lkck ooovkkbmmb

1. Medios de cultivo y nutrición bacteriana

2. ¿Qué son?
Un medio de cultivo es una técnica
de laboratorio que consta de una
solución que contiene los nutrientes
necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y
temperatura, el crecimiento
microorganismos, células, tejidos
vegetales o incluso pequeñas
plantas.

3. ¿Cual es su función?
hacer crecer un microorganismo
como bacterias, hongos, aunque
también se utilizan para el
crecimiento de células o tejidos.

4. Clasificación
• General.- Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos.
• Selectivo.-Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos, inhibiendo determinado el desarrollo de los demás.
• Enriquecimiento.- Son aquellos que favorecen el crecimiento de un
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento de los demás.
• Transporte.- son aquellos que nos permiten transportar la muestra a cualquier
lado
• Diferenciales.- Son aquellos que favorecen el crecimiento de un
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento de los demás.

5. Tipos de cultivo
• Lowenstein-Jensen se utiliza para el cultivo de micobacterias
• Sangre en un medio de enriquecido
• Chocolate en un medio de enriquecimiento
• MacConkey es un medio de cultivo que se utiliza para bacterias bacilos gran negativas(G-)
• Agar Sabouraud el agar Sabouraud es un medio de enriquecimiento y aislamiento de distintas especies
de hongos, levaduras y mohos. Por lo tanto, es útil cuando no queremos detectar bacterias sino este
tipo de microorganismos, sean patógenos o no.
• agar EMBEl es un medio de cultivo sólido muy útil para el aislamiento de enterobacterias, es decir,
aquellas que habitan de forma natural nuestros intestinos pero que, ante determinadas situaciones,
pueden pasar a comportarse como patógenos.
• Agar Vogel-Johnson el agar Vogel-Johnson es un medio de cultivo sólido diseñado para el aislamiento
de “Staphylococcus aureus”, una bacteria que puede causar muchos tipos de infecciones distintas,
desde enfermedades de la piel (es lo más común) hasta infecciones óseas, pasando por neumonías,
bacteriemias, endocarditis (infección del corazón) e intoxicaciones alimentarias. Inhibe el crecimiento
de todas las gram negativas y el de algunas gram positivas.

6. Tipos de cultivo en el
laboratorio
• Urocultivo
• Coprocultivo
• Espermocultivo
• Cultivo otico
• Cultivo oftálmico
• Cultivo de liquido sinovial
• Cultivo de líquidos serosos del cuerpo
• Cultivo de liquido cefalorraquídeo (LCR)
• Cultivo de exudado faríngeo
• Cultivo de exudado vaginal
• Hemocultivo

7. Tipos de agar en donde se cultivan los diferentes
cultivos

8. • Urocultivo:
1. Agar-sangre
2. MacConkey
3. Chocolate
• Coprocultivo:
1. Lactosa-bilis (MacConkey, S.S., Wilson y Blair)
2. Agar-sangre.
3. Agar de Russell.
4. Citrato de Koser.
5. Agar con urea.

9. • Cultivo otico:
1. MacConkey
2. Agar-sangre
3. Agar-chocolate
• Cultivo de liquido seroso:
1. MacConkey
2. Agar-sangre
3. Chocolate
4. tubo de medio de Robertson a base de carne.

10. • Cultivo de LCR:
1. Lowenstein-Jensen
2. Medio de Sabouraud
3. Agar-sangre
• Exudado vaginal:
1. MacConkey
2. Agar-sangre
3. Medio de carne
4. Medio de Robertson
5. Agar-chocolate

11. • Exudado faríngeo:
1. Agar-sangre
2. chocolate

12. PRUEBAS DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS

13. El laboratorio de microbiología clínica puede proporcionar
una identificación preliminar o definitiva de los
microorganismos basándose en 5 fases:
1. El examen microscópico de las muestras.
2. El estudio del cultivo y características bioquímicas de los
microorganismos aislados (cultivos puros)
3. Pruebas inmunológicas que detectan antígeno o
anticuerpo, esto acorde a la aglutinación antígeno-
anticuerpo.
4. Tipificación con bacteriófagos.
5. Métodos moleculares.

