El documento presenta los resultados de un informe sobre medios de cultivo utilizados para cultivar Escherichia coli. Se describen dos métodos de siembra: uno en un caldo nutritivo líquido y otro en agar MacConkey sólido. Tras la incubación, se observó el crecimiento de bacilos Gram negativos característicos de E. coli en el agar.

1. INFORME MEDIOS DE CULTIVO
DANIEL ALEJANDRO HERNENDEZ ORTEGA
MARIA JOSE ANGARITA CAMPOS
UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL PEREIRA
NUTRICION Y DIETETICA
MICROBIOLOGIA
2022-1

2. INFORME MEDIOS DE CULTIVO
INTRODUCCION:
La microbiología se ha podido desarrollar debido a la posibilidad de estudiar
especies aisladas de microorganismos, gracias a la aplicación de los medios de
cultivo. Existen y se utilizan una gran variedad de medios de cultivo cuya
composición varía de acuerdo con las necesidades nutricionales de los organismos
que se pretenden estudiar, así el trabajo de aislamiento de un cultivo puro de una
especie dada puede facilitarse con ayuda de medios de cultivo que aprovechan
alguna característica particular para sus exigencias nutricionales, aparte de
considerar otros requerimientos como la temperatura, el oxígeno, el PH, etc. Los
medios de cultivo se definen como cualquier preparado, solido o líquido, que
contiene todas las sustancias nutritivas para el desarrollo de los microorganismos,
este debe ser estéril, tener un ph adecuado y estar protegido de la contaminación
ambiental.
En general, todos los medios de cultivo deben contener los siguientes grupos de
nutrientes:
 Fuente de hidrogeno: es aquella que constituye la fuente de energía,
generalmente es un azúcar que funciona a la vez como carbono.
 Aceptores de hidrógeno: son indispensables para aquellos
microorganismos que no ocupan el oxígeno en la respiración y para aquellos
microorganismos fermentadores que no utilizan sus propios metabolitos
como aceptores de hidrogeno.
 Fuente de carbono: todos los microorganismos necesitan una fuente de
carbono, algunos utilizan el CO2 del aire conocidos como autótrofos, pero la
mayoría de las bacterias utiliza compuestos orgánicos preformados
conocidos como organotrofos.
 Fuente de nitrógeno: es esencial para todos los microorganismos, algunos
lo requieren como un compuesto orgánico y otros pueden utilizar compuestos
inorgánicos, aunque un pequeño grupo puede utilizar el nitrógeno
atmosférico, como el Azotobacter.
 Sales minerales: aportan elementos tales como el azufre, fosforo y algunos
activadores enzimáticos presentes en las coenzimas de los citocromos y las
peroxidasas.
 Factores de crecimiento: es un compuesto orgánico como lo pueden ser
los aminoácidos y las bases nitrogenadas que una célula debe tener para su
crecimiento pero que ella misma no es capaz de sintetizar.

3. Los medios de cultivo se han clasificado en forma artificial de acuerdo a su estado
físico los cuales utilizamos en la práctica de laboratorio fueron:
 Medios líquidos: comúnmente llamados caldos, se emplean para la
homogenización de las muestras, realizar diluciones y enriquecimiento del
medio de cultivo. Así mismo, son útiles para la activación de cepas
microbianas liofilizadas. Por lo general, estos medios suelen servirse en
tubos de ensayo o en matraces cuando se requiere analizar grandes
cantidades de muestra.
 Medios solidos: se conocen como agares; se obtienen a partir de medios
de cultivo líquidos a los cuales se les agrega una sustancia solidificante
siendo útiles para el aislamiento de microorganismos a través del desarrollo
de colonias y mantenimiento de cultivos puros.
Figura 1. Tubo de ensayo con caldo nutritivo y Agar Macconkey
El primer paso en el cultivo de los microorganismos es la siembra, la cual se puede
realizar de diversas formas, ya sea a través de inoculaciones en superficie,
profundidad o por agotamiento. Los métodos de siembra utilizados en la práctica de
laboratorio fueron:
 Siembra en medio liquido: este tipo de siembra se utiliza en tubos de
ensayo que contienen caldos, la siembra en medio liquido se realiza
traspasando de un cultivo bacteriano, ya sea en medio solido o líquido, a un
nuevo tubo de ensayo que contiene el caldo estéril.
 Siembra de estrías por agotamiento: la siembra de estrías es la más
común en los laboratorios de diagnóstico microbiológico, tiene como objetivo
realizar el aislamiento de colonias y obtener cultivos puros.

4. MATERIALES:
 Agar Macconkey
 Caldo nutritivo
 Tubos de ensayo
 Placas de Petri estériles
 Mechero
 Asa de siembra
 Marcador
 Incubadora
PROCEDIMIENTO:
La siembra de los microorganismos requiere condiciones de esterilidad, por lo cual
todos los procedimientos descritos a continuación deben ser desarrollados cerca de
la llama del mechero.
 Siembra en medio liquido
-Se utiliza un asa de siembra previamente estéril, donde se toma una
pequeña cantidad del cultivo de Escherichia Coli contenida en una placa de
Petri para introducirla en el caldo nutritivo que se encuentra en el tubo de
ensayo, en el momento en que el asa entra en contacto con el caldo nutritivo
se agita varias veces.
-Posteriormente se esteriliza el asa de siembra pasándola varias veces por
el mechero esperando esta tome un color rojizo y se deja enfriar.
-Se rotula el tubo de ensayo con el inoculo colocando el nombre de la
muestra, cultivo y nombre de la persona que está realizando la práctica.
-La siembra se incuba por 24 horas, en este caso se incubo por 7 días.

