El documento describe un estudio sobre el cultivo de meristemos de Alamo (Populus alba) con el objetivo de obtener plantas libres de enfermedades. Se tomaron explantes de árboles de Alamo que fueron desinfectados y sembrados en medio MS suplementado. Después de una semana, se observó oxidación en el 25% de los explantes, necrosis en el 15% y contaminación en el 35%. El cultivo de meristemos tiene el potencial de producir plantas libres de patógenos, pero se requiere un proceso de desinfección efect

1. Obtención de plantas libres de enfermedades mediante el
cultivo de meristemos de Alamo (populus alba).
Ayala Paola
Carrera de Ingeniería en Biotecnología, Cultivo de Tejidos Vegetales
Departamento de Ciencias de la Vida, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE
Sangolquí - Ecuador.
Noviembre, 2013
RESUMEN
El cultivo de meristemos se desarrolla con el objetivo de obtener plantas libres de virus y
otros patógenos, se utilizó explantes de Alamo(PopulusAlba) que fueron desinfectados con
detergente al 2% + Tween 20 durante 20 minutos y posteriormente con cloro al 2%
igualmente con Tween 20 durante 10 minutos, además se agregó dos fungicidas:
Carbendazim que es un fungicida de sistémico de rápida penetración y Captan que es un
fungicida de contacto. Para la siembra se lavó los explantes tres veces con agua estéril y se
los cultivo en medio MS enriquecido con 2 mg/L de KIN y 0,5 mg/L de AIA. Después de una
semana de incubación en luz natural se observó oxidación 25%, necrosis 15%n de los
explantes, contaminación 35% y respuesta 25% en otros
Palabras clave:Propagación, meristemos, y cultivo in vitro.
ABSTRACT
Meristem cultureis developed withthe aim of obtainingvirus-free plantsand other pathogens,
Alamoexplantswas used(PopulusAlba) weredisinfected with2% detergent+Tween 20for 20
minutesand then with2%chlorineequallywithTween 20for 10 minutes, and addedtwo
fungicides: Carbendazimwhich is asystemicfungicideCaptanrapid penetrationandwhich isa
contact fungicide. For seedingexplantswerewashedthree times withsterile water
andthecultureon MS mediumsupplemented with2 mg/LKINand 0.5mg/LIAA.After one weekof
incubation indaylightoxidationwas observed25%15%nnecrosisof explants, pollution
andresponse35%25%others
Key words:
Propagation, meristems, and in vitro culture.
INTRODUCCIÓN
Populuses una planta ornamentalmuy
popular debido al color de sus hojas de en
envés blanco, otra de lascaracterísticas
para que esta planta seencuentre en
muchos jardines es su adaptabilidad y
que puedepermanecer todo el año sin
presentar
ningúnproblema
(Pereira,
2007). Son capaces de crecer en un suelo
arenoso costero soportando eventuales
encharcamientos por agua de mar en su
sistema radicular (InfoJardin, 2013). Se ha
incrementado el interés por las plantas
ornamentales debido a comercialización
por lo cual se requiereuna producción
industrial a granmasa de estas especies y
es importante a nivel económico optimizar
los procesos y una de lasmejores formas