14. examen microscópico
de las muestras.
Esta técnica se pueden estudiar
preparaciones en fresco, fijadas por calor o
con fijación química.
Aquí se puede mejorar la visualización con
contraste de fases o campo oscuro. Esta
ultima para la detección de espiroquetas en
lesiones cutáneas asociadas a la sífilis
temprana, o en el LCR y orina de personas
con leptospirosis temprana.
También se puede emplear el microscopio de
fluorescencia para identificar ciertos
microorganismos (mycobacterium
tuberculosis). Esto después de teñirlos con
fluorocromos.

15. El estudio del cultivo y
características bioquímicas de
los microorganismos aislados
Habitualmente se han identificado los
microorganismos por particularidades patrones de
cultivo y características bioquímicas.
ESTAS CARACTERISTICAS VARIAN SEGÚN EL
MICROORGANISMO.
• Virus
• Rickettsias
• Clamidias
• Micoplasmas
• Bacterias G+, G-
• Hongos (levaduras, mohos)
• Parásitos (protozoos, helmintos)

16. Técnicas bioquímicas de microbiología
• A) Prueba del rojo de metileno.
• B) Reacción de Voges-Proskauer.
• C) Hidrolisis del almidón.
• D) Prueba de catalasa en tubo o
portaobjeto.
• E) Citrato Simmons.
• F) Prueba de la aminoácido
descarboxilasa.
• G) Prueba del indol.
• H) Hidrolisis o licuefacción de la
gelatina.
• I) Prueba de la desamimación de la
fenilalanina.
• J) sensibilidad a la bilis del
neumococo.
• K) Fermentación tormentosa con
tornasol.
• L) Reacciones de fermentación.
• M) Prueba de la oxidasa.
• N) Prueba de sensibilidad a
bacitracina.
• O) Producción de ureasa.
• P) Reacciones en agar con hierro y tres
azucares (TSI).
• Q) Medio de lowenstein-Jensen.
• R) Hierro lisina.

17. Técnicas bioquímicas de microbiología
• Prueba de rojo de metilo._ se trata de una prueba cualitativa de la acidez
producida por bacterias que crecen en caldo de RM-PV. Es un medio líquido de
identificación de enterobacterias. Sirve para la diferenciación de bacilos Gram -
en base a las pruebas de Rojo de Metilo (indica que la fermentación de la glucosa
es por la vía ácido-mixta).
• Reacción de Voges-Proskauer._ Indica que la glucosa es fermentada por la vía
butanodiólica. Las bacterias VP-positivas producen acetilmetilcarbinol o acetoina
(C4H8O2) esto hace que reaccione y produce el color rojo.
• Producción de ureasa. Las bacterias ureasa-positivas hidrolizan la urea a
amoniaco, virando a rojo violeta el indicador de rojo fenol.

18. • Citrato Simmons._ Es un medio definido, selectivo y diferencial que prueba la
capacidad de un organismo para usar citrato como única fuente de carbono e
iones de amonio como única fuente de nitrógeno.
• Agar triple azúcar hierro (TSI)._ Se emplea para diferenciar miembros de la familia
enterobacteriaceae basándose en la fermentación de lactosa, sacarosa, glucosa y
en producción de acido sulfhídrico (H2S).
• Hierro lisina._ es un medio de diferenciación para uso en la identificación de
bacilos entéricos.

19. Técnicas
inmunológicas en
microbiología
Puede no ser posible cultivar ciertos virus,
bacterias, hongos y protozoos por no estar
desarrollada la metodología necesaria por
ser peligroso o por ser factible salvo para
unos pocos laboratorios de microbiología
clínica.
Técnicas inmunológicas:
• inmunofluorecencia directa.
• Fijación del complemento
• Neutralización
• Aglutinación
• Inmunoelectroferesis
• Inmunoanalisis
Los anticuerpos monoclonales son
especialmente útiles en algunas de estas
técnicas.

