Hacer laboratorios en Colombia - cultivo celular

Luz Esmeralda Murcia Urrego
Bacterióloga
Administradora en salud
Verificadora de condiciones de habilitación
Auditora ISO 9000 HACCP y BPM
l-murcia@javeriana.edu.co

CULTIVO CELULAR

CULTIVO CELULAR
CONTEXTO
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Cultivo celular
Un poco de historia
Ventajas y desventajas
¿Qué se investiga?
Terminología
Tipos de cultivo celular
Usos

LABORATORIO DE CULTIVO CELULAR
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Planeación del laboratorio
Sistema Único de Habilitación
Capacidad tecnológica y científica
Recurso humano
• Programa de entrenamiento
Infraestructura – Instalaciones físicas - Mantenimiento
Dotación - Mantenimiento
Equipos
Instrumentos
Medicamentos y dispositivos médicos
Insumos y reactivos

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011

CONTEXTO


CULTIVO CELULAR
Cultivo celular abarca un conjunto de
técnicas de laboratorio que permiten
manipular células, tejidos y órganos en
un ambiente artificial controlando su
proliferación, mantenimiento, y/o
funcionalidad.
El crecimiento celular in vitro ha sido posible
gracias al descubrimiento de los
antibióticos, la tripsina y a la definición
química de los medios de cultivo
realizados durante la primera mitad del
siglo pasado, base vital para la escala
industrial comercial desarrollada a partir
de los años 60 gracias a introducción de
nuevas tecnologías, a los equipos, que
mejoraron las técnicas y herramientas
del laboratorio e igualmente las
aplicaciones biotecnológicas de esta
útil herramienta.
Adaptado de: Ryan John A. Introduction to animal cell culture – Technical bulletin. Publicado por Corning incorporated.

UN POCO DE HISTORIA
Harrison 1907
• Fibras nerviosas embrionarias de rana.
Rous and Jones 1916
• Explantación de células.

Fisher, Carrel, Ebeling 1923-5
• Pases celulares.
Earle, Sanford, Enders 1948
• Fibroblastos continuos L929.

Enders 1949
• Crecimiento de virus en cultivo celular.
Gey 1952
• HeLa

Adaptado de: Freshney I. Cell culture of mamalian cels. Editorial Willey. 2006.

UN POCO DE HISTORIA
Dulbeco 1952
• Monocapas para plaqueo viral.
Morgan 1950, Parker 1954, Eagle 1955-9, Waymouth 1959, Ham 196365
• Medios de cultivo celular.

Kleinsmith & Pierce 1964
• Pluripotencialidad de las células madre embrionarias.
Kohler & Milstein 1975
• Hibridomas y anticuerpos monoclonales.

Illmense & Mintz 1976
• Totipotencialidad de células madre embrionarias.
Gospodarovicz 1978, Folkman & Moscona 1978,Reid & Rojkind, 1979
• Control de forma y crecimiento en matrices.


UN POCO DE HISTORIA
Darnell 1982
• Regulación en la expresión de los genes.
Peel & Ham 1980, Hammond et al 1984, Knedler & Ham 1987
• Desarrollo de líneas celulares especializadas.

Bell et all 1983
• Cultivos para reconstrucción de piel.
Butler 1991
• Cultivo celular escala industrial de células transfectadas para producción biofarmaceutica.

Aigner et all 1998
• Ingeniería del tejido cartilaginoso.
Dennis et all 2000
• Genómica, proteómica, deficiencias genéticas y expresión de errores.


• Control fisico-químico y
fisiológico del
microambiente.
• Caracterización y
homogeneidad de la línea.
• Economía, escala y
mecanización.
• Reducción de modelos
animales.


Lo malo

Lo bueno

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

• Experiencia.
• Control microbiológico del
microambiente.
• Cantidad, calidad y costos.
• Inestabilidad genética y
fenotípica.
• Identificación de tipo
celular.

