Práctica #2

1. CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 128
Práctica No. 2 Utilización de medios de cultivo y técnicas de tinción
Sub-modulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de microorganismos con base en las
normas
Integrantes: Quistián García Hylary Estefanía, Ramírez Arellanos Génesis, Ramírez
Hernández Jessica, Ramos Franco Michelle Valeria, Ramos Juárez Mario Antonio, Rangel
Osorio Hugo Cesar, Rascón Castrejón Lizeth Guadalupe, Reyes Marcial Luis Diego, Ríos
Palacios Selene.
Facilitadora: Ing. Jessica Alicia Acosta Bezada
Fecha: se inició el 29 septiembre del 2014 y se terminó el 08 octubre del 2014.
Introducción
Un medio de cultivo consta de un gel o una solución
que cuenta con los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y
temperatura, el crecimiento de virus,
microorganismos, células, tejidos vegetales o
incluso pequeñas plantas. Según lo que se quiera
hacer crecer, el medio requerirá unas u otras
condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes
de ser preparados; ya preparados pueden
encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido.
Durante esta práctica veremos cómo es que crecen
los microrganismos en placas de medios de cultivos
de una muestra de heces fecales de un animal.
Además de esto observaremos la morfología de
cada una de las bacterias que crecen.
También veremos las técnicas de tinción que las
podremos definir como: una técnica auxiliar
utilizada en microscopía para mejorar el contraste
en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y
tinturas son sustancias que usualmente se utilizan
en biología y medicina para resaltar estructuras en
tejidos biológicos que van a ser observados con la
ayuda de diferentes tipos de microscopios. Los
diferentes colorantes pueden ser utilizados para
aumentar la definición y examinar grandes cortes
de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares
o tejido conectivo), poblaciones celulares (por
ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas)
o incluso para resaltar organelos dentro de células
individuales.
Resumen
Esta práctica consistió en preparar un medio de
cultivo selectivo para el crecimiento de bacterias
Escherichia Coli en una población poli microbiana.
Facilitando nutricionalmente su crecimiento con la
utilización del medio Agar Eosina y azul de
Metileno.
Se envolvió el material necesario (cajas Petri) para
esterilizarlo ya que cuando el medio de cultivo
estuvo listo y también esterilizado se añadió a este
usando técnicas de vaciado. Una vez refrigerado
por 24 horas se procedió a estriar en crecimiento.
Una vez que se estrió se llevó de nuevo al
refrigerador a 37ºC.
Se realizó la morfología de cada colonia en cada
agar y después la morfología de cada bacteria
realizando la técnica de Tinción De Gram, esta fue
observada por medio de un microscopio
compuesto.
Abstract
This practice consisted in prepare a selective
culture medium for the growth of Escherichia Coli
Bacterium in a polymicrobial population. Facilitating
nutritionally it growth with the use of Eosin
methylene blue agar.
It wrapped the necessary material (Petri dishes) for
sterilization and that then the culture medium was
ready and sterilized too was add using casting
techniques. Once cooled for 24 hours proceeded to
striate in growth. Once striate it brought back to the
refrigerator in 98º F.
Morphology was performed of each colony on each
Agar and then the morphology of each bacterial
performing gram staining technique; this was
observed by a compound microscope.
Debido a lo largo de la práctica y a la cantidad de
materiales que se utilizó para su realización, esta
se dividió en cuatro etapas.
ETAPA 1: Preparación de medios de cultivo,
esterilización y vaciado
Material
Bascula

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Espátula
Mecheros Bunsen
Matraz E.M 500 ml
Capsula
9 Cajas Petri
Papel canela
Reactivos:
Agar correspondiente (Agar Eosina y azul
de metileno o EMB)
Agua destilada o potable
Procedimiento:
1) Se colocó en el matraz Erlenmeyer 400 ml de
agua destilada y se le agregó 14.4 gr del agar
eosina y azul de metileno.
2) Se mezcló la solución mientras se calentaba con
la ayuda del mechero. Se hirvió durante un minuto y
se retiró del fuego.
3) Se preparó las cajas Petri para su esterilización,
así como el matraz.
