introducción a las técnicas experimentales en microbiología

1. Métodosdeestudiodelosmicroorganismos
Microbiología

2. CULTIVOS MICROBIANOS
El cultivo o mantenimiento de los microorganismos en
laboratorio requiere la preparación de unos medios de cultivo y
las condiciones adecuadas para su crecimiento.
aislamiento cultivo Crecimiento
Estudio e
identificación
Medios de cultivo
Esterilización y condiciones asépticas

3. Para obtener un cultivo puro de una estirpe microbiana se inocula una única célula en
un medio de cultivo apropiado. En condiciones favorable, la célula se multiplica
originando un clon.
Una colonia es una población clonal lo suficientemente grande como para ser
observada a simple vista sobre la superficie de un medio sólido. Un colonia de tamaño
medio contiene alrededor de 109 células.
El aislamiento suele realizarse sobre un medio sólido y consiste en la separación de las
células a partir del inóculo inicial por distintos procedimientos
Aislamiento de microorganismos

4. Medio líquido, en matraz o en tubo de
ensayo
Medio sólido, en placa de Petri (agar)
Medios de cultivo

5. Métodos de cultivo
2. Manipulando los cultivos en condiciones asépticas. Cuando se
destapan y manipulan los cultivos debe evitarse la entrada de aire o
el contacto con elementos que puedan estar contaminados. Por eso,
la transferencia de un medio a otro se realiza en la proximidad de la
llama de un mechero con un asa de siembra
Debido a su pequeño tamaño y a su ubicuidad, los microorganismos que
se encuentran en el aire, en las manos o en el material de laboratorio
pueden contaminar fácilmente los medios de cultivo.
Para evitarlo, se mantienen en todo momento condiciones asépticas
1. Esterilizando los medios de cultivo y el material utilizado

6. La esterilización consiste en eliminar totalmente los microorganismos de
los medios de cultivo, el material y los utensilios de laboratorio.
Los métodos de esterilización pueden ser físicos (calor, radiaciones, …) o
químicos (microbicidas como lejía). En este último caso es importante que
el compuesto utilizado sea volátil para que se pueda eliminar fácilmente
del objeto esterilizado.
Técnicas de esterilización

7. En condiciones ambientales favorables (temperatura, disponibilidad de
nutrientes, …) la poblaciones de microorganismos experimentan un
incremento rápido en el número de células.
La mayoría de los cultivos microbianos en laboratorio se llevan a cabo en
cultivo cerrado, de modo que ni se añaden nutrientes ni se retiran
desechos. En estas condiciones el ciclo de crecimiento presenta cuatro
fases.
Crecimiento microbiano

8. Observación de microorganismos
La observación de los microorganismos debe realizarse al
microscopio.
Para la preparación de las muestras pueden emplearse técnicas de
preparación en fresco o tinciones.
Entre estas suele utilizarse la Tinción de Gram, una tinción
diferencial que permite distinguir entre dos tipos de bacterias en
función de la composición y estructura de su pared. Las Gram
positivas retienen el colorante fundamental (crista violeta) y las
Gram negativas lo pierden al lavarlas con alcohol y se tiñen con el
colorante de contraste (safranina)

9. Glosario
Esterilización: Eliminación de toda forma de vida microbiana, incluidas las
esporas
Antibióticos: Sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de
otro ser vivo
Antisépticos: Sustancias químicas que previenen el crecimiento o acción de los
microorganismos, ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad
Clon: Un conjunto de seres genéticamente idénticos que descienden de un
mismo individuo por mecanismos de reproducción asexual
Asepsia: Técnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al
campo de trabajo
Inocular: Introducir un inóculo, es decir, una pequeña cantidad de
microorganismos en un medio de cultivo
Microbicida: Agente que mata formas vegetativas, pero no necesariamente las
esporas de un microorganismo
Microbiostático: Agente que inhibe el crecimiento de microorganismo