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Cuando las ruacciones hemoliticas no sean importan tes , p .e., cua nd o se tratede cu ltivos puros, se puede utilizar la ...
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sobrecalentamiento. Se enfría a 5Q°C y se añade 0,1 mi de Acido Láctico al10% (Laetie Aeid 10%) SR21 para ajustar el pH a ...
INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 52 gramos en 1 litro de agua    de~ tiiada y se hierve hastadisolver el medio por complet...
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INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 23 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hastadisolver el medio por completo. S...
REFERENCIAS1. Kelsey, J. C. (19581 The Tesling of Sterili zers , Lancet 1, 3b6 - 309.2. Kelsey, J. C. 119611  The Tes¡ing ...
En paralelo con la placa de Agar S.S. se inocula un tubo de medio deenriquecimiento de Caldo de Selenita {Selenite Brothl ...
Trichomonas vagina"s permanece viab le, en el medio, hasta 24 horas,mientras f1ue Cooper (1957) ha informado so bre la rec...
INSTRUCCIONESSe suspenden 88 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolverel medio por completo. NO SE DE...
Todas las cepas de V. chalerae produc en colo nias grandes, lisas, elevadas, y amarillas con un color amarillo en el medio...
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DESCRIPCIDNEl Agar con Rosa de Bengala y Cloramfenicol es un meaío selectivo para laenumeración de las levaduras y mohos a...
INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden f.5 gramos en 1 litro de agua destila da y se hielve hastadisolver el medio por comp leto...
REFERENCIAS 1. Ajello, libero 119571 Cultural Methods for Human Pathogenic Fungi J. Chron. Dis. 5(51.   545-5!;1. 2. Carli...
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  1. 1. B/ood Agar Base No. 2BASE DE AGAR SANGRE N.2Código CM271FORMULA Peptona protaoss en gramos por litro 15.0 Digerido de hfg.do 2,5 Extracto de levadura 5,0 Cloruro de sodio 5,0 Ag.r 12,0 pH 7,4 (aprox. IINSTRUCCIONESSe suspenden 40 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolverel medio por completo. Se esteriliza en el autoclave fr 121°C durante 15minutos. Se enfria a 45-50 o C y se añade 7% de sangre estéril. Se mezcla con agitación suave y se vierte en placas de Petri (12 mi para unaplace de 9 cml u otros recipientes, LA RECONSTITUCIO"J y LA ME2CLA SEDEBE DESARROLLAR EN UN MATRAZ QUE TENGA AL MENOS 2 Y,VECES EL VOLUMEN DEL MEDIO PARA ASEGURAR UNA AIREACIONADECUADA DE LA SANGRE,DESCRIPGION La Base de Agar Sangre Oxoid NQ 2 se desarrolló para corresponder a la demanda de una base de agar sangre con calidades nutritivas especiales que permitiera la máxima recuperación de organismos delicados sin influir en sus reacciones hemoHticas. En comparación con el agar de digerido recién preparado, la base de Agar Sangre NO 2 puede mostrar unas propiedades estimuladoras del crecimiento iguales o superiores y las bacterias cromogénicas crecidas sobre el medio de Oxoid muestran una formación de pigmento superior. La comparación con otros muchos agares sangre ha mostrado que, con la Base de Agar Sangre Oxoid N9 2 se mejora, en forma considerable, el crecimiento de muchas bacterias, especialmente los estreptococos exigentes y neumococos, como se muestra por el desarrollo exuberante y precoz de las colonias. El medio, con agentes nutritivos y selectivos añadidos, es especialmenteadecuado para el aislamiento de especies de Mycoplasma (PPLO): se añaden40 g de polvo de Base de Agar Sangre NQ 2, 5 g de dextrosa y 0,125 g deacetato de talio o sulfato de talio a 1 litro de agua destilnda y se hierve hastadisolver. Se mezcla y se vierte en placas con gran espe~or. Se inoculan y seincuban las placas durante 5 6 6 dfas a 37°C bajo condiciones aeróbicas yanaeróbicas respectivamente. Para el aislamiento primario de las especies de Haemophilus a partir demuestras que contengan una flora mixta, se utiliza la BQse de Agar SangreN 92 con Sangre de Caballo Desfibrinada SR50. Se pueden obtener, incluso,mejores resultados utilizando placas de agar sangre de caba!lo p.xtendiendo enla mitad de cada placa dos gotas de saponina al 10% (Waterworth, 19551. 39
  2. 2. Cuando las ruacciones hemoliticas no sean importan tes , p .e., cua nd o se tratede cu ltivos puros, se puede utilizar la Base para preparar Agar Chocolate: Seañade 10% de Sangre de Caba llo Desfihrinada SR50 a léI Base a 80° C y semantiene a esta tempe ratu ra dUI·ante 5 6 10 minutos, agitándolafrecuentemente. Se enfría a 50°C, se mezcla bien y se vierte en placas.REFERENCIA1. Waterworth, Pamela M. 11955) 8rit. J. Exp . Path. 313(2), 186-194 .Bordetella Selective SupplementSUPLEMENTO SELECTIVO PARA IlORI)F.TELLACódigo SR82Se trata de cefalGxinil li ofil izada, parg añadir al Agar de Carbón Vegetal(Charcoal Agar) CMl19 o al Agar de BOI"d ut-·Gengou (Bord et-Gengou AgarJCM267 para el aislamiento selectivo de Sordetell8 pertussis.FORMULA (por vial) Cefalexina 20 mg Equivalente a 40 mg de ce"1alexina por litro de medio.INSTRUCCIONESAgar de Carbón Vegeta lSe añaden 2 mi de Jgud destilada estéril a un vial, disolviéndose el contenidopor completo. Se añade esta soluc ión a 500 mI de Agar de Carbón Vegeta lCM1 19 estéril, fundid o y enfriado ó 50° C. adicionado de sangre de ca ball odesfibrinado SR50 al 10% v/ v. Se mezcla bien y se vie rte en placas de petries tériles.Agar de Bord et -GengouEl contenido de un vial rehidrótado puede añadirse igualmente a 500 m i deAgar de Bordet-Gengou CM267 e;¡friarlo a 5f)° C, a los que se hallan añadido75- 100 mi de sangre de caballo desfibrinada SR50 estéril. Las placas con cefal8xina pueden almacenurse durante 1 semana a 4° C.M edio de Transporte para B. pertussisPuede añadirse el contenid o - e un vial a 500 .:r,1de Agar de Carbón Vegetal de Jmitad de concentración + 10 % v/ v dE sang re de ca ba ll o desfibrinada SR50para utilizarse corno medio de tran!)porte para B. pf:rtussis.DESCRIPCIONEl Agar de Bordet·G8ngou Crl1267 con sangre de caballo desfibrinada estéri l oel Agar de Carbón Vegetal CM1 19 co n sargre pueden utilizarse para elaislam iento de B. pertussis. 40
  3. 3. Davis y cols. (1971) sugirieron los siguientes ":!cuentos bacterianos paravalorar la calidad de los yogures en el momento de su venta . Satisfactorio DudoBO InsatisfactorioStrept. thermophilus >1(1 lo - lc1 <loLact. bulgadcus > 10 10 - 10 <loREFERENCIAS1. Davis, J. G., Ashton, T . F. Y McCaskill, M ., (1971) , Enumeration and viabiliW 1)1 L. bulgaricus a"d Srr. thermophilus in yog~ur(s, Cai,":, Ind. 36, 569 - 573.2. $tocklin, P., (1969) , Production and handling 01 yoghurt on a commercial seal!, Cultured Dairy Prad. J., 4, (3), 6-10.3. Pette, J . W . y Lolkema, H., (1950), Yoghurt 111. Zuurvc.rminfl en aramovorming in yoghurt, Nerh. MJ7k Dalfy .1., 4,261 - 273.4. $el1ars, A. lo y Babet, F. J., (1970), Culture~ l or th e manufacture 01 daifY products. ehr. Hansens Laboratory, Ine., MilwaukdEl, Wis.5. Sharp8, M. E. Y Fryflr, T . F., (1965), Madiü lor Lactic Adcf Btctaria, Laboratory Practice, 14, 497 - 701 .6. Eloy, C. Y., Lacrosse. A. (1976) Bull. Rech. Agron. Gembloux 11, (1·2) , 83-86.L ysine /ron AgarAGAR DE LlSINA y HIERROCódigo CM381FORMULA Peptona bacteriológica en gramos por litro 5,0 Extracto de levadura 3.0 Dextrosa 1.0 L·Usina 10.0 Citrato férrico amónico 0.5 Tiosulfato de sodio O.O<! Púrpura de bromocresol 0.02 Agar 14.5 pH ~.7 (aprox.1INSTRUCCIONESSe suspenden 34 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve has~a disolverel medio por completo. Se distribuye en tubos y se esteriliza en el autoclave a121 °C durante 15 minutos. Los tubos se cnfrfan en p.Jsici6n inclinada paraformar pendientes con fondos profundos.DESCRIPCIONEdwards y Fife (1961) describieron la fe;rmulaci6n y el u~o d3l Agar de Lisina yHierro para detectar organismos del grupo Arizona que pudieran fermentar 142