5.  Siembra de estrías por agotamiento
-Con un asa de siembra previamente estéril, extraiga una mínima cantidad
de la muestra de Escherichia Coli contenida en la placa de Petri.
-Se levanta la tapa de la placa de Petri que contiene el Agar de Macconkey
y descargue suavemente la muestra en el primer cuadrante, trazando una
serie de zigzags en todo el sector, luego cierre la placa con cuidado.
-Se debe esterilizar al asa con el mechero y una vez que esta tome un color
rojizo por la acción del calor dejar enfriar, una vez realizado lo anterior ubicar
el segundo cuadrante haciendo que el primer cuadrante que estaba arriba
pase a la izquierda y el segundo cuadrante arriba.
-Luego se trazan zigzags desde el extremo del primer cuadrante a el segundo
cuadrante.
-Se esteriliza nuevamente el asa, se gira la placa de Petri haciendo que el
segundo cuadrante quede a la izquierda y que el tercer cuadrante quede
arriba.
-A continuacion repite el proceso, trazando zigzags desde el extremo del
segundo cuadrante al tercer cuadrante, sacando en el último cuadrante una
estría hacia el centro de la placa de Petri.
-Es importante rotular la placa de Petri colocando el nombre de la muestra,
cultivo y nombre de la persona que está realizando la práctica.
-La siembra se incuba por 24 horas, en este caso se incubo por 7 días.

6. - A partir del cultivo realizado en el medio sólido con Agar Macconkey, se esteriliza
el asa de cultivo y luego se realizan movimientos circulares en una lámina de
microscopio.
-Se deja secar la lámina con el inoculo en el espejo del microscopio y se fija con el
mechero suavemente
-Luego se realiza la respectiva tinción de Gram a la lámina con la muestra, donde
la tinción de Gram tiene como fundamento principal la formación del complejo
cristal-violeta.
-Posteriormente, se colocan las láminas en un portalaminas del laboratorio.
-Se inicia la Tinción de Gram adicionando cristal violeta a toda la muestra, lugol y
acetona, cada uno se deja por un minuto para que fije su color, al terminar de
adicionar cada uno lavar con poca agua. Esta tinción se realiza para que posible
visualizar más fácil en el microscopio, por último, se adiciona safranina de gram y
se deja treinta segundos, lavar con poca agua la lámina con el inoculo para evitar
borrar la muestra de la lámina.
RESULTADOS:
Se observaron las siguientes imágenes en el microscopio de la muestra incubada
de Escherichia Coli en las placas de Petri después de pasar por la tinción de Gram,
logrando visualizar bacilos Gram negativos característicos de esta bacteria, la
cubierta de E. Coli consta de tres elementos los cuales son la membrana
citoplasmática, la membrana externa y, entre ambas, un espacio periplásmico
constituido por péptidoglicano, esta última estructura confiere a la bacteria su forma
y rigidez, y le permite resistir presiones osmóticas ambientales relativamente
elevadas. Las bacterias que no se tiñen mediante la tinción de Gram se denominan
Gram negativas las cuales están formadas por una pared más fina formada por
menos capas de peptidoglicano y una segunda capa rica en lípidos que son las que
repelen la tinción de Gram y vistas al microscopio aparecen incoloras.

7. Figura 2. BacilosGram negativosEscherichiaColi Figura 3. BacilosGram negativos
CONCLUSIONES:
Dentro de la práctica de este laboratorio “Medios de cultivo” realizamos dos métodos
de siembra en medio líquido que fue un caldo nutritivo y en medio solido que fue
Agar Macconkey de la Escherichia coli reconociendo que es una enterobacteria que
habita en nuestro sistema digestivo especialmente en el intestino de los seres
humanos después del nacimiento y se le considera un microorganismo de la flora
normal, la Escherichia Coli es importante en nuestro organismo ya que es capaz de
fermentar glucosa y lactosa con producción de gas y se considera un
microorganismo anaerobio facultativo ya que se pueden desarrollar en presencia o
en ausencia de oxígeno. Existen algunas cepas que pueden ser patógenas y causar
daño produciendo diferentes cuadros clínicos, entre ellos diarrea y enfermedades
entéricas, sin embargo, en huéspedes inmunosuprimidos o cuando las barreras
gastrointestinales son sobrepasadas las cepas de E. Coli son capaces de producir
infecciones, las cepas de Escherichia Coli que causan diarreas incluyen varios
patógenos emergentes de importancia en salud publica en todo el mundo. La
bacteria se transmite al hombre principalmente por el consumo de alimentos
contaminados, como productos de carne picada cruda o poco cocida, leche cruda,
hortalizas y semillas germinadas crudas contaminadas, por esta razón es importante
una adecuada inocuidad de los alimentos, de conocer la cocción indicada y sobre
todo la higiene de los alimentos para el posterior consumo, el almacenamiento
también es un factor importante para ayudar a prevenir las enfermedades
transmitidas por los alimentos.