traduccion

1. toxicidadalargo plazode un herbicidaRoundupyunmaíz Roundup-tolerantgenetically
modificado
Gilles-EricSéraliniEmail autor,EmilieClair,RobinMesnage,Steeve Gress,NicolasDefarge,
ManuelaMalatesta,DidierHennequinyJoel Spirouxde Vendômois
CienciasAmbientalesEuropeBridgingCienciayReglamentoenel Level201426 regional yeuropeo:
14
DOI: 10.1186 / s12302-014-0014-5 © Séralini etal .; licenciatarioSpringer2014
Recibido:22 Marzo 2014Accepted: 16 May 2014Published:24 Junio 2014
Abstracto
Fondo
Los efectossobre lasaludde un NK603 tolerante aglifosatogenéticamente modificadasde maíz
(GM) (del 11% enla dieta),cultivadasconosinaplicaciónde RoundupyRoundupalone(de 0,1ppb
del plaguicidacompletaque contienenglifosatoyadyuvantes) indrinkingagua,fueronevaluados
durante 2 añosenratas. Este estudioconstituye unainvestigaciónafollow planode unestudiode
alimentaciónde 90días llevadoacabo por Monsanto enordertoobtenerlaliberacióncomercial
de este OMG, empleandolamismacepade rata andanalyzingparámetrosbioquímicosenel
mismonúmerode animalesporgrupocomoourinvestigation.Nuestrainvestigaciónrepresentael
primerestudiocrónicoenthesesubstances,enel que todaslasobservacionesque incluyen
tumoressonreportedchronologically.Porlotanto,nofue diseñadocomounestudiode
carcinogénesis.NosReportThe principaleshallazgosobservadoscon34 órganosy 56 parámetros
analizadosen11 puntosde tiempoparala mayoríade losórganos.
resultados
Los análisisbioquímicosconfirmarondeficienciasmuysignificativasrenalescrónicas,forall
tratamientosyde ambossexos;El 76% de losparámetrosalteradosfuerontratadoskidney-
related.Invarones,congestioneshepáticasynecrosisfueronde 2,5a 5,5 veceshigher.Markedy
nefropatíasseverastambiénerangeneralmentede 1,3a 2,3 vecesmayor.Infemales,todoslos
gruposde tratamientomostraronunaumentode dosa tres vecesenlamortalidad,ylasmuertes
eranantes.Esta diferenciatambiénfue evidente entresgruposde hombresfedwithmaíz
transgénico.Todoslosresultadosfueronhormonasysexo-dependiente,ylospathologicalprofiles
erancomparables.Lashembrasdesarrollarontumoresmamariosgrandesmásfrequentlyand
antesde los controles;lapituitariafue el segundoórganomáspersonascondiscapacidad;el
equilibriosexhormonal se modificóporel consumode maíztransgénicoyRoundup
treatments.Malespresentahastacuatro vecesmásgrandestumorespalpablesde partida600

2. daysearlierque enel grupocontrol,enel que se observósólountumor.Theseresultspueden
explicarse nosóloporel perturbadoresdel sistemaendocrinonolineal effectsof Roundup,sino
tambiénporla sobre-expresióndel transgenEPSPSoefectosothermutational enel maíz
transgénicoysus consecuenciasmetabólicas.
Conclusión
Nuestrosresultadosimplicanque debenllevarse acabotothoroughlyevaluarlaseguridadde los
alimentostransgénicosypesticidasensusplenoscommercialformulationsalargoplazo(2 años)
pruebasde alimentación.
Palabrasclave
disrupciónendocrinaherbicidasabase de glifosatoRoundupOGMNK603 rata genéticamente
modificado
cienciasnaturalesysocialesproducenconocimientoempírico(enalemán:Wissenschaftenschaffen
Wissen) que debe describiry explicarlosfenómenospasados ypresentesandestimate su
desarrollofuturo.Coneste finlosmétodoscuantitativossonused.Progressenlaciencianecesita
de debatespolémicosdestinadosalosmejoresmétodoscomobasisforobjetiva,fiable y
resultadosválidosque se aproximaloque podríaserla verdad.Suchmethodological la
competenciaeslaenergíanecesariaparael progresocientífico.Enthissense,ESEUtiene como
objetivopermitirdiscusionesracionalesque tratanconel artículo de G.-E.Séralinietal.(Food
Chem.Toxicol 2012, 50:. 4.221 hasta 4.231) por la re-publishingit.Al hacerlo,cualquiertipode
valoracióndel contenidodeldocumentonodebe beconnoted.El únicoobjetivoespermitirla
transparenciacientíficay,sobre estabase,adiscussionque noocultasinoque pretende centrarse
metodológicocontroversies.-WinfriedSchröder,editorde laserie temática"Implicaciones
forGMO-cultivoyseguimiento"enCienciasdelMedioAmbienteEuropa.
Fondo
Existe undebate encursointernacional en cuantoa lalongitudnecesariade losestudios
mammaliantoxicity,incluidoslosanálisismetabólicos,enrelaciónconel consumode ofgenetically
modificados(GM) lasplantas[1].En la actualidad,ningunaautoridadreguladorarequiere
feedingstudiesobligatoriosanimalescrónicaque se debenrealizarparacomestiblesorganismos
modificadosgenéticamente(OMG),oestudiosevenshortplazoconlosanálisisde sangre paralas

3. formulacionescompletasofpesticidescomercialesvendidoyutilizado,perosólopara el principio
activodeclarado,solo.Sinembargo,variosensayosde alimentaciónde ratasde 90 días se han
llevadoacabo por el biotechnologyindustryagrícola.Estasinvestigacionesse refieren
principalmente alasojay el maíz GM que sonengineeredeitherparaser tolerante aherbicidas(al
Roundup(R) enel 80% de loscasos),o para producirun insecticidaamodifiedtoxinaBt,oambos.
Comoresultado,estoscultivostransgénicoscontienenresiduosnewpesticide paralosque se han
establecidonuevoslímitesmáximosde residuos(LMR) enalgunospaíses.
Aunque lospeticionariosconcluyenque,engeneral,nohaygrandescambiosfisiológicos
isattributable al consumodel OMGenlosestudiosde toxicidadsubcrónica[2-5],alteraciones
significativasse hanencontradoypuedenserinterpretadosde maneradiferente [6,7].Un análisis
detalladode losdatosde losestudiosde toxicidadsubcrónica[2-5] hapuestode manifiesto
alteracionesestadísticamente significativasenlosriñonesyliverfunctionque pueden constituir
indiciosde laaparicióntempranade latoxicidadcrónica.Estopuede beexplainedal menosen
parte por residuosde plaguicidasenlaGMalimentar[6,7]. De hecho,se ha demostradoque las
concentracionesde Renla gama of103 vecespordebajo del LMR puedeninduciralteraciones
endocrinasenlascélulashumanas[8] ya partirde entonceslosefectostóxicos[9].Estopuede
explicarlosefectostóxicosobservadosenlosexperimentosenratasinvivo[10], así como en
animalesde granja[11].Despuésde variosmesesde consumode lasojatolerante aR, los
andpancreashígadode ratonesse vieronafectados,comose destacaporalteracionesenla
estructurade sub-nuclear[12-14].Además,este efectotóxicofue reproducidoporlaaplicaciónde
Rherbicide directamente aloshepatocitosencultivo[15].
Más recientemente,losensayosde alimentaciónanimal multigeneracionalesalargoplazoy han
beenperformed,conalgunosposiblemente proporcionarevidenciade laseguridad,mientrasque
otros concluyenenthenecessityde unainvestigaciónmása causa de modificacionesmetabólicas
[16]. Sinembargo,encontraste con el estudioreportamosaquí,ningunode estos
previousinvestigationshaberincluidounseguimientodetalladode losanimales,incluyendo
múltiples(hasta11) tomar muestrasde sangre y orinaa lolargo de 2 años,y ningunoha
investigadobienel GMNK603 R tolerantesel maízo el Roundup.
Además,laevaluaciónde toxicidadalargoplazode losherbicidasse realizageneralmente
onmammalianfisiologíaempleandosólosuprincipioactivo,enlugarde loscompleteformulations
tal comose usa enla agricultura.Este fue el casopara el glifosato (G) [17],el componente activo
declaradoquímicade R. Es importante tenerencuentathatgsóloes capaz de penetrarde manera
eficienteorganismosvegetalesobjetivoconlosofadjuvantsayudarapresentarenlasdiversas
formulacionesRusadascomercialmente[18]. Inclusosi G ha demostradoque interactúan
directamente conel sitioactivode altosnivelesde aromataseat[19],anivelesbajos