4) Se esterilizó lo anterior a 121°C durante 15
minutos.
5) Se formó un triángulo de seguridad con
mecheros bunsen y en medio de ellos se colocó
una caja Petri previamente esterilizada. Se vació en
ella 20 ml aproximadamente del medio de cultivo
previamente esterilizado y se tapó. El
procedimiento se repitió con el resto de las cajas
Petri.
ETAPA 2: Estriado, siembra e incubación
Material:
Mecheros Bunsen
Cajas Petri con el agar correspondiente (4
agar nutritivo, 3 EMB)
Asas de inoculación
Vaso precipitado
Reactivo:
Muestra (Heces fecales de algún animal)
Agua destilada o potable
Procedimiento:
1) Se disolvió una pequeña parte de la muestra en
agua suficiente.
2) Se formó un triángulo de seguridad con
mecheros bunsen, se trabajó dentro de esta zona
para evitar la posible contaminación de los medios
de cultivo.
3) Se tomó una de las cajas Petri con una mano y
el asa de inoculación con la otra. Se procedió a
esterilizar el asa y se tomó una pequeña cantidad
de la muestra.
4) Con el pulgar se abrió la caja Petri y se comenzó
el estriado del medio de cultivo con el asa de
inoculación. El estriado que se uso fue uno simple
con forma de “S” por toda la caja Petri en una sola
dirección. Solo se inoculo con una cantidad de
muestra, es decir no se tomó otra.
5) Se repitió el procedimiento con las 7 cajas Petri,
y se procedió a su incubación.
ETAPA 3: Lectura de colonias
Material
Marcador
Mecheros Bunsen
Cajas Petri con muestra incubada
anteriormente
Procedimiento
1) Se formó un triángulo de seguridad con
mecheros Bunsen y se trabajó dentro de él para
evitar la posible contaminación de bacterias. En
ningún momento se abrió alguna de las cajas Petri.
2) Se procedió a realizar la lectura de colonias.
Para ello primero se identificó los diversos tipos de
colonias que había en cada caja Petri.
3) Se contó el número de cada tipo de colonias que
había en cada caja Petri, para ello se vio la caja a
contra luz para poder ver colonias que no eran muy
claras, con ayuda del marcador se punteaba cada
colonia contada, se tomó notas sobre su:
 Forma
 Borde
 Superficie
 Color

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(Véanse los resultados)
ETAPA 4: Tinción y morfología bacteriana
Material
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Asa microbiológica
 Mecheros Bunsen
 Microscopio
Reactivos
 Agua destilada o potable
 Cristal violeta
 Yodo-Lugol
 Alcohol-Acetona
 Safranina
 Aceite de inmersión
Procedimiento
1) Se formó un triángulo de seguridad con
mecheros Bunsen. La toma de muestras se realizó
dentro de él.
2) Para la toma de muestras, se colocó en un
portaobjetos una gota de agua, se colocó una caja
Petri dentro del triángulo de seguridad para evitar
una posible contaminación. Se esterilizó el asa
microbiológica, se abrió la caja y con el asa se tomó
una parte de una de las colonias, esta se disolvió
con movimientos circulares en la gota de agua
previamente puesta en el cubreobjetos. Se volvió a
esterilizar el asa.
3) Se tomó una muestra por cada colonia diferente
en cada agar, cabe destacar que se marcó cada
cubreobjetos con el número de agar y colonia a la
que pertenece la muestra.
4) Se dejó secar las muestras colocadas en los
portaobjetos. Una vez hecho esto se procedió a la
tinción:
-Se pasó el portaobjetos con la muestra por
la llama del mechero 3 veces rápidamente.
-Se le agregó una gota de Cristal violeta y
se dejó actuar durante un minuto. Se enjuagó el
portaobjetos hasta que el colorante dejó de escurrir.
-Se agregó una gota de Yodo-Lugol y se
dejó actuar por un minuto. Se procedió a enjuagar.
-Se agregó una gota de Alcohol-Cetona y
se dejó actuar durante 30 segundos. Se enjuagó.
-Por ultimó se agregó una gota de safranina
y se dejó actuar por 30 segundos, posteriormente
se volvió a enjuagar la muestra.