  4. 4. rápidamente la lactosa, Estas cepas producen colonias rojas o rosas sobreAgar de MacConkey o Agar de Desoxicolato y Citrato y colonias amarillassobre Agar de Verde Brillante. En el examen normal para los patógenosentéricos, estos organismos pasarían desapercibidos. Además, muchos deestos cultivos, cuando se transfieren a tubos de Agar tie Tres Azúcares yHierro (T.S.I,), producen condiciones ácidas en el medio tan rápidamente quese suprime le! reacción positiva esperada para el sulfhídrico. Puesto que lostipos de Arizona que fermentan rápidamen te la lactosa se encuentranocasionalmente en brotes de infección alimenticia, es importante determinarsu incidencia . Los únicos grupos reconocidos de entero bacterias que regularmentedecarboxilan la lisina de forma rápida y que producen grandes cantidades desulfhídric o, son miembros de los grupos de salmonela y Arizona (Moeller 1954y Ewin, Davis y Edwards , 1960). Por consiguiente, el Agar de Lisina y Hierro es un medio sensible paradetectar, ta nto organismos de salmonela como Arizona. El medio sedistribuye en tubos, ~e esteriliza y se deja solidifi car en forma inclinada conuna pendiente corta y un fondo profundo . Se inocula con una aguja rectapinchando hasta la base del fondo y sembrando en estría la superficie de lapendiente. Los tapones de los tubos se deben colocar en forma floja para queprevalezcan las condiciones aeróbicas sobre la pendiente. Se incuba a 37°C durante 18-24 horas . Los cultivos que producen rápidamente una lisina decarboxilasa originanuna rea cc ion alcalina (color púrpura ) en tod o el medio. Los organismos que nodecarboxilan la lisina producen una pendiente alcalina y un fonda ácido (colorama rillo ). Los cultivos que producen sulfhídrico originan un ennegrecimient o intensoen el medio: Debido a la desaminación de la lisi na , los cultivos de Proteus y Providenciaproducen una pendiente roja sobre un fondo ácido.REACCIONESCultivos Pendiente Fondo SH,A rizona Alcalina Alcali no +Salmonella Alcalina Alcalino +Proteus Roja AcidoProvidencia Roja AcidoCitrobacter Alcalina Acido +Escherichia Alcalina Acido o neutroShigella Alcalina AcidoKlebsiella Alcalina Alcalino Thatcher y Clark (1968) describieron un procedimien to para el aislamien tode salm : melas a partir de alimentos en los que se purificaban las coloniassospechosas a partir de placas con agar selectivo y, después, se inoculaban enAgar de Lisina con Hierro y en Agar de Tres Azúcares con Hierro. Utilizandoesta combina ción de medios, se puede hacer una mayor discriminación entre 143
  5. 5. los organismos coliformes, p.e., Escherichia y Shigel/a. Timms (1971) describió las técnicas de aislamiento e identificación de infección por Arizona en pavos, utilizando Agar,de Usina con Hierro. REFERENCIAS 1. Edwards, P. A. Y Fife, Mary A. (1961) Lysj~u-lron Agar in the dete~tion of Arizona cultures Appl. Microbio/. 9. 478 _ 400. f • I , 2. Ewing, W. H., Devis, B. A. Y Edward5, P. R. (19601 Tlls decalboxylose reactions of Enterobacteriaceae and their value in t. xonomy Pub. Hllh. I .abs. 18. n - 83. 1 3. Moeller, V. (19541 Oistribution of emino·acid decarboxylase, in Enterobacteriaceae Acta. Pathol. Microbio/. Scend. 35, 259 - 2n. 4. Thatcher, F. S. y Clark, D. S . (19681 Micro-organisms in Foo:l University of Toronto Press, p. 100. 5. Timms, l. (1971) Arizona Infection in Turkays in Grest BlitAin Med. Lab. Techn. 28, 150 - 156. Lysine Medium MEDIO DE LISINA Código CM/9/ FORMULA Dextrosa en gramos por litro 44.5 Fosfato monopotásico 1.78 Sulfato de magnesio 0.89 Cloruro de calcio fundido 0.178 Cloruro de sodio 0.089 Ad&nina I ,0.00178 OL-Metionina " , , 0.000891 L-Histidina 0.000891 DL Tript6fano 0.000891 Acido bórico ,0.1lOOOOa9 Sulfato de cinc 0.0000366 Molibdato amónico 0.0000178 Sulfato de manganeso 0.0000366 Sulfato ferroso G.OOO2226 Lisina 1.0 Inositol 0.02 Pantotenato de calcio 0.()(¡2 Aneurina 0.0004 Piridoxina " 0.0004 Acido p-a minob!nzoico 0.0002 Acido nicotfnicd 0.0004 Riboflavina 0.0002 Biotina 0.000002 Acido fólico 0.000001 Agar 17.8INSTRUCCIONESSe suspenden 6,~ gramos en 100 mi. de agua destila da qu e conte:1ga 1,0 mi deL~ctato de PotasIo al 50 % l Potasslurn Lactate 50%) SR3,. Se hierve hastadIsolver el medio por completo . Se agita cún frecuencia para impedir el 144
  6. 6. sobrecalentamiento. Se enfría a 5Q°C y se añade 0,1 mi de Acido Láctico al10% (Laetie Aeid 10%) SR21 para ajustar el pH a 5.0 (aprox.). Se distribuyeen placas de Petri y se elimina la humedad de la superficie secándolas a 37°C.DESCRIPCIONSe trata de un medio complejo, descrito originalmente por Morris y Eddy(1957) para el aislamiento y enumeración de levaduras salvajes en la masa delevadura de cebada. Walters y Thiselton (1953) examinaron 180 especies delevaduras en un medio líquido sintético que contenía lisina como única fuentede nitrógeno. Encontraron que ninguna cepa normal de cerev;s;ae ocarlsbergens;s utilizaba la lisina mientras que otras muchas levaduras,incluyendo levaduras salvajes, sí la utilizaban . Mantuvieron sus cultivosstock sobre pendient.es de aQar de extracto de malta o en agar ce extracto demalta tiza·en el caso de especIes de Brettanomyces. Posteriormente, Morris yEddy (1957) describieron un medio de lisina sólido pa ra el aislamiento yenumeración de las levaduras salvajes en la masa de levadura de cebada. ElAgar de Lisina Oxoid se fabrica de acuerdo con su fórmula.TECNICASe lava y centrifuga la muestra de masa de levadura de ccbada tres veces conagua destilada. Se quitan 0,2 mi de la suspensión que con tengaaproximadamente 107 células por mi y se extiende con un asa de platinocurvada sobre la superficie de una placa de Medio de Lisina. Se incuba a 25°Cy se examina diariamente para observar el crecimiento. Se recuenta el númerode colonias que se desarrollan y se expresa el grado de conté:lminación como elnúmero de células salvajes por millón de células del inóculo original. El númerode células en el in6culo es importante, ya que Morris y Eddy han demostradoque un número escaso de células (aproximadamente de 100 a lCXX>l sontodavía capaces de crecer hasta cierto punto sobre el medio. Cuando elnúmero de células de levadura de la fermentación sobrepaseaproximadamente 10.000, un re cuento de las colonias en desarrolloproporciona una medida directa de la contami na ción por levaduras salvajes.REFERENCIAS,. Morris, E. O. y Eddy, A . A. (19571 Method f or ¡he Measurement of Wild Veas! Infeclion in Pitching Yeast J. Inst. Brew. 63(1), 34 - 35.2. Walters, L. S. V Th iselton, M. A. 0953) J Inst. Brew. 59, 401.MacConkey AgarAGAR DE MACCONKEYCÓdigo - Polvo CM7 Tabletas CM8FORMULA Peptona en gramos por litro 20,0 Lactosa 10.0 Sales biliares 5.0 Cloruro de sodio 5.0 Rojo neutro 0,075 Ag., 12.0 pH 7.4 laprox.1 145
  7. 7. INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 52 gramos en 1 litro de agua de~ tiiada y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121°r:: durante15 minutos. Antes de la inoculación, se seca la superficie del gElI.Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi Je agua destiléJda y se deja embeberdurante 5 minutos. Se esteril:za en el autoclave a 121 {C durm~e. 15 minutos.DESCRIPCIONSe trata de un medio diferencial para la detección, ú,:lamiento y enumeraciónde coliformes y patóge nos intestinales en agua, productos lácteos y muestrasbiológ icas. El Aga r de MacConke CM7 c;orn~sponde al medio recomendadopor la Org:mizaci6n r..1Jndial de la Salud (19631, el Ministerio de Sanidadbritánico (1969) y por Windle Taylor (1958) para el examen bacterio lóg ico delagua. Este medio, aunque utiliudo r rincipalmente para os coliformes, puede serutilizado también pa ra la diferenciación de otl·as bacteri~s entéricas(i ncluyendo patógenos) y es adecuado para la d i f~ren (;i ación de las especiesde Pasteurella (p.e., Hoog endijk , 1962).TECNICAMuestras patológicas Debido a su capacidad para favorecer el crecimier lto de los cocos Gram-positivos patógenos (p.e., esta filococos y emerococosl, as; comoentero bacterias, el Aga r de Mac Conkey CM7 se recomienda especia lmentepara el cu ltivo de patógenos qUE puedan estar presentes Rn diversas muestr3stales como la orina, heces e hísODos de heridas. Si bien por una parte esselectivo, por otra no elimina una flan! bacteriana mixta erll a medida en que lohacen otros medios inhibidores (incluyendo otros ágares :le MacConkeyl.Proporciona otras indicaciones diagnósticas aparte de la tolerancia a la bilis,tales como la morfología de la colonia y la crorno[lé r.esis. El Agar deMacConkey se debe utilizar en paralelo con ot((S medios indicadoresselectivos tales como el Agélr de Desoxicolato y Citróto, Agar Su lfito deBismuto, Agar de Verde Brillante y Caldo de Verde Brillante y Bilis (2%), y unmedio no selectivo como el Agar Sangre.Análisis de agua IWindle Taylor, 1958) (Ministerio de Sanidild británico.19691.Este medio puede usarse para el recuento directo de bacterias coli-ae!ogenes,utilizando placas preparadas a partir de volúmenes conocic os de lü muestra deagua, pero una función más exacta de este medio es la diferencinción de losorganismos productores de ácido gas en Caldo de MacConkey a 37°C:todos los caldos positivos se siembran en Agar de Ma cConkey, incubándoselas placas durante 24 horas a 37°C y exami nando si hay colonias típicas (véaseabajo). Las colonias com~uestas de bacilos Gram-negativm. no esporuladosse subcultiva n para identificarse a cont inuación. 3e pUflde confirmar lapresencia de estreptococos fecales en medios con a:z:ida o telurito porsubcultivo en Agar de MacConkey. Véase abajo pa ra la morfología de las colonias.Diferenciación de PasteurellaEl medio CM7 de Oxoid puede ut iliza rse para prob<lr la capacidad de losbacilos de Pasteurella para crecer en Agar de MacConk9Y con la finalidad de 146