4. contaminantes,losadyuvantespuedensermejorescandidatosque Gtoexplainlatoxicidado
endocrinosefectossecundariosperturbadoresde Rencélulashumanas[8,20] y tambiéninvivo
para la toxicidadaguda[21].A este respecto,esde destacarque el extremomayortoxicidadde las
formulacionesfullagricultural encomparaciónconlosprincipiosactivosdeclarados supuestasolo
hasrecentlyhademostradotambiénparaotrosseisplaguicidasprincipalesprobadosinvitro[22].
Cuandolosresiduosde G se encuentranenel agua del grifo,losalimentosopiensos,que surgen
de la formulaciónherbicidathetotal aunque hay pocosdatosdisponiblesencuantoa losniveles
de losRadjuvants,yasea enel medioambiente ode lacadenaalimentaria.De hecho,los
adyuvantesse rarelymonitoredenel medioambiente,peroalgunosadyuvantesutilizados
(surfactantes) talesetoxilatos asnonylphenol,otrotensioactivoetoxiladocomoPOEA presente en
R, encontraronarewidelyenlosríosde Inglaterray estánvinculadosconlainterrupciónde lavida
silvestre SexualReproduction[23].Losadyuvantesse encuentranenlasaguassubterráneas [24].
La vidamediade POEA (21 a 42 días) es inclusomáslargoque para G (7 a 14 días) en ambientes
acuáticos[25]. Comoresultado,lanecesidadde estudiarlosposiblesefectostóxicosde lasmezclas
totalchemical enlugarde loscomponentesindividualesse haenfatizadofuertemente [26-28].
Sobre estabase,la mediciónregularde sóloGu otrossupuestosingredientesactivosde
plaguicidasenel medioambienteconstituye enel mejorde losmarcadoresde residuos
fullformulation.Porlotanto,enel estudiode losefectossobre lasalud,laexposiciónala
formulacióndilutedwhole puede sermásrepresentativade lacontaminacióndel medioambiente
de la exposiciónTOGsolo.
Con el finde hacerfrente a estafaltade información,se realizóunestudiodetalladoratfeeding2
años.Nuestroestudiose diseñócomounestudiode toxicidadcrónicaycomodirectfollowprevio
a una investigaciónanteriorsobre el mismomaízNK603 GM llevadaacabo por thedeveloper
compañía,Monsanto [3].Un análisiscríticodetalladode losdatosenbrutode este estudio
subcrónicaratfeeding90días revelódiferenciasestadísticamentesignificativasenmúltiples
functionparametersde órganos,especialmente relacionadaconel hígadoy losriñones,entre el
MM y el grupo no GMmaize alimentado[3,7].Sinembargo,losautoresde Monsantodesestimó
lasconclusionesnot'biologicallysignificativa"[3],comotambiénlofue el casocon otro maíz
transgénico[29].La AutoridadEuropeade SeguridadAlimentaria(AESA) aceptóel maízNK603 de
Monsantointerpretationon[30],al igual que enlosdemáscasos.
Nuestroestudioesel primeroyhastalafechael únicointentode seguimiento
Monsanto'sinvestigationyparadeterminarsi lasdiferenciasencontradasenlosde maízNK603-
fedratstransgénicos,especialmenteconrespectoala funciónhepáticayrenal,noeran
biologicallymeaningful,comose afirma,osi desarrollaronenenfermedadesgravesdurante un
extendedperiodde tiempo.

5. Los autoresde Monsanto adaptadosDirectriz408 de la Organizaciónparala Cooperacióny
DesarrolloEconómicooperationandDesarrollo(OCDE),porsudiseñoexperimental [3].Nuestro
diseñodel estudiose basóenel de la investigaciónde Monsantoconel fintomake losdos
experimentoscomparables,peroextendióel períodode observaciónde 90 días de fromMonsanto
a 2 años.Tambiénse utilizarontresdosisde organismosmodificadosgenéticamente (enlugarde
Monsanto'stwo) yRounduppara determinarlarespuestade dosisde tratamiento,asícomo
cualesquieraotrasque no sonlinearasasícomo losefectoslineales.Estonospermitióseguiren
detalle lashealtheffectspotencialesysusposiblesorígenes,debidoalasconsecuenciasdirectaso
indirectasde lamismamodificaciónthegeneticenel maízNK603 GM, o debidoal herbicidaR
formulationusedsobre el maíztransgénico(ynoG solo),oambos.Debidoarecientesrevisiones
enGM foodsindicatingningúnriesgoespecíficode cáncer[2,16], peroque indicansignosde
disfunciónhepatorrenaldentrode los3meses[1,7], teníamosningunarazónpara adoptarun
protocolode carcinogénesisutilizando50ratas por group.However,prolongamosa2 años las
medicionesbioquímicasyhematológicasandmeasurementsde estadode laenfermedad,segúnlo
permitan,porejemplo,enlosprotocolosde laOCDE453 (toxicidadycarcinogenicidad
combinedchronic) y452 (toxicidadcrónica).AmbosOCDE452 y 453specify20 ratas por sexoy
grupo,perorequierensóloel 50%(diezporsexoporgrupo,el samenumberque utilizamosen
total) que debenanalizarse bioquímicoyhematologicalparameters.Porlotanto,estosprotocolos
producendatosde un mismonúmerode ratas comoourexperiment.Estosigue siendoel másalto
númerode ratas medidosregularmente enunestudioestándarGMdiet,asícomopara un
plaguicidaformuladocompletoennivelesmuybajosenvironmentallyrelevant.
Se utilizólacepaSprague-Dawleyde rata,tal como se recomiendaparalas pruebasde toxicología
crónica bythe ProgramaNacional de ToxicologíaenlosEE.UU. [31], y tal como se utilizapor
Monsantoen su estudiode 90 días [3].Esta opcióntambiénesconsistente conlarecomendación
de la OCDE que losforosensayode toxicidadcrónica,lasratas de la mismacepase debenutilizar
como enlosestudiossobre thesame sustancia,perode menorduración[32].A continuación,
tambiénapruebapor primeraveztresdosis(enlugarde la twousuallyempleadoenlosprotocolos
de 90 días) del maíz NK603 GM R tolerantesasolas,el GMmaize tratada con R, y R solaen dosis
muybajas de relevanciaambiental,startingbelow lagamade losnivelespermitidosporlas
autoridadesreguladorasde aguapotable yalimentacióninGM.
En general,nuestroestudioesel primerestudiode toxicologíaenprofundidadde todalavidaen
la formulaciónRoundupfullcommercial ymaízNK603 GM, con las observacionesen34 órganos
andmeasurementde 56 parámetrosanalizadosen11 puntosde tiempoparala mayoría de los
órganos,y 3dosesque utilizan.Presentamosaquílosprincipalesresultadostoxicológicossobre
múltiples sistemasde órganos.Asthere huboevidenciaenlaliteraturasobre laevaluaciónde
inocuidadde losalimentosGMpara indicateanythingporel contrario,estainvestigacióninicial fue
diseñadocomounchronictoxicitycompletaynoun estudiode carcinogénesis.Porlotanto,

6. monitoreamosendetalleschronologicallyall anormalidadesde comportamientoyanatómicasque
incluyentumores.Uncarcinogenicitystudycompleto,que porlogeneral se centraúnicamenteen
la observaciónde laincidenciayel tipode cánceres(tumoresnoalwaysall),seríaunainvestigación
racional de seguimientoaunestudiode toxicidadcrónicainwhichque hayunasospechagrave de
carcinogenicidad.Talesindicacionesnohabíanbeenpreviouslyreportadoparalosalimentos
modificadosgenéticamente.
Nuestrosresultadosmuestranque lasdiferenciasenlosparámetrosfuncionalesde órganos
múltiplesvistosfromtheconsumode maíztransgénicoNK603durante 90 días [3, 7] escaladomás
de 2 años endañosorgánicosgravesentodo tipode testdiets.Estoincluyóladosismásbajade R
administrado(0,1ppb,50 ng / LG equivalente) de laformulaciónRse administra,que esbien
belowpermittedLMRtanto enlosEE.UU. (0.7 mg / L) [33] y de laUnión Europea(100 ng / L) [34].
Sorprendentemente,tambiénhabíaunaclara tendenciaenaumentode laincidenciade tumores,
especialmentetumoresmamariosenanimaleshembra,enunnúmerode losgruposde
tratamiento.Ourdatade relievelainsuficienciade losestudiosde alimentaciónde 90 días y la
necesidadde conductlongplazo(2años) investigacionesparaevaluarel impactode todala vidade
foodconsumptionGMy la exposiciónacompletarlasformulacionesde plaguicidas.
resultados
Los análisisbioquímicosde laalimentaciónde maíz
análisisde lacomposiciónbioquímicaestándarnorevelódifferencesbetweenparticular,los
diferentestiposde maízy lasdietas,el MMy classifiedassiendomaíznomodificado
genéticamente sustancialmente equivalentes,exceptoparalacuantificaciónde ADN transgénico.
Por ejemplo,nohubodiferenciaenisoflavonastotales.Además,tambiénse ensayaronpara
compuestosotherspecific,que nosiempresonsolicitadosparaestablecersubstantialequivalence.
Este análisisrevelóun(p<0,01) disminuciónconsistente yestadísticamentesignificativaenciertos
ácidosfenólicosenlasdietasde tratamiento,namelyferulicyácidoscafeico.El ácido ferúlicose
redujoendietasmaíz+ R, tanto de maíz GM y GM en un16% a un 30% encomparacióncon la
dietade control (889 ± 107, 735 ± 89, respectivamente,control frente a1.057 ± 127 mg / kg) y
ácidocafeicoenlossamegroupsde 21% a 53% (17,5 ± 2,1, 10,3 ± 1,3 vs. 22,1 ± control de 2.6mg /
kg).
observacionesylosparámetroshepáticosanatomopatológico