5) Se le agregó una gota de aceite de inmersión a
la muestra y se le colocó un cubreobjetos.
6) Se procedió a su observación a través del
microscopio y se identificó las distintas bacterias
contenidas en la muestra.
(Véanse los resultados)
Resultados
En los diferentes cultivos se dio lugar a la formación de diversas colonias de microorganismos que se
representan fácilmente en la siguiente tabla.
Medio de cultivo. Numero de caja Petri.
Agar eosina y azul de metileno.
3
4
5
Agar nutritivo. 1
2
6
7

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Caja Petri. Colonia. Morfología de la colonia.
Caja Petri 1. 1 Forma circular, borde entero,
superficie convexa, brillante a
la luz, color blanco con
tonalidad grasienta.
2 Forma circular, borde entero,
superficie plana, color amarillo
opaco.
3 Forma circular, borde entero,
superficie convexa, color
amarillo brilloso, viscosa.
4 Forma circular, borde
filamentoso, superficie
convexa, color gris brilloso con
centro de color café.
Caja Petri 2. 1 Forma circular, borde entero,
superficie convexa, color café
en el centro.
2 Forma circular, borde entero,
superficie convexa, color
blanco y grasoso.
3 Forma circular, borde
filamentoso, superficie
convexa, color blanco con un
centro de color café.
4 Forma circular, borde entero,
superficie convexa, de color
amarillo.
Caja Petri 3. 1 Forma circular, borde
lobulado, color blanco,
superficie planoconvexa.
2 Puntiforme, borde entero,
superficie convexa, color
morado claro.
3 Puntiforme, borde lobulado,
superficie convexa, color
morado oscuro.
Caja Petri 4. ---------- ----------
Caja Petri 5. 1 Puntiforme, borde lobulado,
superficie convexa, color
morado oscuro.
2 Puntiforme, borde lobulado,
superficie convexa, color
morado claro.
Caja Petri 6. 1 Puntiforme, borde entero,
superficie convexa, color
amarillo.
2 Puntiforme, borde lobulado,
superficie convexa, color

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blanco opaco y cremoso.
Caja Petri 7. 1 Puntiforme, borde lobulado,
superficie convexa, tonalidad
cremosa.
2 Puntiforme, borde entero,
superficie convexa, color
amarillo.
Todos estos resultados conforman las colonias que resultaron de la muestra de heces fecales. Y por
consiguiente se tienen los resultados morfológicos de las bacterias presentes en algunas muestras de los
cultivos antes mencionados. Estos resultados se muestran en la siguiente tabla.
Caja Petri. Colonia. Morfología bacteriana.
Caja Petri 1. 1
2 Staphylococcus Gram
positivos.
3 Staphylococcus Gram
positivos.
Caja Petri 2. 2 Diplococos Gram negativos.
4 Staphylococcus Gram
positivos.
Caja Petri 3. 2 Bacilos Gram negativos.
3 Bacilos Gram negativos.
Caja Petri 4. ----------- -------------
Caja Petri 5. 1 Bacilos Gram negativos.
2 Bacilos Gram negativos.
Caja Petri 6. 1 Staphylococcus Gram
positivos.
2 Diplococos Gram negativos.
Caja Petri 7. 1 Diplococos Gram negativos.
2 Staphylococcus Gram
positivos.
Estos son los resultados que se obtuvieron al realizar la morfología de las colonias y de igual manera la
morfología bacteriana, también en estos resultados se remarca que la caja Petri número cuatro no se pudo
identificar las colonias que presentaban y de la misma forma su morfología bacteriana.
En estos resultados se resalta aquellas partes que pertenecen y hablan sobre a la utilización de los medios de
cultivo y de la tinción de Gram.
Conclusiones
 Quistián García Hylary: Para lograr una
correcta identificación de bacterias hay
ciertas cosas que se deben tomar en
cuenta, de forma que los resultados
obtenidos sean satisfactorios.