  8. 8. diferenciar sus especies (p.e., Hoof¡l endijk, 19621. PasteureJ,a pestis y P.pseudotuberculosis muestran un crecimiento escaso, pero visible después de24 horas a 37°C aunque éste pued e desaparecer después de unos días, sesupone que debido a la autólisis (W ilson y Miles, 1964) . P multocida fP.septica) y P. haemolytica no producen crecimiento visible .Organismos pectinolfticos (Stewart, 1962)Stewart utili.!ó el Agar de MacConkey Oxoid como base de un medio selectivode diagnóstico para 10s organismos pectinolíticos con la fi nalidíld de aislarespecies de Erwini8 a partir de muestras pútridas que contenían otrasenterobacterias. Se inoculan pla cas de Agar de MacCan key con cloruro decalcio (5,2 g de polvo CM7, 0,4 g de Gl2 Ca y 75 mI de agua destilada ) secubren con una capa de pectato-EOTA (0,1 % de EDTA que contenga un 2%de palipectate de sodio) y se incuban durante 48 horas a 25°C. La s Erwiniafermentadoras de lactosa producen colonias rojas en unos huecossujJerficiales, formados por la licu efacción del pecrato.CARACTERISTICAS DE LAS COLONIASDespués de 24 horas a 37°C, las colonias típicas ~on como siguen: Organismo Color OlJservacion-as~~~~~~------~~~------==Esc hcrichia coli rojo no mucoi jeAerobacter aerogenes rosa mucoic1eEnterococcus (p .e ., estreptococo f ecal) rojo diminuta, redondaStaphylococcus rosa pálido opacaPseudomonas aeruginosa verde pálido creci miento fluorescente Estas características son variables y las colon ias sospechosas debencultivarse en A~ua de Peptona CM9 o Agua de Triptona CM87 para llevar acabo pruebas diferenciales.REFERENCIAS1. Hoogendijk. J . L. (1962) Pasteurel/8 Strains Isolated from Human Sputum Antonie van Leeuwenhoek J. Micro bio/. Seral. 28(3), 315 - 320.2. Dept. 01 Health & Social SecurilV (1969) The Baclerio!ogical Examinalion of Water Supplies 4th ed., H.M .S.O .. London.3. Stewarl, O. J. (1962) A Selective-Oiagnostic Medium for the Isolalion of Peclinolytic Orga nisms in the Enterobacteriaceae Nature 195(4845). 1023.4. W ilson, G. 5. y Miles, A . A. (1964) Topley and Wilsons PrincipIes 01 lJacteriology and Immunity 5th ed., Edward Arnold ltd., London vol. 2.5. Windle Taylor. E. (1958) The Examination 01 Waters and Water Supplies 7th ed .• Chu rchiU Lid .. London.6. Organización Mundial de la Salud (1963) Normas internacionales para el agua potable , 2a ed .. OMS. Ginebra.MacConkey Agar IWITHOUT SALTIAGAR DE MACCONKEY (SIN SAL)Código CM7bFORMULA Peptona en gramos por litro 20,0 Lactosa 10,0 Sales biliares 5,0 Rojo neutro 0,Q75 Agar 12,0 pH 7,4 laprox.) 147
  9. 9. Enumeración de psicrófilos en el agua 1. Se tratan 50-100 mi de la muestra de agua en el momento de la recogida con 0,5-1,0 de tiosulfato de sodio 0,1N para eliminar el cloro residual. 2. Se filtra la muestra a través de una Membrana Filtrante Oxoid estériP. 3. Se sigue la técnica (puntos 4-8) descrita para el requesón. REFERENCIAS Stan darG Methods for the ElIamination of Dairy Products. Eleventh Edirion, A PHA Inc., New York, 1960. 2. Repon 71 (1969), " The Bacteriological ElIamination of Water Supplies," Founh Edition , London, O.M. S. Mueller Hinton AgarAGAR DE MUELLER HINTONCódigo CM337FORMULA Infusión de carne de vaca en gramos por litro 300,0 Hidrolizado de case(na 17,5 Almidón 1,5 Agar nO1 10,0 pH 7,4 (aprox. lINSTRUCCIONESSe suspenden 35 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolverel medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121 ° C durante 15minuto:) . DESCRIPCION El Agar de Mueller Hinton se ideó como un medio de cultivo reproducible parael aislamiento de especies patógenas de Neisseria (Mueller y Hinton, 1941 ,. Lainclusión del almidón asegura que los factores tóxicos que se encuentrandurante el crecimiento sean absorbidos, siendo su prttSencia a menudoesencial para que se establezca el creci miento a partir de inóculos muypequeños. El Agar de Mueller Hinton se utiliza ampliamente en la actualidad para laspruebas de sensibilidad a los antibióticos (incluyendo las sulfamidasL Lainelusiórl de un agar especiamente seleccionado en el Agar de Mueller HintonOxoid asegura que las zonas de inhibici ón, amplias y ciarAS, sean evidentescuando los organismos sensibles se enfrentan a Ic.s antibióticos y lassulfamidas activas, y que los tamaños de~ la zona correspondan con los deotros medios estándar. Sin embargo, para la prueba con las sulfamidas, esesencial que se diluyan al menos 100 veces los cultivos en caldo de losorganismos. Las sulfamidas pueden ser antagonizadas por los factores decrecimiento en los caldos de cultivo y son susceptibles a los efectos de losgrandes in6culos, cuando los organismos pueden llevar suficientesantagonistas de las sulfamidas para multiplicarse durante 3 Ó 4 generacionesen presencia de una concentración bacteriostática del fármaco . 173
  10. 10. Las técnicas utilizadas para la prueba de sensibilidad incluyen métodos cualitativos en los que un(j mJe3t ra primaria se puede inccular ~obre un medio y se registran las zonas que no muest ren crec im ie ntcj alrededor de los discos de antibióticos (A.C. P., 1966), y l o~ métodos sem icu antitativos de Ericsson (1960) y Bauer y colaboradores (1966). .I La técnica do Ericsson (1560) utiliza discús co1ocac1os en medios estandardizados de un vol umen y profundidad conocidos, en recipientes de fondo plano. El in6culo se m ide muy cu idadosamente y se inocula porinundación sobre la superlide del medio. Después dn retira r el exceso deliquido, se colocan sobre el medio los discos de amibi6ticos, dejánd ose unperiodo de preincubaci6n aurante el cual se produ c. la difusión de los gantibióticos antes de c¡ue se incuben las placas . Este p roc~dim ien to aseguraque los antibióticos de difusión lenta no Elstén en desventaja ell ~resencia delos or,9anismos de crecimiento rápido. Después dG la incubación, se miden lostamanos de las zonas de in hibición y se comparan cop las gráficas de laspendientes de regresi ón a partir de la s pruebas hechas rorl gran ca ntidad deorganismos. Los informes pueden em itirse en t érminos de sensibilidad oresistencia, o en va lores de e.u....,. La técn ica de Kirby-Bauer (1966) utiliza Afilar de M ~I>3 l le r Hinton y discos dealta concentración. El inócul o se estandardiza ajJstando la turbiedad de uncaldo de cu ltivo en fase de crecimiento a un estándar de ~ulfato de bario. Lasplacas de Agar de Mueller Hinton se inoculan con hisopos de algod ónhumedecidos en esta suspensión . Barry y colaborédo res (19701 describen unmétodo más sencillo de preparación de Jos organ ismos en el cual se añade unapequeña asa de un caldo de cultivo al agar f undido, el cual se viene entoncessob re la superficie del med io. Se dice que una siembra del égar en capa finaproduce zonas de inhibición mejor definidas qup. los métodos de inundación ode estriado sobre la superfi cie. Después. de colocar les discos de sensibilidad,se incuban las placas inmediatamente o se e:ipera 30 minutos. Después de18-24 horas de incubación a 37°C, se miden los diámetros de la zona y secompa ran con los reproduci dos en la tabla de la página siflu ien te, tomados deBauer (1966) y Ryan y colaboradores (1970L No se inform8 sobre las medidas de la zona, sólo las interpretaciones deResistente, Sensible o Intermedio. Esser y Elefson (1970) observa ron que el método de Kirby -Bauer erasencillo, exacto y reprodu cible. Dewees , Poupard y Morton (19701 in vesti¡::¡aron el efecto delalmacenamiento de las placas con Agar de Mueller Hinton y mostraron que elalmacenamiento hasta 3 semanas a 4°C, en bolsas de plástico cerra da s, noafectaba los tamaños de las zonas de inhibición en forma apreciable . También se dispone de Caldo de Mueller Himon (Mu eller Hintún Broth lCM405 para los estudios de sensibil idad antibiótica .REFERENCIAS1. Assoc. Clin. PBrh. (19661 Afltiobioti :: Sonsitivity Tests Br~dsheet Nl. 55.2. 8arry, A . L , Garcia, F. y Thrupp. l. D. 1970) A n improved s in ~le di~e me ihod for testmg the antibiotie suseeptibility 01 rapidly-growing pathogens Am. J. C/ln. Por,". to3, 1<9 - 158.3. Sauer. A. W., Kirby, W. M. M., Sherris, K. C. y Turek. M. (966) Antitiotie suseeptibility testing by a standardised single dise method Amer. J Clin. Ps(h . 45. 4.93 - 496.4. Dewees, linda, Poupard, J . A. Y MonCn. H. E. {l 9701 EHeet 01 stor&ge of Mueller Hinton agar plates 011 lone siles for antir.l ierobial tes ting App/. Microbior. 20. 293 - 297.5. Ellcsson. H. (19601 Retional use 01 entibioties in hosritals SC8¡)d J Llin. & L8b. Inves(. 12. ISuppl. SO) 1 - 55 .6. Esser, Veronica , E!efson, O. 1197C) 8Iperiences witn the Kirby-B8:Jer ! ,ethod 01 antiebiotic susceptibility testing Amer. J. e/in. P8fh. 54, 193 - 198.7. Mueller. J. H. y Hinten. Jane (1941) A protein-tree medium lel primary isolation of the gonococcus and meningocoeeus Proe. Soco Exp. Biol. s/ld Med. ,UI,230 - 333.8. Ryan . K. J ., Schoenknecht, F. O. y Kirby, W . M . M . 119iO; Disc Sfn!itivity Tvsling H osp. PrBC(. 5,91 - lOC. 174