2. para hacerlo es labiotecnología por medio
del cultivo in vitro.
En las yemas se encuentran un grupo de
células que conforman los meristemos. La
siembra in vitro de meristemos permite
regenerar plantas libres de virus, por la
gran asepsia que presentan estos
explantes(Roca,
W.
Mroginski,
L.
1993).Los meristemos no poseen tejido
vascular,
lo
que
los
mantiene
parcialmente aislados del resto de la
planta.Además estas estructuras son
dinámicas, es decir que se encuentran en
constante crecimiento y división celular,
por lo que son explantes muy apropiados
ya
que
en
su
estado
natural,
generalmente están libres de patógenos,
presentan
un
alto
potencial
de
propagación
y
poseen
estabilidad
genética elevada (Roca & Beltrán, 1984).
Para obtener un meristemo apical es
necesario tomar segmentos apicales de
tallos obtenidos in vitro o procedentes de
plantas crecidas en condiciones en el
exterior. Si se utiliza la segunda
posibilidad será necesario realizar una
asepsia previa del tejido. Posteriormente
se eliminan los primorios foliares que
rodean al meristemo hasta dejar al
descubierto el domo meristemático.
Finalmente con un bisturí se realiza un
corte transversal, de 0.2 a 1.0 mm, debajo
del meristemo, con uno o dos pares de
primor dios foliares y se coloca sobre un
medio de cultivo adecuado, procurando
colocar la zona de corte hacia abajo.
La composición del medio nutritivo es
compleja, ya que un meristemo es una
porción mínima de la planta. Los
meristemos se aíslan sobre medios
solidos aunque en algunos casos se
utilizan medios líquidos. Frecuentemente
se utilizan vitaminas: vitamina B1,
piridoxina,
ácido
nicotínico,
ácido
pantoténico. Los reguladores suelen
utilizarse en bajas concentraciones (0.10.5 mg/L); la auxina puede ser necesario
para la formación de raíces, auxinas y
citokininas para estimular la división
celular; el GA3 se añade a veces para
lograr la elongación del vástago (Cruz,
2005).
El objetivo de este trabajo fue el cultivo de
meristemos a partir de explantes
dePopulus, para la obtención de plantas
libres de enfermedades como las
causadas por los virus.
MATERIALES Y METODOS
Preparación de la muestra: Se extrajo
los meristemos de segmentos apicales de
tallos de árboles de Populus, se eliminan
los primorios foliares que rodean al
meristemo hasta dejar al descubierto el
domo meristemático. Finalmente con un
bisturí se realiza un corte transversal,
debajo del meristemo, hay q tomar en
cuenta que en el momento de la siembra
colocar la zona de corte hacia abajo.
Preparación del medio de cultivo: El
medio utilizado fue Murashige y Skoog
enriquecido con 2 mg/l de KIN, 0,5 mg/l
de AIA, 30g/L de azúcar y 7.5g/L de agar
siendo pH ajustado a 5.75.
Desinfección del explante: Se preparó
500 ml de una solución 2% de detergente
añadiéndole 3 gotas de tween 20 durante
20 minutos. Se lavó las muestras tres
veces con agua destilada y una con agua
estéril. Posteriormente se colocó los
explantes en 500 ml de cloro al 2% más
tres gotas de tween 20 durante 10
minutos, todos estos procesos en
constante agitación, evitando dañar al
tejido del explante.
Después de este proceso de desinfección,
los explantes fueron trasladados a la
cámara de flujo, donde se realizaron tres
lavados listos para la siembra.

3. Preparación de la sala de siembra: Se
desinfectó el piso de la sala de siembra
con kalipto, se limpiaron las cámaras de
flujo laminar con papel toalla estéril y
sablón. Se introdujo en la cámara todo el
material a utilizar en la siembra: lámparas
de alcohol, juego de pinzas, bisturí,
servilletas estériles, plástico adherente,
ligas, botellas de agua estéril, vasos de
precipitación vacíos. Se prendió las UV
de las cámaras de flujo durante 20 min, se
apagó la UV y encendió el flujo de aire
durante 15 min.
Siembra del explante: Se cortó los
segmentos de material vegetal oxidado a
causa del cloro. Se quitó las hojas y
capas de tejido hasta llegar a un explante
de aproximadamente 3mm y que contenía
el meristemo. Se trabajó con el explante
sobre una servilleta estéril y cerca del flujo
de aire de la cámara. Se flameó las
pinzas y bisturí con savlón antes y
después de manipular cada explante y se
colocó un explante por frasco.
Se sembró dos explantes por cada frasco.
Antes de sellar el frasco se flameó la
boca. Finalmente se selló el frasco con 2
capas de plástico adherente, se aseguró
con una liga y se rotuló cada frasco.
Se evaluó aparición de contaminantes,
brotes encontrados en los explantes y
variaciones en forma y color.
Otras
características
(oxidación,
muerte, cambios
de color)
1
Meristemo1
N° Brotes
Contaminación
(hongo o bacteria )
Explante
RESULTADOS
Verde
Meristemo2
X
0
Café
Meristemo3
X
0
Café
Meristemo4
X
0
Café con moho
Tabla 1.- Evaluación y comparación de meristemos
cultivados in vitro.
Fotografía 1.- Meristemo de Alano no contaminado
Los explantes en su mayoría presentaron
amplia contaminación y necrosis.
Un meristemo posterior a la semana de
incubación no presento contaminación
pero por su meristemo contiguo si estaba
contaminado se lo descarta también.
DISCUSIÓN
Según los resultados obtenidos para
establecer un cultivo de meristemo es
muy importante realizar la escisión
solamente del explante seleccionado ya
que de esta manera se garantiza la
ausencia de posibles virus que afecten a
la planta, lo que permitirá tener plantas
libres de contaminación, en nuestro caso
esto se debió a que las células
meristemáticas se multiplican más rápido
que los virus y bacterias de plantas,
además el meristemo no posee de tejidos
vasculares y por ende los virus no pueden
propagarse por toda la planta (Acosta et
al., 2002). En nuestros explantes a pesar
del método de desinfección aplicado
existió contaminación lo cual puede ser
atribuido a que la planta de la cual se
tomó la muestra estaba enferma o
también
a
la
manipulación
y
contaminación por parte del laboratorista
en el momento de la siembra.