7. Todas lasratas fueronmonitorizadoscuidadosamentedurante el experimentoparael
comportamiento,laapariencia,lostumorespalpables,ylasinfecciones.Al menosdiezórganos
por animal se pesaronyanalizaronhasta34 postmortem, enlosniveles(Tabla1) macroscópicay /
o microscópica.Debidoalagran cantidadde datosrecogidos,puede que notodosse muestranen
un informe,peroque aquíse presentael mayornúmerode importantfindings.Nohabíaningún
rechazode losanimalesde ladieta,cono sinGM de maíz, ni ningunadiferenciaimportante enel
pesocorporal (datosno mostrados).
tabla1
Protocoloutilizadoylacomparaciónconla evaluaciónexistente ypruebasno
mandatoryregulatory
Tratamientosyanálisis
En este trabajo
Hammondet al.2004
pruebasreglamentarias
Animalesmedido/grupo/sexo
10/10 ratas SD (200 ratas midieron)
10/20 ratas SD (200 ratas midieron/total de 400)
Al menos10 roedores
Duraciónen meses
24 (crónica)
3 (subcrónica,13 semanas)
3
Las dosisde tratamiento
3
2
Al menos3
Tratamientos+ controles
OGM NK603, NK603 OMG + Roundup,Roundup,yisogenicmaize máscercano

8. OGM NK603 + Roundup,el máscercano de maíz isogénicas,yotros6 linesnonmaíz
sustancialmente equivalente
OMG o productosquímicos(endietaestándaroagua)
Animalesporjaula(mismosexo)
1-2
1
1 o más
Monitoreo/semana
2
1
1 o más
Los órganosy tejidosestudiados
Para una altadosisy controles
órganosponderan
10
7
Al menos8
Histología/ animal
34
17/36
Al menos30
La microscopíaelectrónica
Sí
No
No

9. El alimentoyaguaconsumos
Mesurado
Para lospiensos,sólo
Al menosfeed
Los estudiosde comportamiento(veces)
2
1 (sinprotocolodado)
1
Oftalmología(veces)
2
0
2
parámetrosde la sangre
31 (11 vecesmás) para
31 (2 veces)
Al menos25 (porlo menos2 veces)
esteroidessexualesPlasma
La testosterona,estradiol
No
No,salvosi los efectosendocrinossospecha
Númerode muestrasde sangre / animal
11, cada mes(0 a 3) luegocada 3 meses
2, semana4 y 13
1, al final
parámetrosestudiadosorina
dieciséis

10. 18
7 si se realiza
Númerode muestrasde orina
11
2
Opcional,lasemanapasada
parámetrosde tejidohepático
6
0
0
residuosde Roundupenlostejidos
Estudió
no se ha estudiado
No esobligatorio
Microbiologíaenhecesuorina
Sí
Sí
No
Transgénenlostejidos
Estudió
no se ha estudiado
no se ha estudiado
El protocoloutilizadoeneste trabajose comparóconla de maíz ofNK603 evaluaciónlegal de la
empresa(Hammondetal.,2004), y para nomandatoryregulatoryensayosinvivoparalosOMG, u
obligatoriaparalosproductosquímicos(OECD408). Los resultadosmásrelevantesse muestranen
este documento.

11. Los órganosmás afectadosenlosmachosfueronel hígado,el tracto hepatodigestivo,ylosriñones
(Tabla2; Figura1A, B, C, D, E, F,G, H, I).anormalidadesenel hígado,como congestioneshepáticas
andmacroscopicyfocos necróticosmicroscópicosfueronde 2,5 a 5,5 vecesmásfrecuente en
alltreatmentsque enlosgruposde control,enlosque sólodosratas de cada diezfueronafectados
withone anormalidadcadauno.Por ejemplo, hubo5anomalíasen total enel grupo GMO11% (2,5
vecesmayorque enlos controles) y11 en el grupode 22% de OGM (5,5 timesgreater).Además,
por el final del experimento,laactividadhepáticaGammaGT wasincreased,enparticularenlos
gruposde GMO + R (hasta5,4 vecesmayor),este probablybeingreflectantede disfunción
hepática.Porotra parte,el citocromoP450 aumentóactivitygenerallyenpresenciade R(yasea en
el agua potable oenla dietaGMmaize que contiene) de acuerdoconladosisy hasta 5,7 veces
mayor enthehighestdosis.
Tabla 2
Resumende laspatologíasanatómicasmásfrecuentesobservados
Los órganosy patologíasasociadas
controles
GMO 11%
GMO 22%
GMO 33%
R (A)
R (B)
R (C)
GMO 11% + R
GMO 22% + R
GMO 33% + R
Los varones
Los riñones, el PCN
3 (3)
4 (4)

12. 5 (5)
7 (7)
6 (6)
5 (5)
3 (3)
5 (5)
4 (4)
4 (4)
hígado
2 (2)
5 (4)
11 (7)
8 (6)
11 (5)
9 (7)
sesentaycinco)
5 (4)
7 (4)
sesentaycinco)
tracto hepatodigestivo
sesentaycinco)
10 (6)
13 (7)
9 (6)
23 (9)
16 (8)

13. 9 (5)
9 (6)
13 (6)
11 (7)
Las hembras
pituitaria
9 (6)
23 (9)
20 (8)
8 (5)
22 (8)
16 (7)
13 (7)
19 (9)
9 (4)
19 (7)
Glándulasmamárias
10 (5)
22 (8)
10 (7)
16 (8)
26 (10)
20 (10)
18 (9)
17 (8)

14. 16 (8)
15 (9)
Los tumoresmamarios
8 (5)
15 (7)
10 (7)
15 (8)
20 (9)
16 (10)
12 (9)
10 (6)
11 (7)
13 (9)
Despuésde que el númerode anomalíaspatológicas,el númerode ratasaffectedoutde lainicial
de diezse indicaentre paréntesis.Sólomarcadosonefropatíasprogresivasseverechronic(CPN) se
enumeranenanimalesmachos,conexclusiónde dosnephroblastomasengruposque consumen
el 11% y OMG OMG 22% + Roundup.signospatológicoshepatodigestivoenloshombresse
refierenael hígado,el estómagoyel intestinodelgado(duodeno,íleon,oyeyuno).
Pathologicalsignsenel hígadosonensumayoría congestiones,manchasmacroscópicas,yfocos
microscopicnecrotic.Enlasmujeres,lasdisfuncionesde lapituitariaincluyenadenomas,
hiperplasias,yse hipertrofia.fibroadenomasmamariosyadenocarcinomasare losprincipales
tumoresdetectados;galactocelese hiperplasiasconatypiawere tambiénencontraronyse añaden
a los signospatológicosenlasglándulasmamarias.
https://static-content.springer.com/image/art%3A10.1186%2Fs12302-014-0014-
5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig1_HTML.jpg
Figura1
observacionesanatomopatológicasenratasalimentadascontransgénicostratadosonopor los
efectosRoundupandde Roundupsolos.fotografíasmacroscópicas(A aD) andmicroscopic(A 'y C')
muestranizquierdamachoriñonesandlivers(Ea I) y pituitarias femeninos(JaM),
conformidadconlosalaTabla 2. El númerode cada animal anditsse especificael tratamiento.

15. manchaspálidasmacroscópicas(I) yfocos microscopicnecroticenel hígado(G focode células
claras,H basófilofocuswithatipia),ynefropatíascrónicasprogresivasmarcadosograves,
areillustrated.Enlasmujeres,losadenomashipofisarios(KaM) se comparó con el control
shownand(J,númerode ratasy C para el control) despuésde .Apostrophesletrasindicanlos
órganosde lamismarata.
electrónicasde transmisiónobservacionesmicroscópicasde muestrasde hígadoconfirmaron
cambiosforall grupostratadosenrelaciónconla dispersiónde glucógenoolaaparienciaenlos
lagos,aumentode cuerposresidualesylaampliaciónde lascrestasen lasmitocondrias(Figura2,
panelesde 2 a 4). El groupseitheralimentadosconmaíz GM con o sinaplicaciónRmostró un
contenidomásaltode heterocromatinaanddecreasedcomponentesnucleolaresfibrilardenso,lo
que implicaunareduccióndel nivel de ARNmandrRNA transcripción.Enel grupoOMG + R (a la
dosismásalta),el retículosmoothendoplasmicse incrementódrásticamente ynucleolos
disminuidode tamaño,llegandoasermás compacto.En los gruposde tratamientosolosR,se
observarontendenciassimilares,conunareanudaciónparcial de laactividadnucleolaraladosis
más alta.
https://static-content.springer.com/image/art%3A10.1186%2Fs12302-014-0014-
5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig2_HTML.jpg
Figura2
Ultraestructurade loshepatocitosenratas machosde los gruposque presentanthegreatestgrado
de patologíahepática.(1) control de hepatocitosde ratatípica (barra 2 micrasexceptoen4).(2)
Efectoscon Roundupenel lowestdose.El glucógeno(G) se dispersaenel citoplasma.L,gotasde
lípidos;N,núcleo;R,retículoendoplasmáticorugoso.(3) Losdetallesde losefectosdel
tratamientodietéticowith22%OGM(barra 1 micra).ungrupo de cuerposresiduales(asteriscos);
b, mitocondriasmuestranmuchossuscrestasampliada(flechas).(4) Los hepatocitosofanimal
alimentade maíztransgénico(OGM) enel 22% de la dietatotal.Grandeslagosde glucógeno
occurinel citoplasma.M, mitocondrias.
riñonesdegenerandoconzonasinflamatoriasturgentesdemostraronlaincreasedincidence de
nefropatías crónicasprogresivasmarcadasyseveras,que aumentarontotwovecesmayorenel
maíz transgénico33% o gruposde tratamientoscondosismásbajasR (Tabla2; Figura1 FirstLine).
Los análisisbioquímicosde muestrasde sangre yde orina
medicionesbioquímicasde lasangre y laorina se centraronenmuestrastomadasen el puntode
tiempo15thmonth,yaque éste era el últimotiempode muestreocuandolamayoríade los
animaleseranStillAlive(enlosgrupostratados90% hombres,94% mujeres,y100 controles%).
Statisticalanalysisde losresultadosempleadoOPLS-DAmodelosde clase 2construidosentre cada
sexogrouppertratadosy loscontroles.SólomodelosconunavarianzaexplicadaR2(Y) ≥80%, y un
Q2 validacióncruzadapredictivocapacidad(Y) ≥ 60%, eran de selecciónausarpor una de las

