ENZIMAS NEMATICIDAS DE MICROORGANISMOS Y SUS APLICACIONES

1. ENZIMAS NEMATICIDAS DE
MICROORGANISMOS Y SUS
APLICACIONES
MIKEL TXOPITEA ELORRIA

2.  ESTRUCTURA, EVOLUCION Y FUNCINES DE ENZIMAS NEMATICIDAS
 SERINA PROTEASAS Y OTRAS PROTEASAS NEMATICIDAS
• PROTEASAS EN BACTERIAS
• QUITINASAS
 LAAPLICACIÓN DE ENZIMAS NEMATICIDAS
 MEJORANDO EL POTENCIAL NEMATICIDICO MEDIANTE INGENIERIA GENETICA
 POTENCIALES APLICACIONES EN LA INDUSTRIA Y OTROS CAMPOS
 CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS
• PROTEASAS EN HONGOS
• TIPOS DE NEMATODOS INDICE
 NEMATODOS PARASITOS DE PLANTAS
 INTRODUCCION
• FUNGICIDAS ACTUALES

3.  INTRODUCCION
o Más de 25.000 especies registradas(+500.000)
o 80% de los organismos de los animales
o Pseudocelamados de tamaño de 0.2 a 1.0 mm

4.  TIPOS DE NEMATODOS

5.  NEMATODOS PARASITOS DE PLANTAS

6.  Nematodos mas comunes y sus características

7.  FUNGICIDAS ACTUALES
o Reducir el bromuro de metilo, insecticidas, nematicidas, fungicidas químicos
o Uso de agentes biologicos:el DBCP (Nemagon)
o Nematicidas no fumigantes : carbamatos y organofosforados
• 0,3 mg de bromuro por kilogramo
• 2001 se redujo un 50%
• 1,2-Dibromo-3-cloropropano
• Se prohibió en 1979
• Inhibición de la acetil-colinesterasa (ACh)• Remplazo a organoclorados (IOC)

8.  ESTRUCTURA, EVOLUCION Y FUNCIONES DE ENZIMAS
NEMATICIDAS
o P32 serina proteasa Pochonia rubescens
o Mas de 20 proteasas identificadas
o Serina proteasas, quitinasas, colagenasas
o Nematicidas biologicos por los quimicos. Bioplagicidas

9.  Mecanismos de acción

10.  METODOLOGIA GENERAL PARA EL AISLAMIENTO, EVALUACION Y
IDENTIFICACION DE NEMATOFAGOS

11. • PROTEASAS EN HONGOS
 SERINA PROTEASAS Y OTRAS PROTEASAS NEMATICIDAS
o Gama de sustratos de proteína, caseína, gelatina,
cutícula del nematodo, y cáscaras de huevo
o Superfamilia SB: S8,S53
 Mecanismo de accion serina proteasas

12. o Sensibles al fluoruro de fenilmetilsulfonilo. Familia subtilisina
 Serina proteasas de hongos encontrados

13.  Analisis homologo secuenciales de serina proteasas
o La expresión del gen prC puede ser regulada en pacC mutantes
y fuentes de nitrógeno, pH ambiental, y condiciones de estrés
o Esperimentos de cristalografia de Ver112 y PL646
o Tres nuevas proteasas de Monacrosporium sinense

14.  La evolución de serina proteasas de la familia substilicina Pezizomycotina
o Microparasitos Trichoderma harzianum y Trichoderma pseudokoningii

15. • PROTEASAS EN BACTERIAS
o 97-99% similitud las serina proteasas
o Degradan caseína, BSA, gelatina, colágeno
desnaturalizado y cutícula de nematodo
o B16 la mas interesante por su degradación en intestinos
o Bacillus y una de Pseudomonas fluorescens

16. • QUITINASAS
o Solo en hongos; degrada
huevos y nematodos
o Dos linages:GH18 familiar
o Colagenasas y lipoliticos hipotesis
o Polimero
encontrado en las
paredes de hongos
y los exoesqueletos
de invertebrados
o Chi43 vs P32 contra huevos
o Expresion de C. rosea Crchi1
o Rompen enlaces glicosídicos en moléculas
de quitina
• Arthrobotrys amerospora

17.  MEJORANDO EL POTENCIAL NEMATICIDICO MEDIANTE INGENIERIA GENETICA
o Proteinas de fusión: SP+ quitinasa=CDEP-BmChBD
o Tambien Proteasa Psp-3 y ver 112 en P. lilacinus
, aumentando la actividad un 20-25%
 LAAPLICACIÓN DE ENZIMAS NEMATICIDAS
o Proteasa PII clonada y aislada en A. oligospora
por REMI transformacion
o Bace16 y Bae16 se sobreexpresaron en B. nematocida 16
aumentando la actividad un 60-80%
o La quitinasa Bbchit1 en Beauveria bassiana
o Fungí endófito como agente de biocontrol:P. chlamydosporia y A. oligospora

18.  POTENCIALES APLICACIONES EN LA INDUSTRIA Y OTROS CAMPOS
o (ICM): programas de manejo integrado del cultivo
o 40% de la enzima total mundial
• pH:.6,0 hasta 10
• 40-70 ° C
• Detergentes industriales, sector alimentario
o Serina proteasas
o Quitinasas
• pH:4.0-7.
• 20-40 ° C
• Estabilidad(debido a la glicosilación)
• NRG4 de Enterobacter sp

19.  CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS
https://www.youtube.com/watch?v=4rBE_371
sq4
https://www.youtube.com/watch?v=ZIH8FLYB
8aU

20. REFERENCIAS
 Manejo biológico de nematodos fitoparásitos con hongos y bacterias fagos y bacterias Piedra
Naranjo, Ricardo. Manejo biológico de nematodos fitoparásitos con hongos y bacterias Tecnología
en Marcha, Vol. 21-1, Enero-Marzo 2008, P. 123-132
 Jinkui Yang & Lianming Liang & Juan Li & Ke-Qin Zhang Nematicidal enzymes
from microorganisms and their applications Appl Microbiol Biotechnol (2013)
97:7081–7095
• Nematode-Trapping Fungi edited by Ke-Qin Zhang, Kevin D. Hyde
• Bacteria used in the biological control of plant-parasitic nematodes: populations,mechanisms
of action, and future prospects Baoyu Tian1,2, Jinkui Yang1 & Ke-Qin Zhang1 1 Laboratory
for Conservation and Utilization of Bio-resources, Yunnan University, Kunming, China; and
2 Engineering Research Center of Industrial Microbiology, Ministry of Education, Fujian
Normal University, Fuzhou, Fujian, China