  11. 11. Taylor-Aobinson y colaboradores {197H describieron p.1 uso de medios decaldo para el aisl&miento y tit ulaci6n de micopasmas viables por elmetabolismo de la arginina y de la glucosa. midi13ndo el cambio ele pH en elmedio. , 1 Kraybill y Crawford {196S1 describieron un medio selectivo paraMycoplasma pneumoniBe, Se pueden utilizar el Suplemento G para Micoplasma SFl59 y el SuplementoP para Micoplasma SR60 con este medio - véasf! Mycoplasma Asar BaseCM401. La mayorfa de las cepas de micoplasma se favorecen r.cn el crc¡;i miento enel medio bifásico, en el cual una capa de caldo cubre é. una Cil¡::a basal de A~arde Micoplasma. (Véase Mycoplasma Agar Base CM401) ,REFERENCIAS1. Kraybill, W. H. y Crawford, Y. E. (1965) A selective rnedium antl colOllr test l or Mycoplasma· pneumoniae Proe. So co Exp. 8iol. Moc. 118,9(.,5 - 967.2. Shepard y lanceford "970) Urease Colour Test Medillm U·!=l for the Dete ction and Identific.ation 01 "Too Mycoplasmas in Clinieal Material ApP/. Microbio/. 20, 539 - 543.3. Taylor· Robinson, D., Manin·Bourgon, e., Watanable, T. y AJdey, J. P. 119711 (sola tion 01 T·mycoplasmas from Dogs and SQuirrel Monkey:; : Biological alld Sorolugi-::al Corllparison with those IsoLated from Man and Caltle J. Gen. Microbio/. 68, 97- 107.Nutrient AgarAGAR NUTRITIVOCódigo - Po/va CM3 Tabletas CM4FORMULA Lab-Lemco en polvo eh qraff,vs por litro 1 Extracto f1e Levadura 2 Peptona ¡; Cloruro de sodio 5 Agar 15 pH 7.4 (aprox. )INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 28 gramos en 1 Ii~ro de ag "J a destilajCl y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se esteriliza en el aut oc lave a 121°C dl.Jrante15 minutos.Tabletas: Se añade una tacleta a 5 mi de agua destilélda y se deja embeberdurante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121 °C duran:e ) minutos,DESCRIPCIONSe trata de un medio sencillo, uno de los primeros en la gama de Oxoid que hademostrado su valía en repetidas ocasi ones: entre I()~ muchos trabajospublicados que men cionan el medio de Oxoid hay inform e~ soh re el cultivo demiembros de los siguientps género.:; : Alysiella, Agrobacterium, Arthrobacter,Bacdlus, Brucell8, Escherichia, F1avobacterium, Micromon()spora,Pseudomonas, Rhizobium, Sarc;na, SimonsiellJ, Staphylococcus,Streptomyces, Thermopolysora, Thiobacillus y Xantáomonas. 182
  12. 12. El agar nutritivo es un medio barato V, por consiguiente, es adecuado paralos propósitos docentes V de demostración. Contiene una concentración deagar de 1,5% que permite añadir hasta el 10% de sangre u otro líquidobiológico, según se requiera . El medio, sin adiciones, puede ser utilizado parael cultivo de organismos que no sean exigentes en sus requerimientosalimenticios. Para un medio más rico en sustancias nutritivas, véase Base de AgarSangre nO2 CM271 (BloOO Agar Base No. 2) .Nutrient BrothCALDO NUTRITIVOCódigo - Polvo CMI Tabletas CM2FORMULA Llb-Lemco en polvo en gramos por litro 1 Extracto de levadura en polvo 2 Peptona 5 Cloruro de sodio 5 pH 7.4 (aprox.)INSTRUCCIONESPolvo: Se añaden 13 gramos a 1 litro de agua destilada. Se mezcla bien y sedistribuye en los recipientes definitivos. Se esteriliza en el autoclave a 121 °Cdurant~ 15 minutos.Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua destilada V se esteriliza en elautoclave a 121°C durante 15 minutos.DESCR;PCIONSe trata de un medio muy económico para el cultivo de organismos que nosean muy exigentes en sus requerimientos nutritivos. 5(X} g de polvo de CaldoNutritivo Oxoid hacen más de 38 litros de caldo. El medio reconstituido yesterilizado puede enriquecerse con otros ingredientes, tales como hidratos decarbono, sangre, suero, etc, en la medida en que se requiera para finesespeciales. Véase también Caldo Nutritivo W~ 2 CM67 (Nutrient Broth No. 2l.Nutrient Broth No. 2CALDO NUTRITIVO N 9 2Código - Polvo CM67 Tabletas CM68FORMULA Lab-Lemco en polvo en gramos por litro 10 Peptona 10 Cloruro de sodio 5 pH 7.5 (aprox ) 183
  13. 13. impurificados de caseína en medios para la produccl6:1 de toxina tetánica, seproducen var iaciones ocasionales en 1<1 producción dA toxi na debido asustancias inhibidoras. Este prob lema fue resu elto por el tratamiento confosfato cálcico, el cual eliminn de una manera eficcz Ins inhibido ~ es de laproducc ión de toxina ,REFERENCIAS1. Mueller, J. H. Y Miller, Pau!ine A , : 19!:4) Variable fac t ~rs influ(Jncir,g lhe production of tetllnus toxin J. BlIct. 67,271 - 2n.TryptoseTRIPTOSACódigo L47La Triptosa Oxoid es una peptona mixta con propieciades nutritivas únicas quela hacen idónea para usarla en medios para el aislam iento V cultivo de especiesde Brucel/a, estreptococos y otros organismos exiyentes. Su composiciónaltamente nutritiva la hace idónea pa ra uso en medios rara el aislamiento debacte rias más exigen tes en donde se requiera un Grecimien to rápido oprofuso, p.e., en el hemocultivo. ~a Tript0sa Oxoid S6 ~ecomienda, también,para usarla en agar sang re y otros medios para la determinad6n de lasreacciones hemolíticas, yer. medios para la producción de indol.Peptone WaterAGUA DE PEPTONACódigo - Polvo CM9 Tabletas CM10FORMULA Peptona en gramc-s por litro 10 Cloruro de sodio 5 pH 7,2 (aprox .1INSTRUCCIONESPolvo: Se añaden 15 g a 1 litro de agua destilada. Se mezcla bien y sedistribuye en tubos. Se esteriliza en el autoclave a 121oC durante 15 minu tos .Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua de3tilada y se esteriliza en elautoclave a 121 ° C durante 15 minutos. Cuando se hayan de añéJdir soluciones estériles después del autoclavado, sereduce el volumen de agua para recons~ itución en Igual cantidad.DESCRIPCIONEl Agua de Peptona puede utilizarse como un medio dE.: crp.cimiento o comomedio de base para la fermentac ién de hidratos de ca rb ono, mientras que uncultivo puro en Agua de Peptona es un inóculo cómodo para una serie detubos de fermentación u otros medios diagnósticos. 198
  14. 14. Se dispone Lie soluciOnes estériles de otros hidratos de carbono y otrosreactivos para añadir al medio. El Agua de Peptona, ajustada a pH 8,4 es idónea pera el cultivo yenriquecimiento de Vibrio comma a partir de material infectado (Cruickshank, R., 1968). El medio se utilizó anteriormente para la realizaciÓn de la prueba del indol,pero, en la actualidad, se obtienen mejores resultados utilizando Agua deTriptona (Tryptone Water) CM87. Se dispone tambii3n de este medio con indicador de Andrade (Agua dePeptona, Peptone Water, CM61 / 62) o con indicador de r(¡jo de Fenal (Aguade Peptond con Rojo de Fenal, Phenol Red Peptone Water, CM63J. El mediocon indicador de Andrade cambia el color de~:je el incoloro hasta el rosa si hayproducción de ácido, El medio con rojo de fenal es naranja cuando es neutro,amarillo cuando es ácido, y rojo oscuro cuando es alcalino. Ambos medios sepreparan y esterilizan de la misma manera que el Agua de Peptona excepto enque se incorpora un tubo de Durham invertido para la if"dicación de laproducción de gas. Si se añaden soluciones de hidratos de carbono, antes odespués del autoclavado, se debe reducir el volumen de agua utilizado para sureconstitución por una cantidad equivalente, El medio con indicador deAndrade es rosa cuando está caliente, pero se hace incoloro cuando . ;e vuelve ca enfriar,REFERENCIA1. Cruickshank, A. (1968) Medical Microbiology 11th &d ., Livingsto08ltd. London, p. 268.Perfringens AgarAGAR PARA PERFRINGENS (P.O.S.P.J ro. P. s. P.)Código CM543FORMULA Triptona en gramos por litro 15 Extrllcto de levadura 5 Peptona de aoja 5 Extracto de hrgado 7 Citrato férrico amónico 1 Metablsulflto de sodio 1 Tampón tria 1,5 Aga, la pH 7,3 (aprox.) SUPLEMENTO A SR76 SUPLEMENTO B SR77 Cada vial contiene Cada vial contiene Sulfadlaclna de sodio 50 mg Fosfato de ola8ndomiclna 0.25 mg Sulfato de polimixina B 5000 unidades i.INSTRUCCIONESSe suspenden 22,8 gr en 500 mi de agua destilada y se hierve suavementehasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121°C 199