El primero de estos es el medio de cultivo,
este debe ser seleccionado de acuerdo a la
utilización que se le va a dar, por ejemplo si
se busca sólo el crecimiento de bacterias
se puede utilizar el Agar nutritivo, en
cambio sí se busca diferenciar colonias se
podría utilizar un medio diferencial como el
EMB. Este a su vez debe cumplir con
ciertos factores como humedad adecuada,
nutrientes adecuados, pH adecuado, entre
otros.

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El siguiente factor para un buen desarrollo
de colonias es el estriado, este debe ser
realizado de manera adecuada para
obtener una buena formación de colonias.
No debe tocar las orillas de la caja Petri
porque el conteo resultaría complicado.
El siguiente paso es la identificación de las
diferentes colonias obtenidas así como el
número en que se encuentran cada una
(lectura de colonias y morfología de
colonias). Lo siguiente que se debe hacer
es la morfología bacteriana y para ello se
debe realizar una toma de muestras y una
tinción diferencial (en este caso Tinción de
Gram).
Al llevar a cabo la tinción es de suma
importancia respetar los tiempos cuando se
agrega una sustancia, ya que sí esto no se
lleva a cabo de forma adecuada puede
dañar las bacterias y no se lograría
observar nada.
El último paso es la morfología bacteria, en
esta parte después de realizar la tinción (y
si se llevó de forma adecuada) será posible
ver la forma que tienen las bacterias, así
como será posible definir si son Gram
Positivas o negativas, y de igual forma su
identificación.
 Ramírez Arellanos Génesis: En esta
práctica se aprendió la importancia de
preparar medios de cultivo, de que
materiales pueden ser hechos, los distintos
tipos de cultivos que pueden desarrollarse
en el laboratorio, así como su clasificación,
sus características principales, los distintos
tipos que pueden servir para identificar
diferentes bacterias, así como las
condiciones que estos deben tener .
De acuerdo con lo realizado en la presente
práctica se concluye que es de gran
importancia preparar adecuadamente los
medios de cultivo, añadir la cantidad de
solución exacta y disolverla correctamente
para obtener los resultados esperados.
 Ramírez Hernández Jessica: Se llegó a la
conclusión de que un medio de cultivo
correcto de acuerdo a su utilización es
necesario para observar el tipo de bacteria
o bacterias que queremos identificar, en
este caso Escherichia coli.
El tipo de estriado es importante para cada
tipo de medio de cultivo. Ya que se requirió
el crecimiento de cierto tipo de bacterias
fue el de crecimiento.
La morfología de colonia va estrechamente
relacionada con la de bacteria aunque en
esta última fue necesaria una tinción,
específicamente una diferencial: de Gram.
Se debe a que sin la primera no se pudo
haber tenido el orden para realizar la
segunda y posteriormente identificar.
La esterilización y desinfección es
fundamental en cada uno de los
procedimientos realizados, ya que se
previene la contaminación de nuestro
medio de cultivo y de nosotros.
Escherichia Coli de acuerdo a la tinción de
Gram es una bacteria en forma de Bacilos
Gram negativa debido a la delgada capa de
peptidoglucano que hace que después del
alcohol pierda el colorante añadido. Son
bacterias anaerobias facultativas pues
crecen con o sin oxígeno.
 Ramos Franco Michelle: En mi conclusión
el Streptococcus es una bacteria muy
contagiosa o principalmente algo ya
conocido que varias personas las tienen ya
muy presentes en la vida, esta bacteria se
ha observado que se puede generar muy
rápidamente, como en los agares que al
cultivarlos sabemos que todas esas
bacterias pueden ser contagiosas al olerlas
y que existen miles de ellas.
En el microscopio son muy fáciles de
observarlas y para poder observarlas
existen técnicas de tinción que ya aquí
vienen publicadas, que esta práctica
utilizamos la técnica de tinción Gram para
saber si son negativas o positivas.
 Ramos Juárez Mario: Es necesario saber
las técnicas de tinción para poder saber
cuáles la forma correcta de identificar
bacterias y microorganismos, para cuales
bacterias se hará por eso es necesario
saberlas todas y cómo funcionan y en que
bacterias funcionan, las técnicas de tinción
son muy difíciles de aprender para ello hay
que estudiar y practicar las diferentes
técnicas que hay. Gracias a las técnicas de
tinción se logró apreciar las bacterias y los

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hongos de manera correcta que había en el
cultivo.