¿QUE SE INVESTIGA?
Productos
Flujo
Actividad
Intracelular

Ingeniería de
tejidos

Genómica

Célula

Interacciones

Farmacología

Inmunología

Toxicología


TERMINOLOGÍA

Cultivo de
órganos

Cultivo de
tejidos


Cultivo
celular

Cultivo
histotípico

Cultivo
organotípico

TIPOS DE CULTIVO CELULAR
•Se obtienen
directamente de un
tejido disgregado.
•Esplenocitos
•Hepatocitos

ORIGEN

Subcultivos o
secundarios

Primarios
•Anclaje independientes
•Linfocitos
•U937
•Rají

ANCLAJE

Cultivo de
órganos

OTROS

• Fragmentos de
tejido
• Interfase L-S

Explante


•Anclaje dependientes

•Hepatocitos
•OMK
•HeLa

Suspensión
• Órganos de
embriones
• Fragmentos de
tejido adulto
• Interfase G-L

•Provienen de cultivos
contínuos tipo linajes
comerciales o
hibridomas.
•B-52
•P3 X63 Ag8.653

Monocapa
•
•
•
•

Cultivo primario
Línea celular
Tejido disgregado
Interfase L-S

Cultivo
celular

• Diferentes células
son co-cultivadas
con o sin matriz.

Organotípico

• Vacunas
• rADN
• Interferón
• Anticuerpos
monoclonales


Células como
productos

Productos de células

USOS DEL CULTIVO CELULAR

• Proliferación

ex-vivo

• Cultivo de tejidos
• Terapia génica
• Cultivo de órganos

• Diagnóstico

USOS DEL CULTIVO CELULAR
AcMo
Anti β
tubulina

AcMo
Anti TNF α

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011

Aplicación de la terapia génica en
tratamiento contra el cáncer.

LABORATORIO DE CULTIVO CELULAR


PLANEACION DEL LABORATORIO

Recepción

Administración

Almacén

Toma de
muestras

Equipos
reactivos y
material

Lavado
preparación y
esterilización


SISTEMA UNICO DE HABILITACION

Capacidad tecnológica y científica

Suficiencia patrimonial y financiera

Capacidad técnico administrativa

Decreto 1011 y Resolución 1043 del Ministerio de Protección Sooial.

CAPACIDAD TECNOLÓGICA Y CIENTÍFICA
Recurso humano
Infraestructura – Instalaciones físicas – Mantenimiento
Dotación – Mantenimiento
Medicamentos y Dispositivos médicos – gestión de medicamentos y dispositivos
médicos
Procesos prioritarios asistenciales
Historia clínica y registros asistenciales
Interdependencia de servicios
Referencia y contrareferencia de pacientes
Seguimiento a riesgos en la prestación de servicios
Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.

RECURSO HUMANO
COMPETENCIAS
Saber
• Formación
• Nivel de desempeño

Hacer
•
•
•
•

Desempeño
Cantidad
Vinculación
Prestación

Ser
• Comportamentales
• Actitudinales

IDONEIDAD
Eficiencia

Efectividad

Eficacia

ENTORNO
Identificación

Normalización

Evaluación

RECURSO HUMANO
Selección del personal

Inducción, capacitación
y entrenamiento del
personal

Perfil de cargos

Suficiencia

Forma de vinculación

Verificación de título

Hojas de vida con
soportes

Análisis de hoja de vida

Autorización para
ejercer

Certificados

Convenios docente –
asistencial

Procedimiento de
supervisión de personal
en entrenamiento

Carnet de
radioprotección y
dosímetro.

PROGRAMA DE ENTRENAMIENTO
Básico
• Biología celular* - Técnica aséptica - Seguridad - Pipeteo –
Preparación de medios, soluciones y colorantes - Conteo de
células por hemocitómetro - Subcultivo de línea celular en
suspensión – subcultivo de células adherentes – Calidad.
Matriz

Temperatura

Intermedio
Concentración

• Cultivos primarios – criopreservación y descongelamiento –
detección de mycoplasma DAPI PCR - Clonación – ensayos
de citotoxicidad - caracterización de línea celular – estudio
cromosómico - isoenzimas – DNA fingerprint – citometría de
flujo.
Biología celular*

Medio
gaseoso

Medio
líquido

•Adhesión celular: CAMs , cadherinas , integrinas, proteglicanos
transmembranales.
•Uniones intercelulares: Desmosomas, AMPc.
•Matriz extracelular : Lámina basal
(colágeno, fibronectina, hialuron, proteoglicanos)
•Citoesqueleto y motilidad celular:Actina , citoqueratina, microtubulos.
•Proliferación : Ciclo celular G1, S, G2, M, control de proliferación
EGF, PDGF, ciclinas, TGFβ.
•Diferenciación y mantenimiento Matrigel, hidrocortisona, retinoides.
•Dediferenciación
•Señalización celular: Endocrina, paracrina, homocrina, autocrina.
•Energía y metabolismo


Técnica aséptica
• Código que hace parte de las buenas
prácticas de laboratorio BPL compuesto por
estándares oro cuyo objetivo es evitar la
contaminación microbiana y asegurar la
conservación de las condiciones estériles
del producto.
• Se aprende en la práctica y apela al sentido
común.
• Involucra control de
infraestructura, ambiente, insumos, equipos
, reactivos y personal científico y no
científico.
• Se deben institucionalizar por medio de
guías, protocolos, procedimientos
operativos estandarizados o normalizados
inmersos en un sistema de calidad.