20. técnicas inmunológicas
• Inmunofluorecencia directa._ Es una técnica de inmunomarcación
que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia
fluorescente para demostrar la presencia de una determinada
molécula.
• Aglutinación._ Es un reacción inmunoquimica que produce la
agregación de bacterias o células recubiertas de antígeno o
anticuerpo, en algunos casos contiene ambas.

21. Tipificación con
bacteriófagos
Este se basa en la especificidad de
los receptores superficiales de los
fagos para los receptores de la
superficie celular.
Solo aquellos bacteriófagos que se
pueden unir a estos receptores
superficiales pueden infectar la
bacteria y causar lisis.
El fagotipo se denomina con un
especifico genero y especie ,
seguido de los tipos que pueden
infectar a la bacteria.

22. Métodos moleculares
Algunos de los enfoques mas precisos de
identificación microbiana son a través del
análisis de proteínas y ácidos nucleicos
ejemplo de estos métodos son:
• La comparación de proteínas
• Propiedades físicas
• Cinéticas
• Regulación de enzimas microbianas
• Composición de ácidos nucleicos
• Hibridación de ácidos nucleicos
• Secuenciación de ácidos nucleicos.

23. Nutrición bacteriana

24. Para el crecimiento de un microbio se necesita hacer un medio de cultivo para que
pueda crecer, pero aparte se necesitan nutrientes específicos en el cual se divede
en macroelementos o macronutrientes y los oligoelementos o como tembien se le
puede llamar micronutrientes o microelementos

25. Macronutrientes / Macroelementos
• C (Carbono)
• O (Oxigeno)
• H (Hidrogeno)
• N (Nitrógeno)
• S (Azufre)
• P (Fosforo)
• K (Potasio)
• Cal (calcio)
• Mg (Magnesio)
• Fe (Hierro)

26. Oligoelementos o Microelementos/micronutrientes
• Mn (Manganeso)
• Zn (Zinc)
• Co (Cobalto)
• Mo (Molibdeno)
• Ni (Níquel)
• Cu (Cobre)

27. Funciones de los
elementos

28. Función de los Macroelementos/Macronutrientes
El C,O,H,N,S y el P son componentes de los hidratos de carbono, lípidos, proteínas y
ácidos nucleicos.
El 𝑘+
(Potasio) es necesario para activar varias enzimas entre algunas de ellas
participan para síntesis de proteínas.
El 𝐶𝑎2+ (calcio) contribuye a funciones termorresistencia de las endosporas
El 𝑀𝑔2+ (Magnesio) este actúa como cofactor de muchas enzimas, forma
complejos de ATP (adenosín trifosfato) y estabiliza los ribosomas y la membranas
celulares.
El 𝐹𝑒2+ y 𝐹𝑒3+ forman parte de los citocromos y es cofactor de enzimas y de
proteínas transportadoras de electrones.

29. Función de los micronutrientes
El Zn (zinc) se localiza dentro de muchas enzimas, pero participa en la asociación
de las subunidades reguladoras y catalíticas de la aspartato carbaminotransferasa
en echerichia coli.
El 𝑀𝑛2+ (Manganeso) facilita muchas enzimas la catálisis de la transferencia de los
grupos de fosfatos.
El 𝑀𝑜2+
(molibdeno) es necesario para fijar el nitrógeno y el cobalto.
El 𝐶𝑢2+
es un componente de la cobalamina (V B12).