 Rangel Osorio Hugo: Bueno en esta
práctica vimos cómo es que hay un medio
especifico en que las bacterias crecen tanto
como de temperatura y también como de
nutrientes que reciben del medio. A partir
de las heces fecales vimos q crecieron
diferentes colonias específicamente de 3 a
4 colonias de cajas Petri y había
aproximadamente por caja 200 colonias de
bacterias diferentes, en conclusión además
de que esta práctica me ayudo a ver lo que
hay en las heces fecales también supimos
cómo es que se hace un medio de cultivo y
también a observar (para saber cómo se
hace en ocasiones futuras) un método de
tinción que como ya sabemos nos sirve
para observar mejor los microorganismos y
sus organelos.
 Rascón Castrejón Lizeth: Los medios de
cultivo en un laboratorio de microbiología
son de suma importancia ya que, son
instrumentos de diagnóstico de bacterias
patógenas dentro de los individuos.
Los medios de cultivo son un método
fundamental para estudiar las bacterias es
cultivarlas en un medio líquido o en la
superficie de un medio
En microbiología se emplea medios de
cultivos por la simple razón que los
organismos a estudiar necesitan una fuente
de energía, para vivir y así desarrollarse,
por tal motivo, la preparación de los medios
de cultivos varían ya que deben de
prepararse según las necesidades
nutricionales del organismo, esto es
fundamental para su estudios. Esto consta
en disponibilidad de nutrientes, presencia
(o ausencia) de oxígeno y distintos gases,
condiciones adecuadas de humedad, luz
ambiental, pH, temperatura, adecuados
para el microorganismo. Una vez cultivados
dichos microorganismos no podemos dejar
de lado las técnicas de tinción que muy
importantes para el estudio de
microorganismos inertes. Para las técnicas
de tinción se aplica un colorante simple (un
solo colorante) o diferencial (dos o más
colorantes). Esto nos servirá para una
mejor visualización y con ellos un mejor
análisis de los microorganismos deseados.
 Reyes Marcial Luis Diego: Dentro de un
laboratorio de microbiología se hacen
diversos estudios y análisis que buscan
encontrar un dato que les proporcione una
respuesta convincente de una incógnita.
Existen varios tipos de análisis, pero los
comunes y los que se usaron en esta
práctica, fueron aquellos que buscan
identificar los organismos presentes en una
muestra.
En esta práctica en especial se tomó una
muestra diluida de heces fecales que
después se cultivó para desarrollar ciertas
habilidades, que entre ellas se comprendía
el aprendizaje general sobre los medios de
cultivo, su preparación, las técnicas de
vaciado, la manera de inocular, el estriado,
la morfología tanto bacteriana como de
colonias, y entre otras cosas las tinciones
para analizar las bacterias.
Como ya se dijo anteriormente, en esta
práctica se desarrollaron estos diferentes
aspectos, pero de igual manera se fortalece
lo aprendido anteriormente y los tipos de
medidas preventivas y de seguridad que se
deben tener al manejar microorganismos y
al realizar este tipo de procedimientos.
Al final se concluye, que como se muestra
en los resultados de la práctica, se
desarrollaron diferentes tipos y formas de
colonias que a su vez contenían diversos
microorganismos, como los diplococos y
también los bacilos. Pero para poder
anteriormente saber que conformaban
estas colonias se realizó la técnica de la
tinción de Gram y con ello se pudo
observar claramente la forma y color de las
que se tornaban los diferentes tipos de
microorganismos.
Con ello y tal vez más, se tiene que todos
estos procedimientos son de vital
importancia en el estudio de la
microbiología, y al trabajar en este ámbito.
Por ello quizá es, de una manera estricta,
comprender y aprender de ello, y además
nunca perderlo de vista.
 Ríos Palacios Selene: Estudiamos con
fines morfológicos y funcionales las
muestras de colonias, cultivándolas

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proporcionándoles técnicas de tinción para
darles una mejor exploración y exposición
al tema.
Se consiguió un buen resultado puesto que
hubo crecimiento de microorganismos en
los medios de cultivos realizados por los
compañeros y por los propios de la mesa.