16. variablesdiscriminantes(Figura3),cuandosuscoeficientesde regresiónfueronsignificativasaun
99 % nivel de confianza.Así,enlashembrastratadas,fallosrenalesaparecieronanivel bioquímico
(82% de los parámetrosalteradosthetotal).Losnivelesde NayCl o urea enla orinaaumentaron
con aconcomitantdisminuciónde losmismosionesenel suero,al igual que losnivelesde P,K,y
Ca.Creatinine yaclaramientode creatininadisminuyóenorinaparatodoslosgruposde
tratamientoincomparisonacontrolesde lasmujeres(Tabla3). En loshombrestratadoscon
GMmaize (con o sinR),el 87% de las variablesdiscriminanteswerekidney-relacionado,perolos
perfilesalteradoseranmenosevidentesdebidoalasnefropatíasadvancedchronicymuertes.En
resumen,paratodoslostratamientosyde ambossexos,el 76% de las variablesdiscriminantes
frente alos controlesfueronde riñónrelacionada.
https://static-content.springer.com/image/art%3A10.1186%2Fs12302-014-0014-
5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig3_HTML.jpg
figura3
Ortogonal análisisde mínimoscuadradosparciales-discriminantes(OPLS-DA) de datos
forbiochemical (hembrasalimentadascon33% frente a loscontrolesOGM).(A) En primerlugar,
ejemplosdetallados de lasvariablessignificativasbetweenfemalesdistribucióndiscriminantes
alimentadoscon33% de OGM (líneagruesa) ycontroles(líneade puntos).Enel eje X,los
animales;enel eje Y,sueroovaloresbioquímicosde orinaparaNa, Cl,estradiol,testosterona.(B)
Una visiónmásampliade regressioncoefficientsOPLS-DA parael componentepredictivo,con
intervalosde confianzajack-acuchilladoat99nivel de confianza%,loque indicaparámetros
discriminantesfrentealoscontrolesatmonth15. T, urinario; UEx,se excretaenlaorina durante
24 h; APPT,tiempode tromboplastinaactivatedpartial;MCV,volumencorpuscularmedio;PT,
prothrombinetime;RBC,lascélulasrojasde lasangre;ALT, alaninaaminotransferasa;MCHC,la
concentraciónde hemoglobinameancorpuscular;A / G, albúminarelación/globulina;CMB,
célulaswhiteblood;AST,aspartatoaminotransferasa.Perfilesionleakagesrenalesenlaevidenciay
el sexodesequilibriohormonal frente aloscontroles.
Tabla 3
En porcentajesde variaciónde parámetrosque indicanfallosrenalesde femaleanimals
lasvariablesdiscriminantes
GMO 11%
GMO 22%
GMO 33%
GMO 11% + R
GMO 22% + R

17. GMO 33% + R
R (A)
R (B)
R (C)
hormonasgonadales
estradiol
5
-2
-25
8
-1
2
-26
- 73a
39
La testosterona
56a
17
81
5
-9
27
97a
- 72a
10

18. disminuciónoaumentoSerum
N / A
-1
- 4a
- 6a
2
1
1
-7
0
-3
cl
-5
-7
- 6a
-1
-2
-2
- 8a
-1
-4
PAG
-17
- 18a

19. - 20a
-6
-11
-13
- 32a
-9
-13
K
2
-4
0
4
5
10
-4
8
- 5a
California
2a
-2
- 5a
4
3
3

20. -6
3
- 6a
aumentode orina
Urea
15
12
-1
12
18a
15
0
13
32a
N / A
52
-2
95a
25
33
30
62a
sesentaycinco
91a

21. Na ex
50
24
125a
24
50
68
108a
51
7
cl
46
5
101a
14
35
28
67a
56
94a
Cl ex
51
31
138a

22. 20
63
70
121a
48
13
disminuciónurinaria
Despeje
- 20a
- 20a
-19
-4
-11
-20
- 20a
- 24a
- 40a
creatinina
-19
-37
- 36a
-5
- 32a
- 37a
-43

23. -23
-1
creatininaex
-18
- 17a
-21
-5
-11
- 19a
- 21a
- 22a
- 39a
OPLS-DA se llevóacabo en48 variablesenel mes15. Aquí, mostramosmeandifferences(%) de
variables(adiscriminanten99%confidencelevel) que indicalosparámetrosrenalesde animales
hembras,juntoconhormonassexuales.patologíasrenalesmachoyase ilustraninFigure 1.
Además,enlashembras(Tabla3),el andrógeno/ estrogenbalance enel suerofue modificadopor
el maíz GM y tratamientosR(al menos95% confidencelevel,laFigura3).Para losmachos a la
dosismásalta Rtreatment,losnivelesde estrógenoseranmásdel doble.
la incidenciade tumores
Los tumoresse presentanenconsonanciaconlosrequisitosde laOCDEprotocols452 toxicidad
crónica y 453, lascualesrequierenque todoslos'lesiones'(que pordefiniciónincludetumors) que
se informa.Estosresultadosse resumenenlaFigura4. Los resultadosse presentanenlaformade
curvas acumulativasentiemporeal (cadapasocorresponde auntumor adicional enel grupo).
Sólolascrecientescrecimientoslargestpalpable (porencimade undiámetrode 17,5 mmen
hembrasy 20 mm enlosmachos) arepresented(porejemplo,véase laFigura5A,B, C).Estos
werefoundestarenel 95%de los casos de tumoresnoregresivas(Figura5D,E, F, G, H, I, J) y no
erannódulosinfecciosas.Estossurgieronde totime tiempo;entonces,lomása menudo

24. desaparecidoynoerandiferentesde loscontrolesafterbacterial análisis.Lostumoresrealesse
registraronindependientemente de sugrado,butdependentensumorbilidad,yaque lostumores
no cancerosospuedenserthanthose másletal de lanaturalezacancerosa,debidoalahemorragia
o compresiónandobstructioninternade lafunciónde losórganosvitales,otoxinasosecreciones
hormonales.Thesetumorsaumentaronprogresivamente entamañoynúmero,perono
proporcionalmente al thetreatmentdosis,enel transcursodel experimento(Figura4).Comoenel
caso de las tasas de mortalidad(Figura6),estosugiere que unumbral,enefecto,se alcanzóalos
lowerdoses.númerode tumoresraravezeraniguales,perocasi siempre másque enloscontroles
forall grupostratados,a menudoconun aumentode dosa tresvecespara ambossexos.
Tumorsbeganparallegara un tamañogrande,enpromedio,94 días antesde los controlesenlas
hembrastratadasandup a 600 días antesendos gruposde hombresalimentadosconmaíz GM (11
y 22% con orwithoutR).
https://static-content.springer.com/image/art%3A10.1186%2Fs12302-014-0014-
5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig4_HTML.jpg
Figura4
Más grandestumoresnoregresivasenratasalimentadascontransgénicostratadosonopor
andeffectsRoundupde Roundupporsísolos.Las ratas fueronalimentadasconmaíz NK603 GM
(conorwithoutaplicaciónde Roundup) entresdosisdiferentes(11%,22% y 33% intheirdieta;fina,
mediaylíneasen negrita,respectivamente) encomparaciónconthesubstantiallyequivalentemás
cercano isogénicanoMG maíz (control,líneapunteada) .Roundupse administróenel agua
potable alas tresdosiscrecientes,samesymbols,del medioambiente (a),LMRenalgunosOGM
agrícolas (B),y lamitadde losnivelesmínimosagrícolas(C),ver"Métodos") .Lasgrandestumores
eranpalpablesdurante el experimentoynumeradade 20 de diámetroMmín para loshombresy
17,5 mm para las hembras.Porencimade este tamaño,el 95% de los tumoresnoregresivas
growthswere.Resumende todoslostumoresse presentanenlostumoresde grantamaño
barhistograms:negro,noregresivas; ,pequeñostumoresblancosinternos;gris,lasmetástasis.
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5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig5_HTML.jpg
Figura5
Ejemplosde tumoresmamariosfemeninosobservaron.Lostumores mamariossonevidenciadas
(A,D, H, adenocarcinomarepresentativa,de lasameratenungrupo OMG) y engrupos de
Roundupy OMG + Roundup,dosrepresentativerats(B,C,E, F,I, J fibroadenomas) se comparan
con controles.Unarata representantede lonormal enloscontrolesnose muestra,sólouna
minoríade ellosque tienentumoresde hasta700 días, en contraste con themajorityafectadaen
todoslosgrupos tratados.(G) La histologicalcontrol.