4. CONCLUSIONES:
El cultivo meristemos es una técnica útil
en la obtención de plantas libres de
contaminantes, y que además, permite el
desarrollo directo de brote, sin formación
de callo u organogénesis asegurando que
la inestabilidad genética y la variación
somaclonal se reducen al mínimo. Pero
en la cual se recomienda cuidados y
asepsia.
Al momento de elegir la planta madre del
explante de preferencia evitar que se
encuentre
enferma.
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Roca, W., & Beltrán, J. (1984). Cultivo de
Meristemos para la Conservación de
Germoplasma de yuca in vitro. Cali,
Colombia: CIAT.

5. ANEXOS
Cuestionario
1. Realice una tabla de comparación
entre los cambios morfológicos de
los ensayos de su grupo.
Tabla adjunta en resultados.
2. ¿Cuáles son las condiciones
necesarias para la propagación de
plántulas libres de virus?
Para la obtención de plantas libres de
virus se requiere realizar técnicas como la
termoterapia o técnicas in vitro como el
cultivo de meristemos. La técnica del
cultivo de meristemos consiste en la
disección e incubación del meristemo
apical de una planta en condiciones de
asepsia. Los meristemos carecen de
tejidos vasculares y al encontrarse en
constante división mitótica se encuentra
libre de patógenos(Roca & Beltrán, 1984).
El tamaño del meristemo es quizá el
factor más crítico de esta técnica, y el
éxito en el saneamiento es mayor cuanto
más pequeño es el explante (desde 0.05
mm a 0.2 mm de diámetro). También es
necesario ajustar el tamaño del explante,
es decir el número de primordios foliares
que van a acompañar al meristemo para
equilibrar el desarrollo del cultivo y
conseguir un porcentaje de axenia óptimo.
Es
necesario
indicar
que
los
requerimientos de los medios de cultivo
no son muy exigentes salvo si se cultiva el
domo meristemático sin primordios
foliares y sólo es necesario efectuar los
habituales ajustes en el medio para cada
especie (López & Cazola, 2006).
Otros factores que influyen en el éxito del
tratamiento son la rapidez en el
aislamiento del meristemo, para evitar la
deshidratación de esa frágil estructura y la
época del año en que se obtiene el
explante, siendo la influencia estacional
muy fuerte en algunas especies como
patata, clavel, etc. (López & Cazola, 2006)
3. ¿Por qué es aconsejable utilizar
vástagos en crecimiento para el
cultivo de meristemos?
Porque de este modo, se cuenta con
certeza, con tejido embrionario con
potencial de diferenciación, que tiene la
capacidad de formar todos los tejidos de
la planta, constituye un punto activo de
crecimiento de la yema vegetal (procesos
de diferenciación), y a partir de este se
podrá
regenerar plántulas completas
(Rafael, 1987).