Se habla también del gran aporte en el
conocimiento con trabajos y tareas
previamente elaboradas con respecto a las
técnicas utilizadas, al buen manejo y a la
aplicación de la teoría en la práctica.
Nos familiarizamos con las técnicas
empleadas para la manipulación de
microorganismo; Así como el manejo del
microscopio óptico para la visualización de
microorganismos y las tinciones más
comunes en el laboratorio de Microbiología.
Discusión
“Los medios de cultivo en microbiología”
Uno de los sistemas más importantes para la
identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio
en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000
medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en
un medio de cultivo artificial debe reunir una serie
de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presión de oxígeno adecuado, así como
un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
El agar es un elemento solidificante muy empleado
para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con
mínimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por
aquellas que crecen en él.
“Tinción”
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo
ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas
actividades metabólicas o bien por sus capacidades
de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos
microorganismos.
Se añaden colorantes que actúan como indicadores
para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o
como inhibidores del crecimiento de unas bacterias
y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador
ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido.
La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoria de las
bacterias Gram-positivas).
“Importancia de los medios de cultivo”
Los medios de cultivo bacterianos, son de suma
importancia en la Microbiología ya que gracias a
ellos podemos explorar algunos tipos de bacterias,
su composición, su alimentación, la manera en que
se reproducen y cuan patógenos son. Gracias a
estos medios podemos incubar las bacterias
provenientes de cualquier lugar.
Bibliografía
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2014, de
http://www.britanialab.com.ar/esp/produc
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http://www.juntadeandalucia.es/averroes/
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Mª Concepción Casado González, G. T. (2012).
http://libroslaboratorio.files.wordpress.co
m/. Recuperado el 10 de Octubre de 2014,
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http://libroslaboratorio.files.wordpress.co
m/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-laboratorio-
de-microbiologc3ada.pdf

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Anexos
Galería fotográfica
Agar Nutritivo:
Medios de cultivos selectivos
Para realizar el estudio de los microorganismos, se
han diseñado diversos métodos que permiten
cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que
es posible cultivarlos bajo condiciones
experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo. Una de las técnicas más usadas
en el laboratorio de microbiología consiste en
transferir una muestra microbiológica de un
ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que
nos permite obtener cultivos microbianos.
Al realizar este procedimiento, es necesario tomar
en cuenta que en el área de trabajo, existen
muchos otros microorganismos; y es necesario
tomar precauciones para impedir que éstos
contaminen los cultivos con los que estamos
trabajando. Por otra parte, para considerar no sólo
el aspecto nutricional, sino también las condiciones
ambientales de su hábitat natural, por lo que en el
medio de cultivo se debe ajustar el pH y
concentración de sales y durante la incubación
condiciones tales como la temperatura, aireación la
luminosidad. La aplicación de estos procedimientos
ha permitido propagar a los microorganismos en
cultivos mixtos, así como su aislamiento y la
obtención de cultivos puros, facilitando de este
modo, el estudio, caracterización, aplicación y
control de los mismos. La forma de sembrarlos y
cultivarlos depende del tipo de microorganismo y
propósito específico del estudio.
Agar Nutritivo
Medio de cultivo utilizado para propósitos
generales, para el aislamiento de microorganismos
poco exigentes en lo que se refiere a
requerimientos nutritivos.
Su uso está descripto en muchos procedimientos
para el análisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
Por las características de sus componentes es un
medio usado para el cultivo de microorganismos
poco exigentes en sus requerimientos nutricionales.
No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.
La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno
para el desarrollo bacteriano. El agregado de
cloruro de sodio permite el enriquecimiento con
sangre de carnero u otras sustancias para facilitar
el cultivo de microorganismos exigentes.
Siembra
En superficie o por la técnica de pour plate, según
el uso a que se destine.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 horas.
Resultados
Características del medio
Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente
opalescente.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB)

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Es una combinación del medio de Levine y el de
Holt-Harris y Teague, contiene una mezcla de
peptonas según Levine y presenta dos
carbohidratos lactosa y sacarosa.