25. https://static-content.springer.com/image/art%3A10.1186%2Fs12302-014-0014-
5/MediaObjects/12302_2014_Article_14_Fig6_HTML.jpg
Figura6
La mortalidadde lasratasalimentadascontransgénicostratadosono con Roundupylosefectos
de Roundupalone.Lossímbolosde lascurvasy lostratamientosse explicanenlaFigura 4.
captionof Vidaútil durante el experimentoparael grupocontrol se representaporla barra vertical
± SEM(área gris).Enbarhistograms,lascausasde mortalidadantesde lazonagris son
incomparisondetalladade loscontroles(0).Ennegrosonla eutanasianecesariabecauseof
sufrimientoenconformidadconlasnormaséticas(pesotumoresmásdel 25% del cuerpo,pérdida
de pesomás de un 25%, sangrado hemorrágica,etc.);yenlaszonas de mortalidadespontánea,
tramado.
En las hembras,lostumoresmás grandeseranun total de cinco vecesmásfrecuente que inmales
despuésde 2 años,con un 93% de estostumoresmamariosson.Adenomas,porfibroadenomasy
carcinomaseran perjudicialesparalasaluddebidoasu gran tamaño (Figura5 A, B, C) enlugar de
la calificaciónde latumoritself.tamañogrande del tumorcausadoimpedimentosparala
inhalaciónode andnutritionladigestióndebidoasuubicacióntorácicao abdominal ytambiéndio
inhemorrhaging(Figura5A, B, C).Además,se identificaronunacystadenocarcinoma
metastaticovarianydostumoresde lapiel.Metástasiswereobservedsóloendoscasos;unoen un
grupoalimentadoconmaíz transgénico11% y otroen thehighestdosisde grupode tratamientoR.
Hasta 14 meses,nohay animalesenlosgruposde control mostraronsignosde palpabletumors,
mientrasque 10% a 30% de las mujerestratadasportumoresdel grupodesarrollado,con
theExceptionde ungrupo(33%GMO + R).A principiosdel mes24a,50% a 80% de las hembrasse
había desarrolladotumoresentodoslosgruposde tratamiento,conhastathreetumorspor
animal,mientrasque sóloel 30%de los controlesfueronafectados.Unresumende allmammary
tumoresal final del experimento,independientede sutamaño,se presentalaTabla2. Se observó
la mismatendenciaenel groupsreceivingRensu agua potable (Figura4,treatmentpanelsR).Los
gruposde tratamientoRmostraronlas mayorestasasde incidenciade tumores,with80% de los
animalesafectados(conunmáximode trestumoresparauna mujer),encadagroup.Usingun
análisisde comparaciónmúltiple noparamétrica,laincidenciade tumoresde mamafue
significativamenteaumentóladosismásbajade R comparacióncon loscontroles(p<0,05, prueba
de Kruskal-Wallisconel testposthoc de Dunn).Todaslas hembrasexceptouno(concarcinomade
ovariometastásico) presentadosademáshipertrofiasmamariasandinalgunoscasoslahiperplasia
con atipia(Tabla2).
El segundoórganomásafectadoenlas mujereseralaglándulapituitaria,entiemposaroundtwo
generalesmásque enloscontrolesparalamayoría de lostratamientos(Tabla2;Figura 1J, K,L,

26. M). Una vez más,eneste ofexaminationnivel,se observaronadenomasy/o hiperplasiasyse
hipertrofia.ParatodoslosgruposRtreatment,70% a 80% de los animalespresentó1,4a 2,4 veces
más abnormalitiesineste órganoque loscontroles
Mortalidad
Las tasas de mortalidadenlosdiferentesgruposde tratamientoyde control se muestrancomo
RAWDATA enla Figura6. Los animalesmachosde control sobrevivióenaverage624± 21 días,
mientrasque lashembrasvivierondurante 701 ± 20 días enThe Experiment,además,encada
caso, a 5 semanasde partidala edadenla recepciónde losanimalesya3 semanasperíodode
estabilizaciónde lavivienda.Unaveztranscurridoel tiempomediode supervivencia,cualquier
deathsthatocurrióse consideraque esdebidaengranparte al envejecimiento.Antesde este
período,30 machosde control%(tresentotal) y20% mujeres(sólodos) murieronde forma
espontánea,whileupa50% hombresy70% mujeresmurieronenalgunosgruposcondietasque
contienenel maíztransgénico(Figura6,panelesde OMG,OMG + R). Sinembargo,latasa de
ofmortalitynoeraproporcional ala dosisde tratamiento,alcanzandounumbral enel thelowest
(11%) o cantidadesintermedias(22%) de maíztransgénicoenladietaequilibrada,withorsinla
aplicaciónRsobre el cultivo.Esde destacarque losdos primerosmaleratsque murieronenlosdos
grupostratados con maíz transgénicotuvieronque sersacrificadosdebidoatumores
Wilms'kidneyque habíancrecidoenese momentoamásdel 25% del pesocorporal.Este
wasapproximatelyunañoantesde lamuerte del primeranimal de control.Laprimeramujer
deathoccurredenel grupode alimentaciónde maíz22% GM y el resultadode unamamaria
fibroadenoma246díasantesde lamuerte femeninaprimercontrol.Ladiferenciamáximaen
varoneswasfive vecesmásmuertesque se producenporel mes17 en el grupoque consumióel
11% y enlasmujeresGMmaize seisvecesmayormortalidadenel mes21 enla dietaGMmaize
22% con y sinR. En lascohortesfemeninas,habíadosa tresmuertestimesmoreentodoslos
grupostratados encomparacióncon loscontrolesparael final de lasmuertesse produjerona
principiosde experimentandengeneral.Lashembraseranmássensiblesalapresenceof Renel
agua potable que enloshombres,comolodemuestraunavidaútil máscorta (Figura6, panelesR).
Las causas generalesde deathrepresentedenformatode histogramadentrode cadaunode los
panelesde lafigura6, estánvinculadasprincipalmente alostumoresde mamaenlas mujeresy
para problemsinotrossistemasde órganosenloshombres.
Discusión
Este informe describe laprimeraalargoplazo(2 años) de roedores(rata) studyinvestigating
alimentaciónde losposiblesefectostóxicosderivadosdel consumode unmaíztolerante aR-GM
(NK603) y unaformulacióncomercial completade Rherbicida.Los objetivosde thisinvestigation
eranesencialmente de dostipos.Enprimerlugar,paraevaluarsi el oftoxicitysignos,
especialmenteconrespectoalasfuncioneshepáticasyrenales,vistodespuésde 90

27. days'consumptionde unadietaque contienemaízNK603 R tolerantesaGM[3, 7] se extendióen
seriode saludenfermaodisipadadurante unperíodoprolongadode tiempo.Ensegundolugar,
para determinarsi lasdosisbajasde formulaciónRcomercial completaenpermittedlevelstodavía
erantóxicos,comose indicapornuestrosestudiosanterioresinvitro[8,9].El estudiode toxicidad
previaconmaíz NK603 utilizarsóloeste cultivoGMthathad sidorociadacon R durante el cultivo
[3].Sin embargo,ennuestroestudioque aquíse presenta,ademásde laampliaciónde la
treatmentperiodde 90 días a 2 añosy con el finde determinarmejorlafuente de cualquiermala
saludobservado,se incluyerongruposde pruebade alimentaciónadicionales.Estosconsistíanen
NK603maize cultivansin,asícomo con la aplicación de Ry R soloadministraratravésde agua de
consumo.Además,hemosutilizadotresnivelesde dosificaciónentodosloscasosenlugarde la
usada twopreviously[3],afinde destacar losefectosde respuestaadosisde untratamientodado.
Se isalsoimportante señalarque nuestroestudioesel primeroparallevaracabo la sangre,la
orinay organanalysesde animalestratadosconla formulaciónagrícolacompletade Ry G notjust
sola,determinadaporel fabricante [35].
Nuestrosdatosmuestranque lossignosde toxicidadhepáticayrenal vistosen90 días a partirde
theconsumptionNK603GM de maíz [3, 7] de hechoderivarenuna enfermedadgrave durante un
períodoprolongado.Además,se observaronefectosnegativosparalasaludsimilaresentodoslos
gruposde tratamiento(NK603maizewithGMo sinaplicaciónRy R solo).
Lo que tambiénesevidenteapartirde nuestrosdatoses que losefectosnegativosnofueron
proporcionalesaladosisa la bienel maízNK603 GM ± R o R solo.Esto sugiere que el
observeddisease puede resultarde efectosperturbadoresendocrinos,que se sabe que benon
monotónica.ungradosimilarde lossíntomaspatológicosse produjerondesdeel másbajoal
thehighestdosis,loque sugiereunefectoumbral [36].Estocorresponde alos nivelesprevistosen
relaciónconel consumoo environmentalexposure,talescomomaízcon 11% de GM en los
alimentos,o50 ng / LG equivalentede R-formulación,unnivel que se puedeencontrarenalgunas
aguas del grifopara bebercontaminada,yque fallswithinlímitesautorizados.
La muerte enratasmacho se debióprincipalmenteal desarrollode hepatorenalinsufficiencies
graves,loque confirmalosprimerossignosde toxicidadobservadosenfeedingtrialsde 90 días
con maíz NK603 GM [7]. En lasmujeres, lafugade ionesde riñónfue evidente anivel bioquímico
enmonth15, cuandose observaronnefropatíasgravesenanimalesmachosmuertosenla
autopsia,a nivel theanatomopathological.Losprimerossignosde toxicidadenel mes3enriñóne
hígado werealsoobservarondurante 19cultivostransgénicoscomestiblesque contienenresiduos
de plaguicidas[1].Se sabe que sóloratas macho de edadavanzadason sensiblesa
progressivenephropathiescrónicas[37].Porlo tanto,losparámetrosfuncionalesrenales
perturbadopuedenhabersidoinducedbylosnivelesreducidosde ácidosfenólicosenla