30. Toma de muestra, preparación de
medios de cultivo y estriado

31. Ejemplo: exudado faríngeo
Indicaciones para la toma de muestra
• Primero acomodar al paciente
• Dar la indicación de que trague saliva
Y saque la lengua y diga AAAAA
• Con ayuda de un bate lengua
empujaremos la lengua hacia abajo
• Introducir el hisopo y pasarlo por las
Amígdalas, en caso de ver pus pasar el
hisopo por el lugar

32. Datos importantes para la toma de la muestra
• Saber si el paciente esta en tratamiento.
• En caso de ser un niño pedir la ayuda de los padres.
• En caso de ver pus en las amígdalas parar el hisopo.
• No debe lavarse los dientes y haber comino una menta antes de la
muestra.
• Si la lengua del paciente se levanta aun teniendo el bate lengua, se
puede usar dos.

33. Preparación de los medios de cultivo
Para la preparación de un medio de cultivo hay que tener en cuenta que no todos
se preparan igual ya que en el etiquetado nos dice cuanto de soluto debe llevar por
una cierta cantidad de solvente ejemplo:
Por cada 1 lt. De solvente, llevara 256 gr de agar.
También hay que tener en consideración cuantos agares se aran ya que una caja
Petri puede tener de 15 ml- 20 ml de agar.
Además de que tenemos que esterilizar nuestras cajas de Petri y nuestro material
para la preparación al igual que el autoclave.

34. Materiales para la preparación de medios de cultivo
• Vaso de precipitados
• Probeta
• Matraz Erlenmeyer
• Bascula
• Agua destilada
• Espátula
• Autoclave

35. Pasos de preparación de los
medios de cultivo. Agar sangre
• Al estar listo se ira a la cabina de flujo y se le verterá 10
ml de sangre, para luego mezclar bien, y al terminar se
llenaran las cajas Petri para que se solidifiquen.
• Se dejara un poco de agar en el matraz ya que ese será el
control del agar si se solidifica significa que salió bien el
procedimiento.
• Tener en consideración cuantas cajas Petri se llenaron con agar.
• Leer la tec. Del agar y saber cuanto lleva de soluto por una
cierta cantidad de solvente y hacer la regla de tres.
• Al tener el resultado debemos poner con ayuda del vaso del
precipitado la cantidad de solvente en la probeta y llegar hasta
el volumen deseado y poner el agua en el matraz.
• Con ayuda de la espátula y la bascula se medirá el solvente
exacto para los medios de cultivo. Al llegar a la cantidad
deseada se verterá en el matraz, para luego homogenizarlo.
• Al tener la solución lista hay que verificar el pH si no esta en el
pH que marca la técnica se le añadirá unas gotas de NaCl
(cloruro de sodio), para tener el pH indicado y calentar el agar.
• Se preparara el autoclave para verter las cajas Petri.
• Las cajas Petri se envolverán en papel panela.
• Cuando el autoclave esta listo se verterá el agar y las cajas Petri
ya envueltas.
• Al terminar se espera a que se termine y se enfrié el auto clave.

36. Como se hace el estriado
en un medio de cultivo
Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un
asa de níquel cromo y se reparte sobre la superficie del
medio de cultivo.
Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las
células bacterianas.
Tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula
viable origina una colonia, a esto se le llama UFC (unidades
formadoras de colonias) visible resultado de sucesivas
divisiones celulares.
Cada colonia bacteriana tiene unas características
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevación,
tamaño , consistencia, etc.
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es
visible como tipos diferentes de colonias.
A partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de
bacterias presentes en la muestra original.

37. Que bacterias se pueden encontrar en los medios
cultivo
• Staph. Aurus
• Staph. Epiderminis
• Corynetobacterium fifteriae
• Listeria
• Bacillus
• Clostridium tetani y diffcile
• Salmonella typhi
• Escherichia coli
• Vibrio cólera
• Campylobacter jejuni
• Acinetobacter
• Haemophilus influenzae
• Brucella
• Legionella pneumophila
• Leptospira
• Micobacterium tuberculosis y leprae
• streptococcus

38. • Clases de tutoría comuníquense al
• 99-32-17-81-69