  15. 15. Se put:lden obtener los detalles completos de la técnicu y las gamasdisponibles solicitando el folleto correspondiente de Oxoid.Medios para la Prueba de SensibilidadOxoid fabrica una ar:1plia gama de productos para su uso ei"l la preparación delos Medios para la Prueba de Sensibilidad. A continuación se d<l una lista deestos productos pudierdo encor.trarse todos los detalles de cada uno de ellospor orden alfabético en Inglés: Agar Diagnós~jco para In Prueba de Sensibilidad - CM261 (Diagnostic Sensitivity Test Agar) Agar de Mueller Hinton - CM337 (Mueller Hinton Agar) Caldo de Mueller Hinton - CM405 (Mueller Hlnton Brothl "Agar Iso-Sensitest" - CM471 ("Isosensitest Agar" ) " Caldo Iso-Sen;itest" - CM473 ("Isosensitest Broth") Productos de Sangre (Sangre de Caballo Lacéldn - SR-?8, Laked Hors. 810od)Sheep Blood, Deflbrinated (NO PRESfRVATIVE)SANGRE DE CARNERO DESfl8RINADA (SIN PRESERVATIVO)Código SR5/Se trata de un producto para incluirlo en medios dI:: ,;ultivo bacteriológicos.Véase Blood Products .Simmons Cífrate AgarAGAR DE CITRATO DE SIMMONSCódigo - Polvo CM/55 Tabletas CM/56FORMULA Sulfato de magnesio en grómos pOI litro 0,2 Fosfato de amonio dihfdrico D.2 Fosfato amónico de nodio 0.8 Citrato de sodio, tribásico 2.0 Cloruro de sodio 5.0 Azul de bromotimol 0.08 Agar 16.0 pH 7.0 (aprox.1 224
  16. 16. INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 23 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121 ° C durante15 minutos.Tabletas: Se añade 1 tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeberdurante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.DESCRIPCIONEl Agar de Citrato de 5immons se recomienda f Ewing y Edwards, 1960) para ladiferenciación de la fam ilia de enterobacterias y se basa en la utilización o nodel citrato como única fuente de carbono. El medio es vinualmente una forma solidificada del medio de citrato deKoser el cual, en su forma original, tenia la desventaja de dar lugar a falsoscrecimientos cuando se utilizaban grandes in6culos. La adición del indicadorde azul de bromotimol al medio fue una mejora considerable. Véase el Mediode Citrato de Koser IKoser Citrate Mediuml CM65. TECNICA El medio puede utilizarse bien en agar inclinado en tu bar. de ensayo o bien en placas de Petri. En ambos casos se inocula ligeramente la superficie del medio en estría y, cuandose utilice un agar inclinado, se inocula el fondo del medio por picadura. Se recomienda una incubación a 37° C durante 48 horas. El crecimiento positivo fa sea, utilización de citrato) produce una reacción alcalina y el medio cambia de un color verde al azul blill3nte, mientras que enuna prueba negativa (o sea, no utilización del citrato) el color del mediopermanece inalterado. Eschericihia coli no crece en el medio, mientras que la mayoría de los otrosorganismos coliformes lo hacen . Todos los miembros de Klebsiella-Aerobader-Serratia-$almonella-Arizona-Citrobacrer y algunos miembros delas divisiones Proteus-Providencia utilizan el citrato. Proteus morganii y losserotjpos de Escherichia coli de enteritis infan til ~::>idémjca no Jo utilizan(Kauffmann, 19541. El Agar de Citrato de Simmons puede utilizarse paradiferenciar Salmonella schortmuellefl~ S. enteritidis y S. typhimurium de S.typhosa, S. paratyphi y Shigella. Este último grupo no crece sobre el medio,mientras que los miembros del primer grupo utilizan el citrato y producen lacoloración azul ca racterística .REfERENCIAS1. Ewing, W . H. y Edwards, P. R. (1960) Internar/. Bull. SacI. Nomen and Taxon. 10(1), 1- 12.2. Kauffmann, F. (1 954) EnterobacteriaceBe : 2nd ed ., tAunksgaard . Copenhagen.SIMMediumMEDIO SIMCódigo CM435fORMULA Triptona en gramos por litro 20,0 Peptona P 6.1 Sulfato ferroso de amonio 0.2 Tiosulfato de sodio 0.2 Agar nO 1 3.5 pH 7.3 (aprox .) 225
  17. 17. REFERENCIAS1. Kelsey, J. C. (19581 The Tesling of Sterili zers , Lancet 1, 3b6 - 309.2. Kelsey, J. C. 119611 The Tes¡ing 01 Sterilizers. 2. Thermophilic Srore Papers , J. c1in. PlHh. 14(3),313-3 19.3. Nl,lffield Provincial Hospitals 7rus! (1958) Presen t Sterilizin g PI.1Ctic,l in Six Hospitals, NPHT. Landan. S.S. AgarAGAR S.S.Agar para Salmonella y ShigellaCódigo - Polvo CM99 Tabletas CM/OOFORMULA Lab-lemco en polvo en gram o~ por Uro 5.0 Peptona 5.0. l actosa 10.0 Sales biliares NQ 3 e.5 Citrato de sodio 10.U Tiosulfato de sod io 8.5 Citrato férrico 1.0 Verde brillante 0.00033 Rojo neutro 0.025 Agar 15, 0 pH 7.0 laprox IINSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 63 gramos en 1 litro de agua destilDda y se hierve a fuegolento y con agitación fre cuente hasta disolver el aga r. NO SE DE BEAUTOCLAVAR. Se enfría hasta aproximadamente 5l10C, se mezcla y se vieneen placas de Pe tri .Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destil3ca y se deja embeberdurante 5 minutos. Se lleva a e,bull ición en un baño ha!)!a disolver el medio porcompleto . Se mezcla bien antes de verter. NO SE [ ESE AUTOCLAVAA.DESCRIPCIONEl Agar 5 .5, es un medio difere nci3l y selectivc, ¡Jara el aislamiento deespecies de Shigella y Salmonella a partir de muestras pato lógica$, muestrasalimenticias sospechosas, etc. Los organismos Gram- pos itivos y co litormes seinhiben por la acción de una nlezcla de sales biliares e$pecialmente preparada.TECNICASe inocula el medio fuertemente con la muestra, extendiendo un.! porción delinóculo original con el fin de oblener colonia!:. bien sepa-a das en alguna partede la placa. Se incuba durante 18 a 24 horas 3 37 Cl C: los no fermen tadores dela lactosa forman colonias ir.coloras, mientras que los ccliformesocasio nalmen te res istentes u otros fermentadores ne la lactosa produ cencolonias rosas o rojas. 232
  18. 18. En paralelo con la placa de Agar S.S. se inocula un tubo de medio deenriquecimiento de Caldo de Selenita {Selenite Brothl CM395; se incubadurante 12 horas a 37°C y se subcultiva en otra placa de Agar S.S.Standard Plate Count Agar IAPHAIAGAR PARA RECUENTO EN PLACA ESTANDAR IA.F.H.A.ICódigo - Polvo CM463 Tabletas CM464FORMULA Extracto de levadura en polvo en gramos por litro 2,5 Digerido pancreático de caseína 5,0 Glucosa 1,0 Agar 15,0 pH 7,0 (aprox.)INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 23,5 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se distribuye en frascos y se esteriliza en elautoclave a 121 °C durante 15 minutos.Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeberduranre 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos.DESCRIPCION El Agar para Recuento en Placa Esténdar CM463 se ajusta a la formulación del Agar de los métodos estándar, descrita en: "Stand~ rd Methods for the Examinatíon 01 Dairy Products", ll a edición, 1960. Es la misma formulación que la descrita para el Agar Deshidratado para el Recuento en Placa (Aga r de Triptona con Glucosa y Levadura) en "Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater" , 11 8 edición, 1960 de A.P.H.A. Es, igualmente, la misma formulación qlle 131 Agar de Triptona conGlucosa y Levadu ra IU.S.P. XVI y A.O.A .C., 10 edición, 19651. , Los ingredientes del Agar para Recuento en Placa Estándar CM463 seajustan a las especificaciones señaladas en "Methods for the Examination ofDairy Products" , 12 Edición , 1967, páginas 232 - 233 de la A.P.H .A . Las cualidades físicas del medio reúnen las especificaciones descritas por laA.P.H.A., 12 Edición, 1967, página 233. La producción del medio se controla con las pn.:ebas descritas en lapublicación arriba mencionada, páginas 234 - 242, en donde las muestras deleche cruda y pasteurizada se exami nan en paralelo con las del Medio Estándarde Referencia. t El Agar para Recuento en Placa Estándar puede utilizarse también en elexamen microbiológico de alimentos, tal y como describe la Association of lOOfficial Agricultural Chemists", 9 Edi ción, 1960 y "Recommended Methodsfor Microbiological Examination of Foods" , A.P.H.A. , 1958. 233