28. alimentaciónde maíztransgénicoutilizadoennuestroestudio,losácidosferúlicoysincecaffeic
son beneficiososparael riñónyaque evitanel estrésoxidativo[38,39]. Esta posibilidades
consistente connuestraobservaciónanteriorde que extractosde plantasque contienenácidos
ferúlicoycafeicofueroncapacesde promoverladesintoxicaciónofhumancélulasde riñón
embrionariodespuésdelcultivoenpresenciade R[40]. Por tanto,es posible que el consumode
maíz NK603 GM, con sureducidalevelsof estoscompuestos,puedehaberprovocadolatemprana
envejecimientode lafisiologíarenal,de manerasimilarala exposiciónRcausandoestrésoxidativo
[41]. Las alteracionesenlospatronesglobalesde expresióngénicaconduce ala enfermedad
efectosviaepigeneticnopuedenserexcluidas,yaque se ha demostradoque numerouspesticides
puedencausarcambiosenla metilacióndel ADN ylamodificaciónde lashistonas,therebyaltering
compactaciónde la cromatinay por lotanto losperfilesde expresiónde genes[42].
Las alteracionesque hemosobservadoque se producenenel hígadomasculinosson
característicosde chronictoxicity,confirmadoporalteracionesenlafunciónhepáticayrenal
observaciónparameters.The bioquímicoque lafunciónhepáticaenanimaleshembrasse vio
afectadanegativamentetal vezmenosdebidoalaproteccióncontra el estrésoxidativoconocido
conferidaporel estrógeno[43].El estrógenopuede inducirlaexpresiónde genestalescomo
superóxidodismutasaperoxidasaandglutathione atravésde lavía de NF-kBquinasade
señalizaciónMAP,proporcionandoasíel efectoanantioxidant[43].Además,lasenzimashepáticas
se han demostradoclaramente que el sexo-específicasintheirpatronesde expresión,incluidaen
un ensayode alimentaciónde ratasde 90 días de maíz NK603 GM [7].Sinembargo,enun estudio
a largo plazo,nose observóevidenciade envejecimientohepáticatempranainfemale ratones
alimentadosconsojatransgénicatoleranteaR [12]. En la presente investigación,unanálisismás
profundoenunaevidenciaultraestructural levelrevealedde impedimentosenlatranscripcióny
otros defectosennuclearstructure célulasque fueroncomparablesenambossexosyenlos
hepatocitosenalltreatmentsdependiente de ladosis.Estoesconsistente conel efectotóxicobien
documentadade muylowdilutionsde Renla apoptosis,lafunciónmitocondrial,yladegradación
de la membranacelular,lainducciónde necrosisde loshepatocitos,yenotraslíneascelulares[8,
9, 44, 45].
Las interrupcionesde al menosloscaminosrelacionadosconel estrógenoy/o mejorael estrés
ofoxidative portodoslostratamientosnecesitanunaconfirmaciónposterior.Estopuede ser
addressedthroughlaaplicaciónde transcriptómica,proteómica,ymétodosmetabolómicosa
analyzethe perfil molecularde losriñonesyel hígado,así como el maíz transgénicoNK603 [46, 47,
48]. Otras posiblescausasde efectospatógenosobservadospuedendeberseadisturbedgene
expresiónresultante de lainsercióndeltransgén,mutágenos,efectosormetabolicgenerales[49,
50] comose ha demostradoparael maíz MON810 GM [51, 52]. A la consiguienteinterrupcióndel
metabolismogeneral de losOMGno se puede excluir,loque podríadarlugar,por ejemplo,parala

29. producciónde otroscompoundssuchpotencialmente activoscomomiRNAs[53] o diolesde
leucotoxina[54].
La vidaútil del grupode control de animalescorrespondeala mediade lacepa Ofratutilizado
(HarlanSprague-Dawley),perocomoesfrecuentemente el casoconla mayoría de losmamíferos,
incluyendolossereshumanos[55],loshombres,enpromedio,murieronantesque lashembras,a
excepciónde algunostreatmentgroupsfemeninos.Todoslostratamientosenambossexos
mejoranlaincidenciade tumoresgrandespordosa threefoldincomparaciónconnuestros
controlesytambiénel númerode tumoresde mamaencomparacióncon theHarlanSprague-
Dawleycepa[56] y engeneral alrededorde tresvecesen comparaciónconel estudiomásgrande
con 1,329Sprague- ratas hembraDawley[57].Esto indicaque el usode datos históricospara
comparar nuestrosnumbersistumornoesrelevante,primero,yaque se estudióladiferenciacon
controlschronologicallyconcurrente(ynosóloal final del experimento,comoesel casoen
historicaldata),ysegundo,yaque lalas dietasde animalesde referenciahistóricospuedenhaber
beencontaminatedconvarioscompuestosnosupervisadoincluidoslosOGMypesticidasatlevels
utilizadasennuestrostratamientos.Ennuestroestudio,lostumorestambiéndesarrollaron
considerablyfasterque enloscontroles,apesarde que la mayoríade lostumoresse observaron
despuésde 18 meses.Losprimerosgrandestumoresdetectablesocurrieronalas4 y 7 mesesen
losinmalesymujeresdel estudio,respectivamente,loque subrayaaúnmásla insuficienciade las
pruebasde alimentaciónstandard90díaspara evaluarel GM de loscultivosyalimentostoxicidad
[1].Se requierenestudiosfuturosque empleangrandescohortesde animalesque suministran
energíaappropriatestatistical paraconfirmarorefutarlaclara tendenciaenel aumentode las
tasas de mortalidadytumorincidencevistoconalgunosde lostratamientosensayadoseneste
estudio.Asalreadydeclaró,nuestroestudionofue diseñadocomounestudiode carcinogenicidad
que haverequiredsegúnlaOCDEel usode 50 ratas por sexoporgrupo.Sin embargo,deseamos
toemphasize que lanecesidadde másrataspara proporcionarsuficientepoderestadísticopuede
bebiasedporlapresenciade contaminantesenlasdietasutilizadasenlarecolecciónde
ControlDatahistórico,unaumentoartificialde losantecedentesde tumores,loque
inapropiadamente becalledeneste caso"espontánea"odebidoalatensióngenética.
Forinstance,,interrumpiendohormonaltóxicosonivelescancerígenosde losplaguicidas,PCBs,
plastificantes,dioxinasometalespesados puedencontaminarlasdietasoel agua potable usedfor
el establecimientode tumores"espontáneas" enlosdatoshistóricos[58,59, 60, 61, 62] .
En las mujeres,inducidaporlaeutanasiadebidoal sufrimientoylasmuertescorrespondieron
principalmente athedevelopmentde grandestumoresmamarios.Estose observó
independientementedel cáncergradebutde acuerdoconimpactoenla morbilidad.Estosparecían
estarrelacionadasconlasvarioustreatmentsencomparaciónconlosgruposcontrol.Estos
tumoresse conocenengeneral a bemostlydependientede estrógenos[63].Se ha observadouna
inducciónsorprendentemente marcadade tumoresmamariosenIgroupsadministeredsolo,

