada bajo lupa estereoscópica para determinar que el
microorganismo se encuentre puro y sin crecimiento micelial o
bacterial contaminante.
Recepción de
cultivo
Microbiano
Verificación de
pureza del
microorganismo
Liofilización
del cultivo
microbiano
Evaluación de
viabilidad post-
liofilización
3. También se deben revisar las condiciones de embalaje de los
cultivos recibidos. Cada muestra debe ser registrada con un
número correlativo de ingreso y colocado en la muestra
recibida en forma visible.
Etapa 2. Procesamiento primario de la muestra
En el caso de hongos esporuladores, extraer con un asa de 10
µL una fracción del cultivo y depositar en el centro de una placa
Petri con medio de cultivo (Foto A). En el caso de bacterias o
levaduras, extraer con un asa de 10 µL desde una colonia aislada
y realizar un rayado en una placa Petri con medio de cultivo
(Foto B). Luego de realizar la inoculación, el cultivo
microbiano debe ser incubado hasta obtener un crecimiento
evidente sobre la placa; en el caso de hongos, la temperatura de
incubación va desde los 15 a 25 °C, aproximadamente. El
tiempo va a depender de cada microorganismo.
Etapa 3. Formulación de la muestra para la
liofilización
El primer protocolo es para bacterias y hongos esporuladores en
formulación líquida, y el segundo es para basidomicetes en
soporte sólido. El segundo vial se recomienda abrir después de
12 meses de almacenamiento, para verificar viabilidad.
Etapa 3.1. Formulación líquida para bacterias y
hongos
Este protocolo se inicia con un cultivo axénico (puro) y de
abundante biomasa.
Realización de copias
de seguridad de un
cultivo microbiano.
(A) Llenado de viales
con solución
lioprotectora estéril;
(B) inoculación de la solución lioprotectora
Etapa 3.2. Formulación en soporte sólido para
basidiomicetes en semillas de mijo
− Cultivo axénico de un basidomicete
(Chondrostereum purpureum) utilizado para el
proceso de liofilización en soporte sólido.
− Procedimiento para la esterilización de
semillas de mijo (Pennisetum typhoides ) para
liofilización de basidomicetes en soporte
sólido. (A) Semillas de mijo tratadas,
ocupando 1/3 del volumen de un tubo de
ensayo; (B) semillas de mijo autoclavadas,
siendo secadas en cámara de flujo laminar.
Semillas de mijo colonizadas por
Chondrostereum purpureum.
Etapa 4. Precongelado y liofilización de las muestras
Viales en la etapa de
precongelación, luego de
pasar 2 horas a -20 °C. (A)
Muestras de hongos o
bacterias en leche
descremada al 10% en
formulación líquida; (B)
muestras de basidomicetes colonizando semillas de mijo en sustrato
sólido.
Muestras congeladas dentro del liofilizador. (A) Disposición de los
viales en el interior del
equipo; (B) sellado de los
viales haciendo girar la
manivela (imagen en el
recuadro) mientras el equipo
todavía está con vacío.
Los viales son almacenados de forma provisional
en un lugar fresco y oscuro por al menos 48 horas.
Sellado del vial con tapa metálica,
inmediatamente después de ser retirados del
liofilizador.
BIBLIOGRAFIA
Hernández D., Loaiza A. (2014) Selección de un método para
la conservación y preservación de actinomicetos aislados
del suelo del jardín botánico. Universidad Tecnológica de
Pereira.
Santelices S., Castro F. (2017) Preservación de
microorganismos por liofilización. Instituto de
Investigaciones Agropecuarias INIA / MINISTERIO DE
AGRICULTURA.