Resolución
2183 del 2004

Resolución
4816 del 2008

Decreto 2676
del 2000

Resolución
1995 de 1999

Seguridad
Decreto 1011 del 2006
Marco normativo
colombiano


REINO UNIDO
Magnament of Health and Safety at Work
Regulations

ESTADOS UNIDOS
OccupationalSafety and
Health Administration OSHA
National Institutes of
Health -NIH
CDC – BMBL
U.S. Nuclear Regulatory
Commission

Health and Safety Commission - Provision
and use of work equipment – PUWER
Health and Safety Commission - Control of
substances harzadous to health
Safe working and the prevention of infection
in clinical laboratories Model reles for staff
and visitors. A guide to the genetically
modified organisms
Work with ionision radiation

EUROPA
Management of Health and
Safety at Work Directive
Provision and use of Work
Equipment Directive
Council Directive on the
protection of the health and
safety workers from the risk
related to chemical agents an
work
Directive on the Protection of
workers fom risk Related to
exposure to biological agents at
work

Seguridad
Marco
Internacional


Infraestructura
Operador
Equipos
Riesgo químico
Riesgo biológico y
cortopunzante

Riesgos por
radiaciones

• Inestabilidad del terreno construído, incendio inundación, sismos, delincuencia.
• Plan de contingencia, comunicaciones de emergencia, bomberos, policía.

• Experiencia, entrenamiento
• Riesgos ocupacionales y de salud. Operador: SGSSS EPS y ARP
Responsabilidad institucional. PPE.
• Riesgos térmicos: Autoclaves, hornos, planchas, congeladores, cilindros y
mecheros.
• Riesgos mecánicos y eléctricos: Instalación
conexión, polo, sobrecarga, desbalance.
• PPE, POE, señalización, mantenimiento. Tecnovigilancia. Responsabilidad de la
dirección.
• Detergentes, clorados, DMSO, mutagénicos y cancerogénicos.
• Riesgos gaseosos y líquidos. CO2 escaso N2 congelamiento, asfixia, explosión. O2
Combustión.
• PPE Guantes látex, silicona, nitrilo. Fichas técnicas. POE, bomberos.

• Manipulación genética, propagación de virus, trabajo con biopsias. Material
de vidrio y cortopunzante
• POE líneas séricas base o bancos.

• 3H radiación ionizante tipo β por malas técnicas crean aerosoles que
son ingeridos.125 I 131 I, 51 Cr radiación ionizante tipo β γ .Altas fuentes 60
Co, Rayos X , UV producen quemaduras.
• POE, PPE Plomado de 2mm, decaimiento, registro.

CAPACIDAD TECNOLÓGICA Y CIENTÍFICA
Recurso humano
Infraestructura – Instalaciones físicas – Mantenimiento
Dotación – Mantenimiento
Medicamentos y Dispositivos médicos – gestión de medicamentos y dispositivos
médicos
Procesos prioritarios asistenciales
Historia clínica y registros asistenciales
Interdependencia de servicios
Referencia y contrareferencia de pacientes
Seguimiento a riesgos en la prestación de servicios

INFRAESTRUCTURA - INSTALACIONES FÍSICAS


Legislación
•Decreto 1011 de 2006
•Resolución 1043 de 2006, Anexo Técnico No.1 y No. 2
•Resolución 4445 de 1996
•Resolución 5042 de 1996 (M)
•Resolución 2680, Anexo Técnico No. 1 y No. 2
•Resolución 3763, Anexo Técnico No 1
•Ley 400 de 1998
•Ley 361 de 1997
•Ley 9 de 1979
•Decreto 2105 de 1983
•UNE 100-030-94
•NTC 1500 Código colombiano de fontanería
•NTC 2050 Código eléctrico colombiano
•Reglamento técnico de instalaciones eléctricas.RETIE
•Decreto 2676 del 200
•Licencia de vertimientos? del 2010.

INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FISICAS
INFRAESTRUCTURA E INTALACIONES
Uso
exclusivo de
una IPS
•Reporte de domicilio.

Garantiza

Tener

•Agua
•Energía
•Comunicaciones
•Manejo y evacuación
de residuos

•Impermeables
•Sólidos
•Fácil limpieza
•Liso - drenajes
•Resistente a factores
mediomabientales

Manual de
bioseguridad

Alta
complejidad
•Fuente de energía
de emergencia

Plan de gestión de
residuos
hospitalarios y
similares

Aseo
•Pocetas
•Depósito de residuos
•Depósito de
cadáveres
•PGRHS
•Tanques de 24 h.
•Lavapatos

Cumplir
•Ventilación
•Iluminación
•Distribución
•Mantenimiento.

Plan de
mantenimiento de
infraestructura e
instalación física


PEQUEÑO

MEDIANO

INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FÍSICAS Y MANTENIMIENTO

INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FÍSICAS

Tomado de: Vélez R. Riesgo en infraestructura hospitalaria. Presentación Universidad del Bosque. 2010.


Tomado de: Construcciones de salud. N°2. Legis. 2010

DOTACION - MANTENIMIENTO


DOTACIÓN - MANTENIMIENTO
EQUIPOS
Condiciones

Mantenimiento

Tener

• Indispensables
• Almacenamiento adecuados
• Técnicas de calidad
• Licencia de radiación
ionizante

• Programa de mantenimiento
preventivo
• Calibraciones
• Corriente
• Hoja de vida con
mantenimiento correctivo
• Profesional o técnico externo

• Equipo de reanimación uno
por cada piso según servicios

Programa de
mantenimiento
preventivo de
equipos

Garantizar
• Dotación por cada piso

Hoja de vida y
mantenimiento
correctivo de
equipos


EQUIPOS
Cabina de flujo laminar Clase II

Autoclave

• Mínimo de 1.20, silenciosa, ergonómica, fácil
limpieza.

•Bench top autoprogramable y cierre de seguridad.

Bomba de vacío

Horno de secado – esterilizado

Microscopio Invertido

Incubadora

• Imágenes digitales.

• Monitoreo automáticos de CO2 % de
Humedad y Temperatura.

Centrífuga

Termociclador

• 80-100 G

•Perfil de DNA, test mycoplasma

Refrigerador y congelador

Equipo de agua

• 4°C -20°C -70°C

• Desionizada
• Ultrapura

Computador

Citómetro de flujo

• Sistema de información

Imágenes tomadas de: Catálogo Milipore, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo New Brunswick, Ian Freshney y

INSTRUMENTOS
Balanza

Agitador magnético térmico

• Electrónica - analítica de tare automático.

• Usar a menos de 50 rpm

pHmetro

Pipeteador
• Sistema de información
• Buenas prácticas de laboratorio

Conductómetro

Micropipetas

• Control de calidad de soluciones.

• Análisis celular multiparamétrico.

Termohigrómetro

Repetidora

Hemocitómetro

Multicanal

• Newbauer línea brillante

Dispensador

Homogenizador de tejidos

Imágenes tomadas de: Catálogo Duran, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo Brand.

MEDICAMENTOS Y DISPOSITIVOS MÉDICOS

.

MEDICAMENTOS Y DISPOSITIVOS MÉDICOS
INSUMOS Y REACTIVOS
Listado

Condiciones
• Procesos para el manejo de
dispositivos médicos y
reactivos
• Cumplir con condiciones de
almacenamiento
• Cumplir con condiciones de
entrega

•
•
•
•
•
•
•

Forma farmacéutica
Principio activo
Concentración
Lote
Fecha de vencimiento
Registro sanitario INVIMA
Presentación comercial

Listado
Kardex de
existencias

Garantizar

Verificar

Procedimiento
de adquisición

• Registro INVIMA
• Programa de
farmacovigilancia
• Programa de tecnovigilancia

Procedimiento
de
Tecnovigilanci
a

•
•
•
•
•
•
•

Temperatura
Humedad
Ventilación
Segregación
Seguridad
No vencido
No reuso

Uso y reuso
de dispositivos


INSUMOS Y REACTIVOS
Plásticos

Buffer

• Probetas, tubos, cajas T, cajas de
pozos.

•PBS, DPBS.