30. inclusoala dosismuybaja (50 ng / L G diluciónequivalente inadjuvants).A estaconcentraciónin
vitro,G solose sabe que inducenel crecimientode célulasde cáncerhumanbreastatravésde los
receptoresde estrógenos[64].Además,Rcon adyuvantesse hademostradoque alteranla
aromatasa,whichsynthesizesestrógeno[19],ypara interferirconlosreceptoresde estrógenosy
andrógenosenlascélulas[8].Además,Rparece serun disruptorendocrinosexual eninmalesin
vivo[10]. losnivelesde esteroidessexualestambiénse modificaronenlasratastratadas en
nuestroestudio.Thesehormone fenómenosdependientessonconfirmadospordisfunciónde la
hipófisismejoradoentreatedfemales.Unmecanismode retroalimentaciónde estrógeno
modificadopuedeactuara este nivel [65,66]. Los perfilespatológicossimilaresprovocadasporla
dietade maíz + R GM puedenthusbe se explicaal menosenparte porrestosR presenteseneste
alimento. Eneste sentido,se isnoteworthyque ladosismediadel tratamientoRprobado(400 mg
/ Kg G equivalente) correspondealosnivelesde residuosaceptablesde este plaguicidaenalgunos
OMG comestibles.
Es interesante ytal vezsorprendentemente,enlosgruposde animalesalimentadosconel maíz
NK603 GMmaize sinaplicaciónR,no se observaronefectossimilaresconrespectoala incidenciay
lastasas de mortalidadtumoral mejoradas.Porejemplo,comparandoel 11% GMO tratado-
femalegroupaloscontroles,el supuestode que lostumoresse distribuyenigualmente isrejected
con un nivel de significanciade 0,54% con lapruebade excedenciaWestlake [67].Laspruebas
clásicasde Kolmogorov-Smirnov(unilateral) andWilcoxon-Mann-Whitneyalcanzanvaloresalfade
significación,que sonrespectivamenteof1.40% y2,62%.
Una posible explicaciónparaeste hallazgoeslaproduccióndel compuestoespecífico(s) entheGM
alimentaciónque esténdirectamente tóxicosy/o causar lainhibiciónde lasvías,que inturn
generaefectostóxicos.Estoapesardel hechode que la variedadde maíz transgénicousedineste
estudiofue juzgadoporlaindustriaylosreguladorescomosustancialmenteequivalente enel
correspondiente nomodificadagenéticamentemáscercanalíneaisogénica [3,30]. A medidaque
la composiciónquímicatotal del maíztransgéniconose ha medidoindetail,el usode la
equivalenciasustancial comoconceptoenisinsufficientevaluaciónde riesgospotencialespara
resaltarlastoxinasdesconocidasyporlotanto losensayosde alimentaciónanimal nopuede
replacelongplazode losOMG.
A causa de losefectosnegativosresultantesde maízNK603 GM solosobservadoeneste
studycouldserel hechode que estádiseñadoparasobreexpresarunaversiónmodificadade
theAgrobacteriumtumefaciens5-enolpiruvilsiquimato-3-fosfatosintasa(EPSPSCP4) [3],que
confiere Rtolerancia.LaEPSPSmodificadanoesinhibidaporG,En contraste a la enzimade tipo
salvaje enel cultivo.Estaenzimaesconocidaparaconducirel FirstStep de biosíntesisde
aminoácidosaromáticosenlavía de plantashikimato.Además,lasisoflavonasestrogénicasysus

31. glicósidossontambiénproductosde estavía[68]. Un análisisde lacomposiciónlimitadamostró
que estasvías bioquímicaswerenotperturbadosenel maíztransgénicoutilizadoennuestro
estudio.Sinembargo,nuestroanálisisrevelóthatthe nivelesde ácidoscafeicoyferúlicoenladieta
GM, que tambiénsonsecondarymetabolitesde lavíade shikimatoplanta,peronosiempre se
mide enlaspruebasreglamentarias,se reduce significativamente.Estopuededisminuirsus
efectosprotectoresagainstcarcinogenesisylaformaciónde tumoresde mamíferos[69, 70].
Además,estosácidosfenólicos,yenparticularel ácidoferúlico,puedenmodulateestrogen
receptoresola vía estrogénicaencélulasde mamífero[71].Estono excluye laposibilidadde la
acción de otrosunknownmetabolites.Estaexplicacióntambiénse correspondeconel hechode
que losefectosobservadosofNK603maíz GM y R no son aditivos, peroalcanzaunumbral.Esto
implicaque boththe maízNK603 y R puedencausaralteracioneshormonalesenlasmismasvías
bioquímicasandphysiological.
conclusiones
En conclusión,el consumode maíztransgénicoNK603 con o sinaplicaciónRo Ralone dio
patologíassimilaresenratasmachosy hembrasalimentadasduranteunperíodode 2 años. Es
sabidoque el consumowaspreviouslyGenagua por encimade loslímitesautorizadospuede
provocar insuficienciarenal hepaticand[33].Losresultadosdel estudiopresentadosaquíindican
claramente que ladisminuciónde levelsof completosformulacionesGherbicidasagrícolas,en
concentracionesbienestablecidosbelowofficiallylímitesde seguridad,puedeinducirsevera
mamariadependiente de hormonas,hepática,trastornosandkidney.Del mismomodo,la
interrupciónde lasrutasbiosintéticasque puedenresultarfromoverexpressiondel transgenEPSPS
enel maíz transgénicoNK603puede dar lugara comparablepathologiesque puedenestar
vinculadosalosmetabolitosdel ácidofenólicoanormalesodesequilibradascompuestos
orrelated.Otrosefectosmutagénicosymetabólicasde losOMG comestiblenopueden
beexcluded.Este seráel objetode futurosestudios,incluidoslosanálisisde lostransgenes,Gand
otra presenciaradical Ren tejidosde rata.studieswill reproductivaymultigeneracional también
proporcionanunaideade la novelaestosproblemas.Este estudiorepresentaladocumentación
firstdetailedde losefectosnocivosalargoplazoderivadosdel consumode aGMO,enconcretoun
maíz tolerante aR y de R, el herbicideworldwidemásampliamenteutilizado.
Tomadosenconjunto,lostrastornosbioquímicosyfisiológicossignificativosfailuresdocumented
eneste trabajoponende manifiestolosefectospatológicosde estostratamientosOGMyR inboth
sexos,condiferentesamplitudes.Tambiénmuestranque laconclusiónde theMonsantoautores
[3] que lasindicacionesinicialesde toxicidadenlosórganosque se encuentranensu90-
dayexperimentnoeran"biológicamentesignificativo'noesjustificable.

32. Proponemosque lostransgénicosagrícolascomestiblesyformulacionesde plaguicidascompletas
debenbeevaluatedafondoenestudiosalargoplazopara medirsusefectostóxicospotenciales.
métodos
Ética
El protocoloexperimental se llevóacaboen unaunidadde cuidadode los animalesautorizadapor
theFrenchMinisteriosde Agriculturae Investigación(Númerode ContratoA35-288-1).
Animalexperimentsse realizaronde acuerdoconlasdirectriceséticasde laexperimentacióncon
animales(CEE86/609 regulación),incluyendolasobservacionesnecesariasde todoslostumores,
enlinewithlosrequisitosparaunestudiotoxicológicoalargo plazo[32],hasta un tamañodonde la
eutanasiaporrazoneséticasfue necesario.
En cuanto el cultivodel maízutilizadoeneste estudio,nohaypermisosespecíficoswererequired.
Esto esdebidoaque el maíz se cultiva(MON-00603-6 comúnmente llamadoNK603) EnCanadá,
que recibala autorizaciónparala liberaciónnoconfinadaenel medioambiente y ForUse como
alimentoparael ganadopor la Agenciade InspecciónAlimentariade Canadá(Decisión
Document2002-35). Confirmamosque el cultivonoimplicabapeligrooprotectedspecies.El maíz
transgénicofue autorizadaparala importaciónyel consumoenel UniónEuropea(CE258/97
regulación).
Plantas,dietas,yproductosquímicos
Las variedadesde maízutilizadoseneste estudiofueronel DKC2678 R-tolerante NK603
(MonsantoCorp.,EE.UU.), y su control no transgénicomáscercanoisogénicaDKC2675.These dos
tiposde maíz se hicieroncrecerencondicionesnormalessimilares,enel samelocation,
espaciadasa unadistanciasuficiente paraevitarlacontaminacióncruzada.El geneticnature,así
como lapurezade lassemillastransgénicasymaterial cosechado, fue elanálisisqPCRconfirmedby
de muestrasde ADN.Un campode NK603 se trató con R en3 Lha-1 (WeatherMAX,540 g / L de G,
EPA Reg.524-537), y anotherfieldde NK603no se trató conmazorcas de maíz R. fueron
cosechadascuandoel moisturecontenteramenosde 30% y se secarona unatemperaturainferior
a 30 ° C. De thesethree cultivosde maíz,comidapararatas de laboratoriose hizoconbase en el
estándardietA04(Segura,Francia).se hizoLa alimentaciónsecade rata para contener11%, 22%,
o 33% de GMmaize,cultivócono sinR, o 33% de la ControlLine notransgénico.Las
concentracionesde lostransgenesse confirmaronenlastresdosisde eachdietporqPCR.Todas