  19. 19. Trichomonas vagina"s permanece viab le, en el medio, hasta 24 horas,mientras f1ue Cooper (1957) ha informado so bre la recuperaci ón de patógenosdel tracto respiratorio superior y :" "Itérico después de 8 a 12 semanas dealmacenaje. Stuart y cols. (1954) l,; .:izaron con éxito ¡JI rnétodo de transportepara recuperar H. influenzae, Str. pneumoniae, Str. pyogenes y e,diphlheriae a partir de muestras que habían estad o en tránsito durante 3 a 5días,REFERENCIAS1, Beakley, J. W. ( 1957) The Toxicity of Wooden Applicat or Sticks for Nei. ;seria gonorrhoea , Pub , < Hlth , Lab, 15(1). 11-16.2, Cooper, G. N, (1957) The Prolonged Survival 01 Upper Respiratory Trac! and Intestinal Pathogens on Swabs . J . e/in. Path. 10(3), L1fi - 23Q.3. Crookes, Eileen M. L. Y Stuart, R. D. (1959) The Valueol Aerosporin in the isola tion 01 Neisseria from Swabs forwa rded to the Labora tory in rransport Medium. J. Path. Su et. 78 (1 ),283 - 288.4. Moffen, Mary, Young , Jean L. y Stuart, R. D. (1948) Centralized Gonococcus Culture lar Dispersad C¡¡nics. Srit. Med. J. 2.421 - 424.5. Stuart, R, D " Toshach, Shiela R. y Patsula , Teresa M . 0954) The Problem of Transport 01 Specimens for Culture 01 Gonococci. Ca nad . J, Pub/o H/th. 45(:;:), 13 - 83,6. Stuart. R. :l. ( 1959) Transpon Medium for Specimens ,n PlIblic Health Bacteriology . Pub , Hlth , Rap. Wash. 74(5),431 - 438.7. W ilklnson, A. E, ( 1958) Sorne Recent Advances in the LaboratolY Diagnosis 0 1 Venereal Disease, J . Med. Lab, Techno/. 15(3) , 184 - 195, Sucrose 10%SACAROSA AL 10%Código SRI3Se trata de una solución esterilizada por filtración, disponible en ampollas de 5mi en cajas de lO,T. C. B. S. Cho/era MediumMEDIO T.C.8.S. PARA COLERACódigo CM333FORMULA Extracto de levadura en polvo en gramos por litro 5 Peptona bacteriológica 10 Tiosulfato de sodio 10 Citrato de sodio 10 Bilis de buey 8 Sacarosa 20 Cloruro de sodio 10 Citrato férrico 1 tlzul de bromotimol 0.04 Azul de timol 0.04 Ag.r No. 1 14 pH 8.6 (oprox .1 237
  20. 20. INSTRUCCIONESSe suspenden 88 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolverel medio por completo. NO SE DEBE AUTOCLAVAR. Se vierte en placas sin más calentalTiento y se seca éntes de utilizar .DESCRIPCIOIKobayashi, Enamoto, Sakazaki y Kuwaha ra (1963) desarrollaron el medioT,C .8.S. a partir del agar de aislamiento se lectivo dfl Nakanishi (19631. El medio T.e.8.S. de Oxoid está de acuerdo con la formulación deKobayashi y cola boradores, excepto en Que contiene Jna bilis de bueyespecialmente transformada, libre de los defectos obsflrvados por Nakanishi yKobayashi. El medio de Oxoid es particu larmente adecuado para el crecimiento deVibrio chalerae biotipo el tor " V. parahaemollticus, además del clásico V.chalerae. Sakazaki (1963) describió el aislamien to :ie V. palahaemolyticus y V.alginolyricus en medio T. C.8.S. La mayoría de las enterobacterias que se hallan en les heces quedansuprim idas totalmente durante, al menos 24 horas. Se puede producir uncrecim iento ligero de Proteus spp. y Strept. faocalis, pe ro las colonias sedistinguen fácilmente de las colonias de Vibr;o. El medio T .C.8.S. Oxoid es completo y no requiere 3d:tivof. o adicionesasépticas de sangre . Muestra , por tanto, una ventaja t:onsideréble sobre elAga r de Telurito y Sulfato de Lau ril que requiere adiciones ulteriores despuésde la esteril ización . Aparte de este factor de comodid<Jd, posee también unascaracterísticas de crecimiento superiores para Viário spp., en com paracióncon los medios de telurito. Mient ras que inhibe a los no vibrios, fav0rece elcrecimiento rápido de V;br;o SP~I despuós de una incubación a 37°C durantela noche.ASPECTO DE LAS COLONIAS EN AGAR T.C.B.S.Después de 24 horas de incubación a 37°C. V. cholerae - colonias amari llo pa ~ das , de 2-3 mm d~ diámetro, con uncolor amarillo en el medio. V. parahaemo/yticus (grupo 1) - colonias incol0ras con un centro verde.de 3-4 mm de diámetro. V. parahaemolyticus Igrupo 2) - colonias amarillo pa rdas de 3A mm dediámetro con color amarillo en el medio . Escherichia coli Slamonel/a typhi Klebsie/la spp. Crecimiento ligel o cnrl colonias diminutas. Shigella spp. No hay cu lor iJ marill o en el medio. Pseudomonas aeruginosa Proteus spp. Stlepto~occus faeca/is - ligero crecimiento con cole.nias diminutas. Coloramarillo en el mt;dio.TECNICALas heces o el material de prueba S8 siembrsn en estría a trav9s ne la superficiedel Medio T.C.8.S. pa ra Cólera Oxoid y se incuba du~ante 18-24 horas 3 37°C. 238
  21. 21. Todas las cepas de V. chalerae produc en colo nias grandes, lisas, elevadas, y amarillas con un color amarillo en el medio de cu ltivo. Las cepas de V. parahaemalyticus producen colonias similares, con la excepción Ge Jos organismos perte necientes al grupo 1 que producen colonias verdes sin alterar el color del medio. REFERENCIAS l. Saktlzaki, R. (1963) Vibrio parahaemolyticus Tokyo, Osseido. 2, Nakanishi, Y. ¡963) An 150lation Agar Medium for Cholera and Enteropethogen ic Halophillc Vibrios. Modern Media 9, 246. 3. Kobayashi, T., Enomoto, S., Sakazaki, R. y Kuwahara , S. (1963) A New Selective Medium for Pathogenic Vibrios: T.e.a.S. Agar (Modified Nakanishis Agar) . Jap. J. Bacterio/. 18, 10-11 , 387 - 391. Tellurite Medium Hoy/eMEDIO DE TELURITO DE HOYLEVéase Base de Medio de Hoyle (Hoyle Medium Base) CM83. Test Tube Caps IALUMINIUMITAPONES DE ALUMIN IO PARA TUBOS DE ENSAYO Se trata de ta pones cilrndricos de alum inio que se utilizan para proporcionar un.cierre bacteriológico a los tubos de ensayo, botellas y matraces. Para esta finalidad, los Tapones para Tub os de Ensayo Oxoid poseen muchas ventajas sobre los tapones de algodón convencionales. (i) Los tapones pueden utilizarse en repetidas ocasiones; (ii) No se pegan al cuello del recipiente, y se quit.3n y sustituyen fácilmente; (iii) No existen fibras que contaminen los medio~ (un factor de importancia considerable en los estudios de nu trición bacteriana y en los trabjaos sobre análisis microbiológicos).(iv) Los tapones se pue. en marcar fácilmente con un lá piz O rotulador que d resista el autoclavado;(v) Se asegura la esterilidad durante un largo período, au nque se pueden fijar los tapones al tubo con cinta adhesiva si fuera necesario. Los Tapones para Tubos de Ensayo Oxoid se suministran para tubos deensayo sin bordes conforme a normas britá nicas, de 12, 16, 19 Y 25 mm y el de30 mm que se ajusta a los frascos de 3 onzas, para muestras de leche.Además, John Moncrieff Ltd ., de Perth, Escoda, fabrica una gama dematraces cónicos "Monax" que pueden cerra rse con Jos Tapones Oxoid . Para facilitar la identificación , los Tapones de Tubos de Ensayo Oxoid sesuministran en los siguientes colores anodizados: Verde, azul, negro, plata, malva, oro, cobre, rojo . Es particularmente importante evitar el uso de ál cal is fuertes y abrasivoscuando se laven los tapones coloreados o no coloreados. Preferiblemente, sedeben lavar en agua ca liente que contenga una pequeña cantidad dedetergente no alcalino (p.e., "Taepol", "Quix", etc.) , se aclaran bien en aguaca liente, y se secan en una estufa a l 00- 120°C. 239
  22. 22. Ensoyo8 ollnlC08 han ostablocldo qu o 01 M odio paro I rlco rn onu tJ NII ) UtJmuy sa tisfactorio para el cultivo do r richomon8s vaginal/s, a partir deaislamientos primarios. Una combinac ión del cultivo d~ laboratorio y unexamen en porta proporciona la mejor probabilidad d~ establecer la presenciade este patógen o. El Medio para Tricomonas NQ 2 contie ne suero y antibiótico y, porconsiguiente, está preparado para su inoculación inmediata. Se puedealmacenar a 4° C durante varios meses sin deterioro.TECNICA1. Se inocula el medio directamente con un hisopo vaginal, raspado sub- prepucial, raspado uretral, liquido prostá:ico o el dépasito de una orina centrifugada ligeramente (Stenton, 1951).2. Se incuba a 34°C (Thomas, 1964).3. Se examina al microscopio cada 24 horas.4. So incuban los cultivos que, vistos al microscopio, hayan sido negativos, hasta cinco días.REFERENCIAS1. Bushby, S. R. M. Y Copp, F. C. (1955) The Antitrichomonal Activity 01 Amidonitrothiazoles . J. Pharm. Pharmacol. 7, 112 - 117.2. Squires, S. y McFadzean, J . A. (1962) Strain Sensitility of Trichomonas vagina/ís 10 Metronidazole . Brir. J. venero Dls. 38. 218 - 219.3. Stenton, P. (1957) The Isolation 01 Tríchomonss vagina/is. J . Med. Lab. Technol, 14(41. 228-230.4. Thomas, Patricia M . (1964) Sorne Laboratory Aspects 01 Trichomonss vaginal/s. J. Med. Lab. To chnol. 21 (1).48 - 50.!:ffPo!~RE~lffl~fs !~~[Jo AgarCódigo - Polvo CM277 Tabletas CM278FORMULA lab·lemco en polvo en gramos por litro 3,0 Extracto de levadura 3.0 Peptona 20.0 Cloruro de sodio 5.0 lactosa 10.0 Sacarosa 10.0 Dextrosa 1.0 Citrato férrico 0.3 Tiosulfato de sodio 0.3 Rojo de fenol q.S. Agar 12.0 pH 7.4 (aprox. 1INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 65 gramos en , litro de agua destilada y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se mezcla bien y se distribuye. Se esteriliza enel autoclave a 121 ° C durante 15 minutos. Se deja solidificar el medio en 251