Vidrios

Medios de cultivo

• Pipetas, erlenmeyer. beackers
tubos, embudos, frascos.

•MEM, DMEM, RPMI 1640, TC100.

Filtros

Colorantes

• Unidades de filtración, membranas
individuales, microfiltros jeringas.
HEPA.

•Azul de tripán, giemsa, Gram.

Papeles

Aditivos

• Craft, algodón, gasa, parafilm cintas.

•Insulina, piruvato, L-glutamina, HEPES, bicarbonato
de sodio, glucosa, aminoácidos.

Aseo

Disgregantes

• Churruscos, jabones, alcohol, osyl, gua
rdianes, toallas de papel, bolsas.

•Tripsina, EDTA.

Imágenes tomadas de: Catálogo Hyclone, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo Duran.

PROCESOS PRIORITARIOS ASISTENCIALES

PROCESOS PRIORITARIOS ASISTENCIALES
DOCUMENTACION
Condiciones
•
•
•
•

Acciones para divulgar
Responsables de ejecución y control
Medicina basada en la evidencia
Coordinación esterilización –comité de
infecciones – programa de aseo.

Definición y
documentación
• Procesos, procedimientos, guías, protocolos
• Procesos de auditoría para el mejoramiento de la
calidad de la atención en salud
• Seguimiento a riesgos

Garantizar
• Divulgación
• Control

• Procedimiento de admisión y egreso de pacientes

Control de
calidad

Manual de
bioseguridad

Manual de
procedimiento
s

Manual manejo
de desechos

Protocolo de
limpieza y
desinfección

Manual de toma
transporte y
remisión de
muestras

Buenas
prácticas de
esterilización

Uso y reuso de
dispositivos
médicos


HISTORIA CLINICA Y REGISTROS ASISTENCIALES
HISTORIA CLINICA
Condiciones
•
•
•
•

Manejo adecuado
Consigna registros clínicos
Resolución 1995 de 1999
Archivo activo y muerto

Garantizar

Criterios
• Única historia
• Procedimientos definidos para
circulación desde y hacia el archivo
• Adecuadamente identificada
• Consentimiento informado

•
•
•
•

Confidencialidad
Custodia
Conservación integral
Mecanismos de seguridad

Control de
calidad

Manual de
bioseguridad

Manual de
procedimiento
s

Registros de
temperaturas

Registros de
pacientes

Registro de
entrega de
muestras

Reporte de
resultados

Control de
calidad interno
y externo


HISTORIA CLINICA Y REGISTROS ASISTENCIALES

INTERDEPENDENCIA DE SERVICIOS
SERVICIOS
Condiciones
• Soporte o apoyo de otros servicios o
productos tipo asistencial o
administrativo

Criterios
• Servicio de esterilización propio o
contratado.
• Transporte asistencial cuenta con red de
comunicaciones.
• Transplantes*

Garantizar
• Realización oportuna de
actividades, procedimientos e
intervenciones.

Manual de
esterilización


REFERENCIA Y CONTRAREFERENCIA DE PACIENTES

REFERENCIA Y CONTRAREFERENCIA
Condiciones

Criterios

• Tener definidos
guías, manuales, procedimientos para la
remisión urgente de pacientes.

• Destinos y flujos de pacientes
• Equipos de comunicaciones
• Disponibilidad de medios de transporte

Garantizar
• Realización oportuna de
actividades, procedimientos e
intervenciones.

Guía de referencia y
contrareferencia


SEGUIMIENTO A RIESGOS EN LA PRESTACIÓN DE SERVICIOS

SEGUIMIENTO A RIESGOS EN LA PRESTACIÓN DE SERVICIOS

SEGUIMIENTO A RIESGOS
Condiciones
• Proteger a los usuarios de los
principales riesgos mediante procesos
obligatorios para evaluación y control.

Guía de manejo
de productos
biológicos

Otros

Criterios
•Evaluación y seguimiento de riesgos Mortalidad
intrahospitalaria, infecciones
intrahospitalarias, complicaciones quirúrgicas
inmediatas, complicaciones
anestésicas, complicaciones terapéuticas
especialmente medicamentosas y
transfusionales.

Bioseguridad

Limpieza y
desinfección

• Operacionalización del indicador:
Estandarización de la fuente, ficha
técnica y responsables.
• Evaluación y seguimiento del comité
técnico científico a los riesgos.

Comité técnico
científico


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