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Laboratorio de Fisiología y
Biotecnología : Crioterapia como
técnica de limpieza de virus en el
programa de papa “
IBT. DIANA ROCIO RUIZ SAENZ
TEMARIO GENERAL
Virus en el cultivo de
papa
Criogenia
Crioterapia en papa
ANTECEDENTES
• PVX (Virus X de la papa)
• PVY (Virus Y de la papa)
• PLRV (Virus del enrollamiento de la hoja)
• PVS (Virus S de la papa)
• PVM (Virus M de la papa)
Potato virus X particles. Transmission electron micrograph and schematic representation of PVX. Scale bar = 500 nm. Adapted
from Lauria et al. (2017).
Clorosis
Reducción del
crecimiento
Enanismo
Perdida de
producción
Mosaico
en hojas
Deformación de
hojas
¿Qué mejoras ofrece seguir las Normas?
NORMAS
FITOSANITARIAS
NOM-041-FITO-2002 SAGARPA SNICS
Control de
tubérculo semilla
y diseminación de
patógenos .
NOM-012-FITO-1996
 Aumenta la supervivencia
 Proporciona seguridad alimenticia
 Una regeneración adecuada
 Material móvil para su exportación
 Rendimientos óptimos
Termoterapia
Crioterapia
Quimioterapia
Electroterapia
Cultivo de
meristemos
1952
1972
1980
1985
1990
(Morel and Martin 1952; Clear et al., 2002; Helliot et al., 2002)
TECNICAS DE ELIMINACIÓN DE VIRUS
CRIOGENIA
10
La criopreservación es una herramienta
para conservar material genético a largo
plazo ofreciendo la máxima estabilidad
de los caracteres genotípicos del
germoplasma.
CRIOPRESERVACIÓN O CRIOGENIA
Sakai, A., & Yoshida, S. (1967).
Uso de ultra bajas temperaturas
temperatura con Nitrógeno
Liquido (-196 C) donde las
funciones metabólicas son nulas.
Ápices de menta preparados para su crioconservación en nitrógeno liquido , inmersión y recuperación en
medio de cultivo tras la congelación
11
PASOS GENERALES DE LA CRIOGENIA
CRIOTERAPIA
 Aplicable a múltiples especies
 Respuesta genotipo-dependiente
 Útil para la obtención de plantas
libres de virus
Panis, B., y Lambardi, M. (2006).
Kaczmarczyk et al., 2012; Arizaga et al., 2017.
Crioterapia (Método de Deshidratación-Crioplaca)
PRUEBAS DE
VIROSIS
14
Después de 4 a 6 semanas de cultivo las plantas se
prueban nuevamente para virosis con la técnica de
ELISA.
Prueba serológica de ELISA.
Determinación de ausencia o presencia
de virus
MATERIAL LIBRE DE VIRUS
Material limpio
Medio de cultivo Murashige Skoog. (MS)
Medio Solido
Esquejes nodales con o sin hoja , en medio MS
Medio Liquido
Medios enriquecidos, rápida
propagación pero menor vigor, aptas
para subcultivo
Micropropagación de materiales
libres de virus
Cuarto de propagación: Temperatura de 18 ± 1°C,Fotoperiodo 16h ,intensidad de luz de 35mM m-2s-1
Micropropagación de materiales libres de virus
BANCO DE GERMOPLASMA
Condiciones de crecimiento
mínimo (8 C, medio con estrés
osmótico)
¡Gracias!
21

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  • 3. Virus en el cultivo de papa Criogenia Crioterapia en papa
  • 5. • PVX (Virus X de la papa) • PVY (Virus Y de la papa) • PLRV (Virus del enrollamiento de la hoja) • PVS (Virus S de la papa) • PVM (Virus M de la papa) Potato virus X particles. Transmission electron micrograph and schematic representation of PVX. Scale bar = 500 nm. Adapted from Lauria et al. (2017).
  • 7. ¿Qué mejoras ofrece seguir las Normas? NORMAS FITOSANITARIAS NOM-041-FITO-2002 SAGARPA SNICS Control de tubérculo semilla y diseminación de patógenos . NOM-012-FITO-1996  Aumenta la supervivencia  Proporciona seguridad alimenticia  Una regeneración adecuada  Material móvil para su exportación  Rendimientos óptimos
  • 8. Termoterapia Crioterapia Quimioterapia Electroterapia Cultivo de meristemos 1952 1972 1980 1985 1990 (Morel and Martin 1952; Clear et al., 2002; Helliot et al., 2002) TECNICAS DE ELIMINACIÓN DE VIRUS
  • 10. 10 La criopreservación es una herramienta para conservar material genético a largo plazo ofreciendo la máxima estabilidad de los caracteres genotípicos del germoplasma. CRIOPRESERVACIÓN O CRIOGENIA Sakai, A., & Yoshida, S. (1967). Uso de ultra bajas temperaturas temperatura con Nitrógeno Liquido (-196 C) donde las funciones metabólicas son nulas. Ápices de menta preparados para su crioconservación en nitrógeno liquido , inmersión y recuperación en medio de cultivo tras la congelación
  • 11. 11 PASOS GENERALES DE LA CRIOGENIA
  • 12. CRIOTERAPIA  Aplicable a múltiples especies  Respuesta genotipo-dependiente  Útil para la obtención de plantas libres de virus Panis, B., y Lambardi, M. (2006).
  • 13. Kaczmarczyk et al., 2012; Arizaga et al., 2017. Crioterapia (Método de Deshidratación-Crioplaca)
  • 15. Después de 4 a 6 semanas de cultivo las plantas se prueban nuevamente para virosis con la técnica de ELISA. Prueba serológica de ELISA. Determinación de ausencia o presencia de virus
  • 16.
  • 18. Material limpio Medio de cultivo Murashige Skoog. (MS) Medio Solido Esquejes nodales con o sin hoja , en medio MS Medio Liquido Medios enriquecidos, rápida propagación pero menor vigor, aptas para subcultivo Micropropagación de materiales libres de virus
  • 19. Cuarto de propagación: Temperatura de 18 ± 1°C,Fotoperiodo 16h ,intensidad de luz de 35mM m-2s-1 Micropropagación de materiales libres de virus
  • 20. BANCO DE GERMOPLASMA Condiciones de crecimiento mínimo (8 C, medio con estrés osmótico)