Este medio de cultivo permite una diferenciación
muy clara entre las colonias de organismos
fermentadores de lactosa y aquellos que no la
fermentan; el contenido de eosina y azul de
metileno inhiben en cierto grado organismos Gram
positivos. La presencia de sacarosa permite para
algunos miembros del grupo coliforme fermentarla
con más facilidad que la lactosa. Las colonias
lactosa positiva son azules a moradas con brillo
metálico o poseen centros oscuros con periferias
transparentes incoloras y las que son negativas en
lactosa o sacarosa, se observan incoloras o rosa
pálido transparentes.
Sembrar el medio de cultivo con la muestra de
ensayo por estría cruzada. Incubar 24 – 48 h a
35ºC. PREPARACION: Rehidratar 36 g del medio
en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15
minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el
punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo
por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15
lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri
estériles. Conservar a temperatura ambiente.
Siembra:
En superficie, por estriado a partir de un inóculo
poco denso, para obtener colonias aisladas. En
profundidad, para favorecer el desarrollo de
clamidosporas.
Características del medio:
Placas preparadas: color púrpura. La esterilización
del medio de cultivo reduce el azul de metileno al
color naranja. El color púrpura se restaura por
agitación. La presencia de un precipitado en el
medio esterilizado es normal y no debe ser
removido, ya que es parte esencial del mismo.
Observación de estreptococos
El género Streptococcus es un grupo de bacterias
formado por cocos gran positivos pertenecientes al
filofirmicutes1 y al grupo de las bacterias ácido
lácticas. Estas bacterias crecen en cadenas o
pares, donde cada división celular ocurre a lo largo
de un eje. Las especies de estreptococos que
producen enfermedades son:
• Estreptococos del grupo A: Streptococcus
pyogenes producen amigdalitis impétigo.
• Estreptococos del grupo B: Streptococcus
agalactiae producen meningitisen neonatos y
trastornos del embarazo en la mujer.
• Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la
principal causa de neumonía adquirida en la
comunidad.
• Streptococcus viridans es una causa importante
de endocarditis y de abscesos dentales.
• Streptococcus mutans causa importante de caries
dental. Pertenece al grupo de estreptococos
viridans.
Características:
La mayoría de las especies de Streptococcus son
anaerobios facultativos, y algunos crecen
únicamente en una atmósfera enriquecida con
dióxido de carbono (crecimiento capnofílico). Sus
exigencias nutricionales son complejas, y su
aislamiento requiere el uso de medios enriquecidos
con sangre o suero. Son capaces de fermentar
carbohidratos produciendo ácido láctico y también
son catalasa negativas a diferencia de los
estafilococos.
Tinción
Aparte de la tinción de Gram existen otros tipos de
métodos como los mencionados a continuación:
Tinción de ácido-alcohol resistencia
Se trata de un procedimiento de tinción diferencial,
conocido como método de Ziehl-Neelsen, que tiene
gran relevancia por su aplicación clínica. Permite
poder distinguir aquellos microorganismos cuya

11. CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 128
coloración resiste la acción de alcoholes y ácidos
suaves (ácido-alcohol resistente) de otros que no
resisten la decoloración (no ácido-alcohol
resistente).
TINCIONES ESTRUCTURALES
Son tinciones para la observación al microscopio
óptico de determinadas estructuras de los
microorganismos, estas tinciones incluyen la
visualización de cápsulas, endosporas, flagelos etc.
Tinción de cápsulas
La cápsula es una estructura que rodea
externamente la pared de algunos microorganismos
y constituye una barrera física que protege a la
célula del ambiente externo, proporcionando
numerosas ventajas a los microorganismos que son
capaces de sintetizarla, por ejemplo, en las
bacterias patógenas la cápsula permite la adhesión
al hospedador o protege de la fagocitosis, en otros
casos incrementa las posibilidades de sobrevivir en
condiciones de desecación en bacterias que
colonizan ambientes naturales, o bien previenen el
ataque de algunos virus, en otras ocasiones son
importantes factores de virulencia en algunas
especies clínicamente relevantes como es el caso
de Streptococcus pneumoniae y también
proporcionan importantes ventajas al facilitar la
adhesión a superficies sólidas.