Animales Transgénicos como
herramientas de trabajo
Daniel Pérez-Witzke, M.Sc.
Laboratorio de Patología celular y molecular...
Mecanismos de recombinación
en Mamíferos
Técnicas para edición de
genomas
Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)
Modelos de enfermedad
Animales Knockout
Autoinmunidad TH2,
Modelo
Lupus eritematoso sistémico
Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus.
n engl j med...
Sistema Cre-LoxP
Biología de la proteína HSP-70 en la
fisiopatología de la hipertensión
arterial esencial
Daniel Perez-Witzke, MSc.
Próximo paso: Noquear HPS-70
Inhibición la expresión de los
genes HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
(knockout)
Floxed HSP70.1
HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre/Ksp-Cadherin
promotor renal
GFP (doble transgenico)
[Rata transgenic...
Floxed HSP70.1
HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre-mER
(mutant Estrogen Receptor)
(doble transgenico)
[Rata transgenica...
2. Sistema Cre-LoxP mediante
infección con virus AAV-2-Cre
(knockout condicional)
Floxed HSP70.1 HSP70.3
genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ L
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Promotor
L
...
Sobreexpresión de los genes
HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
Floxed HSP70.1 HSP70.3
genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ L
o
x
P
Promotor
Wi...
Gracias
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Curso: Ingeniería Genética en Biomedicina. Maestría en Inmunología, FEC-LUZ

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    1. 1. Animales Transgénicos como herramientas de trabajo Daniel Pérez-Witzke, M.Sc. Laboratorio de Patología celular y molecular, Centro de Medicina Experimental, IVIC
    2. 2. Mecanismos de recombinación en Mamíferos
    3. 3. Técnicas para edición de genomas
    4. 4. Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)
    5. 5. Modelos de enfermedad Animales Knockout
    6. 6. Autoinmunidad TH2, Modelo Lupus eritematoso sistémico Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus. n engl j med 363;11
    7. 7. Sistema Cre-LoxP
    8. 8. Biología de la proteína HSP-70 en la fisiopatología de la hipertensión arterial esencial Daniel Perez-Witzke, MSc.
    9. 9. Próximo paso: Noquear HPS-70
    10. 10. Inhibición la expresión de los genes HSP70.1, HSP70.3 1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces (knockout)
    11. 11. Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes [Rata Transgenica C] Cre/Ksp-Cadherin promotor renal GFP (doble transgenico) [Rata transgenica A] Células Renales5´ Ksp- Cadherin Cre Recombinasa 3´ 3´ 5´ 5´ L o x P Promotor L o x P Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Enzima Cre Transcripción/ Traducción Recombinación 5´ LoxP Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Promotor LoxP dsDNA HSP70 -/- (knockout) Ratas A-C homozigotos de la F3 (triple transgenico)
    12. 12. Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes [Rata Transgenica C] Cre-mER (mutant Estrogen Receptor) (doble transgenico) [Rata transgenica B] Células Somáticas 5´ mER Cre Recombinasa 3´ 3´ 5´ 5´ L o x P Promotor L o x P Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Enzima Cre Transcripción/ Traducción Recombinación 5´ LoxP Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Promotor LoxP dsDNA HSP70 -/- (knockout) Tamoxifeno Ratas B-C homozigotos de la F3
    13. 13. 2. Sistema Cre-LoxP mediante infección con virus AAV-2-Cre (knockout condicional)
    14. 14. Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes [Rata Transgenica C] Células Renales 3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´ 5´ L o x P Promotor L o x P Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Enzima Cre Recombinación 5´ LoxP Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Promotor LoxP dsDNA HSP70 -/- (knockout) AAV- 2/Cre Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´ Traducción Infección con virus con tropismo por células renales ssDNA
    15. 15. Sobreexpresión de los genes HSP70.1, HSP70.3 1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
    16. 16. Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes [Rata Transgenica C] Células Renales 3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´ 5´ L o x P Promotor Wildtype (Wt) L o x P Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ Enzima Cre Recombinación Homologa AAV- 2/Cre Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´ Traducción ssDNA PromotorβA LoxP dsDNA LoxP 5´ L o x P Promotor β-Actina L o x P Exón 1 HSP70.1 HSP70.3 3´ 3´ 5´ PromotorβA LoxP dsDNA LoxP Promotor Wt LoxP dsDNA LoxP
    17. 17. Gracias

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