33. lasformulacionesde alimentosconsistíanendietasbalanceadas,measuredasquímicamente
sustancialmente equivalente aexcepcióndel transgén,sincontaminatingpesticidesmásde los
límitesestándar.Todoslosmetabolitossecundariosnopuedenserconocidasandmeasuredenla
composición.Sinembargo,medimoslasisoflavonasyfenólicaacidsincludingácidoferúlicopor
HPLC-UV estándar.Todoslosreactivosutilizadosfueronde analyticalgrade.El herbicidadiluidoen
el agua de bebidafue laformulacióncomercial de R(GT Plus,450 g / L de G, aprobación
2.020.448, Monsanto, Bélgica).losnivelesde herbicidaswereassessedpormedicionesGenlas
diferentesdilucionesmedianteespectrometríade masas.
Animalesytratamientos
albinosVirgenratasSprague-Dawleyde 5semanasde edadse obtuvieronde Harlan(Gannat,
Francia).Todoslosanimalesse mantuvieronenjaulasde policarbonato(820 cm2, Genestil,
Francia) con dosanimalesdel mismosexoporjaula.Lacamada (Toplitclassic,Cajafuerte,Francia)
fue sustituidodosvecesporsemana.Losanimalesse mantuvierona22 ± 3 ° C, con unahumedad
controlada(45% a 65%) y la purezadel aire con un ciclode 12 h de luz/ oscuridad,conacceso
libre a comiday agua.La ubicaciónde cada cagewithinlahabitaciónexperimentalse cambiócon
regularidad.Este 2 añosexperimentwasde porvidarealizadosenunBuenasPrácticasde
Laboratorio(BPL) laboratorioacreditadosegúnlasdirectricestoOECD.Despuésde 20días de
aclimatación,100 macho y hembra100 animalswere asignadosaleatoriamenteenunabase de
pesoendiezgruposequivalentes.Paracadasexo,un grupo de control tenía accesoa agua
corriente ydietaestándardel control de maíz no transgénicoclosestisogenic;seisgruposfueron
alimentadoscon11%,22% y 33% del maíz NK603 ofGM ya seatratadas o no tratadascon R. Los
tresúltimosgruposfueronfedwithladietade control yteníanacceso a agua suplementadacon
respectivamente 1,1x 10-8% de R (0,1 ppbo 50 ng / L de g, el contaminante levelof algunasaguas
del grifo),0,09% de R (400 mg / kg g, US LMR de 400 ppm g enalgunosGMfeed),y0,5% de R (2,25
g / LG, lamitadde ladiluciónde trabajoagrícola mínimo) .Este fue cambiadosemanalmente.
monitoreodosvecesporsemanapermitióandpalpationcuidadosaobservaciónde losanimales,el
registrode lossignosclínicos,lamediciónde lostumores,el consumode aguafoodand,ylos
pesoscorporalesindividuales.
AnatomíaPatológica
Se sacrificaronlosanimalesdurante el cursodel estudiosólosi esnecesarioporque ofsufferingde
acuerdocon las normaséticas(tal como 25% de pérdidade pesocorporal,tumoresmásdel 25%
de pesocorporal,sangradohemorrágico,opostración) yal final de labyexsanguinationestudio
bajoisofluranoanestesia.Encadacaso, observacionesdetalladasandanatomopathologyse realizó
y se recogieronlossiguientesórganos: cerebro,colon,corazón,riñones,hígado,pulmones,
ovarios,bazo,testículos,glándulassuprarrenales,epidídimo,próstata,timo,útero,aorta,vejiga,
hueso,duodeno,esófago,ojos,íleon,yeyuno,losganglioslinfáticos,sistemalinforreticular,

34. glándulasmamarias,el páncreas,parathyroidglands,placasde Peyer,lapituitaria,glándulas
salivales,nerviociático,piel,médulaespinal,estómago,tiroides,ylatráquea.Losprimeros14
órganos(por lomenosdiezporanimaldependingenel sexo,laTabla1) fueronponderados,más
anytumorsque surgieron.Laprimerade nueve fuerondivididosendospartesyun medio
wasimmediatelycongeladosennitrógenolíquidohielo/carbónico.Laspartesrestantes
includingotherórganosfueronlavadasenPBSyse almacenaronenformalinaal 4% antesde
anatomopathologicalstudy.Estasmuestrasse utilizaronparasuposteriorinclusiónenparafina,
toboganes,ylatinciónHEShistological.Paralamicroscopíaelectrónicade transmisión,losriñones,
hígados,andtumorsse cortaron en1 mm3 fragmentos.Lasmuestrasse fijaronenpre-refrigerados
2% de paraformaldehído/2,5%de glutaraldehídoenPBS0,1 MpH 7,4 a 4 ° C durante 3 h
andprocessedcomose describe anteriormente [13].
Los análisisbioquímicos
Las muestrasde sangre se recogieronde lavenade la colade cada rata bajo corto
isofluraneanesthesiaantesdel tratamientoydespuésde 1,2, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, y 24 meses:11
medicionesse obtuvieronparacada animal vivoal 2 años.Se firstdemonstratedque laanestesia
no tuvoimpactoenla saludanimal.Dosalícuotasde plasmaandserumfueronpreparadosy
almacenadosa-80 ° C. A continuación,se evaluaron31parámetros(Tabla1) de acuerdocon
includinghematologymétodosestándarylosparámetrosde coagulación,albúmina,globulina,
proteinconcentrationtotal de,creatinina,urea,calcio,sodio,potasio,cloruro,
inorganicphosphorus,triglicéridos,glucosa,colesterol total,alaninaaminotransferasa,aspartato
aminotransferasa,gammaglutamil-transferasa(GT),estradiol,andtestosterone.Además,enel
mes12 y 24, la proteínaC reactivaera muestrasassayed.Urine se recogieronde manerasimilar11
veces,másde 24 h enmetaboliccagesindividuales,yse cuantificaron16parámetrosincluyendo
creatinina,fósforo,potasio,cloruro,sodio,calcio,pH,yel aclaramiento.Lasmuestrasde hígadose
realizanal final hicieronitpossible pararealizarensayosde CYP1A1,1A2, 3A4, 2C9 actividadesen
fraccionesS9,withglutathione S-transferasaygamma-GT.
análisisestadístico
En este estudio,losanálisismultivariadosfueronmásapropiadoque losgruposde pares
comparisonsbetweenyaque losparámetroseranmuynumerosos,conmuestrasde
tenindividuals.comparacionesde Kaplan-Meyer,porejemplo,nose usarondebidoaque estos
arebetteradaptadosparaestudiosepidemiológicos.Lasdiferenciasenel númerode
mammarytumorsfueronestudiadosporunno-paramétricospruebade comparacionesmúltiples
de Kruskal-Wallis,seguidode untestposthocde Dunncon el software GraphPadPrism5.

35. Los datosbioquímicosfuerontratadosmedianteanálisismultivariadoconel software SIMCA-P
(V12) (AB UmetricsUmea,Suecia).El usode herramientasquimiométricas,porejemplo,el análisis
de componentesprincipales(PCA),mínimoscuadradosparcialesalasestructuraslatentes(PLS),y
PLS ortogonales(OPL),sonmétodosrobustosparamodelar,analizar,andinterpretingdatos
biológicosyquímicoscomplejos.OPLSesunamodificaciónrecienteOfthe métodoPLS.PLSesun
métodode regresiónutilizadoconel finde encontrarlasrelaciónentre dostablasde datosa que
se refiere comolaregresiónPLSXe Y. [72] El análisisconsiste encalcularpormediode sucesivas
iteraciones,linearcombinationsde losX-variablesmedidas(variablespredictoras).Estos
linearcombinationsde X-variablesdancomponentesPLS(puntuaciónvectorest) .A PLS
componente puedeserpensadocomounanuevavariable - unavariable latente- reflectingthe
informaciónenlosoriginalesX-variablesque esde relevanciaformodelingy predecirlarespuesta
Y- la variable pormediode lamaximizationof laplazade covarianza(Max COV2 (X,Y)).Los
componentesnumberof estádeterminadoporlavalidacióncruzada.SIMCA software utilizael
algoritmode mínimoscuadradosparcialesnonlineariterative (NIPALS)paralaregresiónPLS.
mínimoscuadradosOrthogonalpartial Se utilizóel análisisdiscriminante (OPLS-DA)eneste estudio
[73, 74].
El propósitodel análisisdiscriminante esencontrarunmodeloque separalosgrupos
ofobservationssobre labase de susvariablesX.LosmatrixconsistsXde losdatosbioquímicos.La
matrizY contiene variableswhichficticiadescribirlapertenenciaagruposde cada observación.Las
variablesbinariasse utilizanfinde paracodificarunaidentidadde grupo. El análisisdiscriminante
encuentraunplande discriminante enlacual el observacionesproyectadasestánbienseparadas
de acuerdocon cada grupo.Theobjective de OPLSesdividirlavariaciónsistemáticaenlaspartes
de modelointotwoX-bloque,unarelaciónlinealconY (enel caso de un discriminantanalysis,la
pertenenciaal grupo),yel otroun juguete norelacionado(ortogonal).Componentesrelacionados
a Y se llamanpredictivo,ythoseunrelatedaYse llamanortogonales.Estadivisiónde ladatos
extendidosse traduce enunamayortransparenciadel modeloylainterpretación[75].Antesdel
análisis,lasvariablesestabancentradosenlamediaylaunidadde variancescaled.
M
Definicionesde m
Decimoterceraletradel alfabetoespañol;representauna consonante nasal,bilabial,oclusivay
sonora.Su nombre eseme.
Signoque enla numeraciónromanaequivaleamil.
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