  23. 23. posición inclinada para formar un fondo de aproximadamente una longitud de 2,5 cm. Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua dest iladA y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos. Se deja solidificar en pendie.f1tf! con un "(onda amplio . DESCRIPCION Se trata de un medio mixto para la diferenciación de enH~robacterias deacuerdo a su capacidad de fel·mentar la lactosa, sacaro:.;a y dextrosa , y producir sulfhídrico. No solamente rjesarrolla este medio fa mayoría de fa sfunciones del Agar con Hierro de 1~li ger sino que además su contenido ensacarosa permite el reconocimiento y la exclusión de especies de Paracolobactrum y Proteus. Estos organismos atócan la jactosa lentamente ono lo hacen en absoluto durante el paríodo de incubnci0n, pero pueden atacarfácil mento la sacarosa. Puesto qt.:e alguna~ , species de Proteus y otros aorganismos pueden dar reacciones s;mil<3res a las salmonelas y shigelas, esnecesario distinguirlas por su capacidad de hidroHzar la ureó. Por esta razón, elAgar de Tres Azúcares y Hierro se debe utili. ar en para lelo con Calrlo de Urea !o Agar de Urea . I Al principio, se consideró que este medio era intercambiable con el Mediode Kliger para la det.ección de la s enterobacterias producto ras de sulfhídrico .En la actualidad, se piense que el Agar de Tres Azúcares y Hi erro no esadecuado para la detección de la producción de .sulfhídrico por los organismosfermentadores de la sacarosa, tales como especies de f:itrooacfer y Proteus,en los que la fermentación de la saca rosa enmascara el indicador desulfhídrico en el medio (Bulmash y r-u lton, 19(4). Se recomienda el Agar de Tres Azú cares y Hierro para la identificaciónpresuntiva de las cJlon ias o subcultivos a partir de merl;of, en placa tales comoAgar para Salmonela y ShigeJa (S.S. Agar. CM99, Agar de Sulfito de Bismu to(Bismuth Sulphite Agarl CM201, Agar de Verde Brillante (BriUiant GreenAgarl CM263, Agar de lvIacConkey NQ 3 IMacCon<ey Agar No. 31 CM115 oAgar de Desoxycolato y Citrato (Hynes) (Oesoxycholate Citrate Agar, Hynes JCM227.TECNICALas técnicas americanas SP, describen en otra pane (American Public HealthAssociation , 1963, 1963; Edwards y Ewing, IOOZ y Society of AmericanBacteriologists, 19571 , sugiriérdose io siguiente como una alternativa sencilla:1. Se pica una colonia de la superficie de un meoio sel ectivo en placa y se extiende sobre una placa de Agar de MacConkey (MacConkey Agar) CM7. Se incuba durante 18 horas a 37°C y se inocul:1n dos tubos diferentes de medio a partir de una colonia aislada: (i) Agar de Tres Azúcares y Hierro - se ext iend3 sobre la pendiente y se pica el fondo. (ji) Base de Caldo de Urea (U rea BrothJ CM71 (con Soluciórl de Urea (U rea 4O%ISA401.2. Se incuba a 37°C.3. Se examina el Caldo de Urea después de :; nora :; y otra vez después de 18 horas de incubación. Se desechan los tubcs q·.le muestren una coloración roja o rosa, lo cual es debido a la hidrólisis de Id ureé! de las especies de Proteus o paracolon.4. Cuando no haya hidrólisis de la urea, se t,::<ami(lan 105 tubos de Agar de Tres Al.úcares y Hierro después de 18 h ()~as v 48 horas. l.as reacciones siguientes son típicas: 252
  24. 24. Organismo Fondo Pendiente SH,Aerobacter aerogenes AG AAerobacter cloacae AG AEscherichia coli AG AProteus vulgaris AG 1 +Proteus morganii A o AG NC o ALCShigella dysenteriae A NC o ALCShigella sonnei A NC o ALCSalmonella typhosa A NC o ALC +Salmonella paratyphi AG NC o ALCSalmonella schottmuelleri AG NC o ALC +Salmonella choleraesuis AG NC o ALCSalmonella enteritidis AG NC o ALC +Salmonella typhimurium AG NC o ALC +La nomenclatura está de acuerdo con la ¡a Ediciórl del " Bergey s Manual ofDetArminative Bacteriology" . AG ácido (amarjllo) y f ormación de gas A ácido (amarillo) NC sin cambio ALK alcalino (rojo) + (negro) sulfhídrico véase nota no sulfhídrico (no negro) en la página anterior.La prueba presunta obtenida de esta manera se puede con firmarserológicamente después de subcultivar el organismo <l partir del Agar de TresAzúcares y Hierro en Caldo Nutritivo NQ 2 (Nutriem Broth No. 2) CM67.REFERENCIAS1. American Public Health Association (19631 Oiagnostic Pror.edures and Reagents . 4th OO ., pp . 150 and 294 - 295. APHA Inc .. New York .2. American Public Heallh Association (1966) Recommended Melhods for the Microbiological ElCamination of Foods . 2nd OO., APHA Inc ., New York, pp. 158 and 185.3. Bulmash, J . M . Y Fulton. M . (1966) Discrepan! Tests for Hdrogen Sulphide . J. 8ect. 88(6), 1813.4. Edwards, P. R. Y Ewing, W . H. (1962) Identification of Enrerobecteris ceee Burgess Publishing Co., Minneapolis.5. $ociety of American Bacteriologists (1957) Manual of Microbiological Methods. McGraw· HiIIBook Co. Inc., London . Tryptone TRIPTONA Véase Peptones and Hydrolysates. Tryptone T TRIPTONA T 253
  25. 25. Urea40%UREA AL 40%CÓdigo SR20Para incluir en el Medio de Dos Tubos de Koh n No. 1 (Koh n s Two-TubeMedium No. 1) CM179, Base de Agar de Urea (Urea Agar Base) CM 53 , y Basede Caldo de Urea (Urea Broth Base) CM71. Esta solución esterilizada po rfiltración es particularmente útil puesto que la solución de urea no puede seresterilizada por la aplicaCión del calor. Se dispone en ampollas de Yí mi y de 5mI.!-!!:~A~qf1~E~aseCódigo - Polvo CM53 Tabletas CM54FORMULA Peptona en gramos p or litro 1.0 Dextrosa 1,0 Cloruro de sodio 5,0 Fosfato bisódico 1,2 Fosfato de potasio 0,8 Rojo de fenal 0,012 Ag. 15,0 pH 6,8 {aprox. 1INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden 2,4 9 en 95 mi de agua destilada y se hierve hastadisolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 115° C durante20 minutos. Se enfrfa hasta 50° C y se introducen 9sépticamente 5 mi de unasolución de urea estéril al 40 % (Urea 40 % ) SR20. Se mezcla bien , sedistribuye en cantidades de 10 mi en recipientes estériles y se deja que sesolidifique en posición inclinada.Tabletas: Se añade una tableta a 9,5 mi de agua destilada . Se esteriliza en elautoclave a 115° C durante 20 minutos. Se enfrfa hasta 55°C, aséptica mentese añaden 0,5 mi de una solución de urea estéril al 40% (Urea 40% ) SR20. Semez¡,;;la bien y se deja en posición inclinada .DESCRIPCIONSe recomienda la Base de Agar de Urea para la prepara ción del medio deChristensen (Christensen , 1946) para la detección ae los organismosdesdobladores de la urea tal como Proteus vulgaris. El medio de urea puedeutilizarse para la detección de la hidrólisis de la urea por otros micro-organismos incluyendo ciertos mi crococos y organismos paracolon.TECNICASe hace un in6culo fuerte con un cultivo puro del org anismo en cuestiónsobre la superticie de un agar de urea inclinado. La reacción se completageneralmente después de 3 a 5 horas a 37°C. Los organismos productores de 261
  26. 26. ureasa hidrolizan la urea para formar amonio, y el med io cambia a Jn co lorrojo pú rpu ra. Para prepa rar este medio cómodamente, la solució n de urea al 40% sesum inistra como una solución estéril en ampJlles .REFERENCIAS1. Christensen, W . B. 11946) Urea Decomposition as a means 01 Dif1erentiating Proteus and paracolon Cultures f rom each other and from Salm?nella and Shigella Tvpes. J. 8aet. 52, 461 - 466.Urea Broth BaseBASE DE CALDO DE UR~ACódigo CM71FORMU LA Peptona en gr8(705 por litro 1,0 Dex trosa 1,0 Fosfato bisódit: o 1,2 Fosfato de potasi o 0,8 Cloruro de sodi o 5,0 Rojo de f enol 0,004 pH 6,8 (ap rox. ) IINSTRUCCIONESSe añaden 0,9 9 a 95 mi de sgua desti lada. Se esteri liza en el autoclave a115°C durante 20 minutos . Se enfría a 55°C v se Infroducen aséptica mente 5mi de una solución de urea estéril 3140% (U rea 40%) SR20. Se mezcla bien yse distribuye en cantidades de 10 mi !Jn reci pien tes :!stériles.DESCRIPCIONSe trata de una modificacióri líquida del medio de Christensen (Maslen, 1952l.La modifi cación AS indicada paró la difere:lciación de los organismosproducto res de urea de lo s grupos SalmonellD y Shigella, du rante el examenord inario de los hisopos rect<~ J es y heces . Maslen obse.rvó Que, Rn el examenrutinario de las heces para Sa/manella y Shige/la, mu cha s co lonias nofermentadoras de la lactosó pertenecía n a los yrupos Proteu5 y pa racolon .Desarrolló este medio de forma que estos organismos pudie ran ser detectadosrápidamente y eliminad os, ahorrando du esta forma jlla ca ntidad considerablede tiempo y medios. M aslen expone que las ventujas :::lel meJio liquido son:(i) Se puede utilizar un pipeta Pasteur para in oc ular otros medios diag nósticos.(i i) Sobrevien e un rápido crecimiento y e~ posible discernir una reacció n claramente pnsitiva en 2 a 5 horas a 37°C.(iii) Es mas fác il aetectar cualqu ier co;¡taminaci6n durante el almacencje. 262
  27. 27. DESCRIPCIDNEl Agar con Rosa de Bengala y Cloramfenicol es un meaío selectivo para laenumeración de las levaduras y mohos a partir de una gran variedad demuestras alimenticias. El medio tiene un pH neutro y el cloramfenicol se utilizacomo agente selectivo para suprimir el crecimiento bacterian o. Variosinvestigadores han observado ventajas al utilizar medios a un pH neutro quecontengan antibi6ticos1.2 , Las colonias de mohos y levaduras captan el rosade Bengala y por ello se facilita la enumeración de las coloniéls pequeñas1. Elrosa de Bengala controla también el tamaño y la altura de las colonias demohos, tales como Neurospor8 y Rhizopus spp. De esta forma se evita que lascepas de crecimiento lento queden cubiertas por las especies de crecimientomás rápido, facilitándose el recuento de la placa. La elección de un medio adecuado para la enumeración de las levaduras ymoho:i depende en gran medida de la naturaleza de las muestras alimenticias ainvestigar y de los organismos que se suelen presentar en ellas4 • Serecomienda el Agar con Rosa de Bens;¡ala y Cloramfenicol para los alimentosproteináceos frescos cuya flora asocIada consta prinr.ipalmente de bacilosGram · ne~ativos , aunque debe advertirse que el cloramfenicol solo puede noser suficIente para inhibir el fondo bacteriano. Debido a la estabilidad delcloramfenicol, el Agar con Rosa de Bengala y Cloramfellicol resulta tambiénadecuado cuando se requiera una incubación prolongada a temperaturas maselevJ3das, de unos 35°C.TECNICASe añaden alícuotas de 1 mi de una serie de diluciones decimales adecuadas aplacas de Petr; vacías de 9 cm. Se utilizan dos placas para cada dilución. Acontinuación se añaden a cada placa un os 15 mi de medIo enfriado a 50°C. Semezcla con suavidad, girando las pla cas tres vueltas en sentido dextrógiro ytres vueltas en sentido levógiro. S€: deja que el medio se solidifique, se invierten las placas y se incubandurante cinco días a 22°C±2°. Se inspeccionan las placas y se cuentas las colonias de aquellas quecon tengan unas 5Q..l00 colonias. Se calcula el número de levaduras o mohos por 1 g o por 1 mi multiplicandoel número de colonias por el factor de dilución .REFERENCIAS1. Mossel, D. A. A. , Visser, M ., Mengerink. W. H. J . 11 962) Lab. Pract. 11 ,109- 112.2. Kobvrger, J. A. 11968) 8act. Proc. 13, A73.3. Jarvis, B. (1973) J . Appl. 8aa 36,723-727.4. Mossel. D. A. A " Vega, C. lo V Put, H. M . C. (1975) J. Appl. 8act. 39. 15-22.Sabouraud Dextrose AgarAGAR DE SABOURAUD CON OEXTROSACódigo - Polvo CM41 Tabletas CM42FORMULA Peptona micológica en gramos por litro 10 Dextrosa 40 Agar nO 1 15 pH 5.6 (arrox.) 215
  28. 28. INSTRUCCIONESPolvo: Se suspenden f.5 gramos en 1 litro de agua destila da y se hielve hastadisolver el medio por comp leto. Se esteriliziJ en el au~ocave a 121 °C durante15 minutos.Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeberdurante 5 minutos. Se esteril iza an el autoclave a 121"C du ran te 15 minutos.OESCRIPCIONEsta modificación del agar de Sabouraud (Carlier, 194€) e~, arropiad¡:¡ pa ra elcul tivo y diferenciac ión de los hongos. Carlier demostró que el medio proporciona unos result.::tdos fiables conMicrosporum audou¡m~ M. can/s, Tricophy tor. fTentagrophyte5, T. flavum, T.rubrum y Candida alb/cans. El Agar de SabouraucJ C:)i1 Dextrosa puedeutilizarse en lugar del Medio Americano Standurd de Hodges 1.1928), Loshongos mantienen sus aspectcs cu ltural es : ípicos, pudiéndose, porconsig uiente, identificarlos fácilmente de acue rdo n las caraterística smacros cóp icas típicas descritas por Sabouraud (191Oi.TECNICA El medio se utiliza frecuentem ente con antibióticos para el aislamien to de los hongos pa tógenos, a partir de material Que contenga gr~ n can tidad de otros hongos o bacterias. Georg y co ls. (1954) añadieron asépticam~nte 0,5 g. de cicloheximida, 20.000 unidades de penicilina 1 40 ,000 unidades de estreptomicina n cada litro de medio autoclavado y elfriado. Cryptococcusneoformans, Aspergl1lus fumiga tus y Allescheria b:Wdli son se nsibles a la cicloheximida; Actinomyces bovis y Nvcardia asteroides son !;ensibl es a la penic ilina y estreptomicina . Por otra parte, se puede añarlir 0,4 J de clo r:mfenicol y 0,5 9 deciclo heximida a cada litro de medio re cc n~t i tuido antes de autoclava r I Ajello, 1957). Los mismos microorganismos son sensibles a esta nueva combinación ,véase arriba. Williams Smith y Jones (1963) emplearon Agar de Sabnuraud con DextrosaOxoid que con tenía 20.0Cú unidades de pe nicilina y 0,04 g de neomicina porlitro, para el recuento de levadura5 en el tracto alimen ta rio del cerdo . El Agar de Sabouraud con Dextrosa Oxoid puede utilizarse también comobase para el medio de Pagano-Levin (Pagano y cols. 1957 - 58) para elaislamiento de Gandida albicans. Se añ ade O, 1 g de cloruro de trifeniltet razolio(como solución esterilizada por filtración) a cada litro de med io fundido,autoclava do, enfriado a 5!) OC. E-I medio se hace generalm~nte inhibitori o parala mayoría de los hongos no patógenos V bacterias al añ adi r los antibióticoscomo se ha descrito arriba . Después de la incubación d ura n~ e 3 días a 25°C,las colonias de Gandida albir.afls qOJedan si n pigmentar o rosa páclidú mientrasque otras especies de Gandida y otrO$ hongos f orma n colonia s rosa oscuroo rojas. La técnica de Pag ano-Lev in ha sido inv(;stigada por Kutscher ycols (1959), Sinski (1969), rlidley (1960) y va rios otros: la pru~ba es suficientepara fi nes de cribado, pero se deben utilizar otros criterios. diagnósticos pa ra laidentificación de Gandida albicans. 216
  29. 29. REFERENCIAS 1. Ajello, libero 119571 Cultural Methods for Human Pathogenic Fungi J. Chron. Dis. 5(51. 545-5!;1. 2. Carlier, Gwendoline L M. 119481 Dri,. J. Dem. Syph. 60. 61 - 63. 3. GeO(ge, Lucille 1<:. , Ajello. L. y Papageorge, Calomira (1954) J. Lab. elin. MfJd. 44131, 422 - 428. 4. Hodges, R. S . 11928) Arch. Derm. Syph .• New York, 18, 852. 5. Kutscher, A . H. , Saguin , l. , Zegarelli, E. V., Aankow, A. M. , Mercadante, J. y Piro, J. O. (1959a1 Growth Charactetistics 01 Cllndids a/bicans on Pagano-Levin Cultu re Medium J ¡nvest, Darm. 33.41 - 47. 6. Kutscher, A. H., Saguin, l., Zegarelli, E. V., Rankow, R. M., Campbell, .J. B. Y Mercadante, J. 11959b1 Pagano-levin Culture Medium lor Differentiation of Candida Il/bicans American Type CultlJrt! Collection Studies, 1. Antiobiotics and Chemotherapy 9( 11" 649 - 659. 7. Pagano, J., levin, J. G. y Treja, W . 11957 -58) Oisgnostic Medium lar Oifferentialion of Species 01 Candida Antibiotics Annual 1957 - 58, 137 - 143. 8. Ridley, M. F. I1960J A Comparison 01 Methods lar Identification of Candida albicans Ausrralian J. Dermar. 5(4), 209 - 213. 9. Sabouraud, R. (1910) Les Teignes, Masson, Paris.10. Sinski, J . T . 11960) The EHectiveness 01 Pagano-Levin Medium for the Oetection and Identification 01 Candida albicans in Clinical Specimens J. invest. DeJ"mllt. 35(3), 131- 133.l1.Willians Smith, H. y Jones, J. E. T. (1963) Observalions on tilo Alimentary Trael and ils Bacterial Flora in Healthy and Diseased Pigs J. Path. Sect. 86 (2), 387 - 412.Sabouraud Liquid MediumMEDIO LIQUIDO DE SABOURAUDCódigo - Polvo CM/47 Tablet.s CM/48fORMULA Digerido pancréatico de caseina en gramos por litro 5 Digerido péptico de carne fresca 5 Dextrosa 20 pH 5,7 (aprox .)INSTRUCCIONESPolvo: Se añaden 30 gramos a 1 litro de agua destilada. Se mezcla bien, sedistribuye en los recipientes definitivos y se esteriliza en el autoclave a 121°Cdurante 15 minutos.Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua destilada y se esteriliza en elautoclave a 121°C durante 15 minutos.DESCRIPCIONEl Medio Líquido de Sabouraud sirve para probar la esterilidad micológica deacuerdo con el medio descrito en I~ Farmacopea de EE.UU. (1965 ) para ladeterminación de la actividad tungistática de 105 productos farmacéuticospara evitar pruebas de esterilidad falsas . También se recomienda para elcultivo de hongos. levaduras y bacterias acidofílicas . 217

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