Posible ayuda para exponer en clase

1. Microbiología
Facilitador: Jaime Reyes Rueda
Equipo 4
Luis Enrique Ángel González
Rodrigo Samuel Cruz Lopez
Eduardo Nuñez Navarro
Fernando Vargas Valencia
2.1.1 Definición y tipos de cultivo.

2. Definición
Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se
multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar
diferentes especies bacterianas, con el fin de identificarlas y realizar estudios
complementarios.

3. Nutrientes de los cultivos
En general, todo medio de cultivo debe poseer los siguientes grupos de
nutrientes:
Fuente de Hidrógeno: Constituye la fuente de energía. Generalmente esta
fuente de hidrógeno es un azúcar que funciona a la vez como carbono.
Aceptores de Hidrógeno: Son indispensables para aquellos microorganismos
que no ocupan el oxígeno en la respiración y para aquellos microorganismos
fermentadores que no utilizan sus propios metabolitos como aceptor de
hidrógenos.

4. Fuente de Carbono: Todos los microorganismos necesitan una fuente de carbono,
algunos utilizan el CO2 del aire (autótrofos), pero la mayoría de las bacterias utiliza
compuestos orgánicos carbonados preformados (organótrofos).
Fuente de Nitrógeno: Es esencial para todos los organismos. Algunos lo requieren
como compuesto orgánico y otros pueden utilizar compuestos inorgánicos. Un
pequeño grupo puede utilizar el nitrógeno atmosférico, por ejemplo Azotobacter.

5. Sales minerales: Aportan elementos tales como azufre, fósforo y algunos
activadores enzimáticos presentes en las coenzimas de los citocromos y en
las peroxidasas (oligoelementos: Ca2+, Mg2+, Fe2+, Co2+, Mn2+, Cu2+,
etc.). Todos los microorganismos necesitan aporte de sales minerales para
su desarrollo.
Factores de crecimientos: un factor de crecimiento es un compuesto
orgánico (aminoácidos y bases nitrogenadas) que una célula debe tener
para su crecimiento pero que ella misma no es capaz de sintetizar.

6. Cultivo líquido Algunas sustancias para los cultivos

7. Medios de cultivo y condiciones de crecimiento
Una gran cantidad de microorganismos sin requerimientos, como por ejemplo
muchos pseudomonas del suelo y del agua, pero también Escherichia coli, se
desarrollan perfectamente en un caldo de cultivo con una composición estándar.
Muchos microorganismos necesitan además uno u otro de los oligoelementos,
vitaminas o suplementos. Si el medio de cultivo está compuesto por sustancias
químicas definidas, se habla de un medio de cultivo sintético ó definido.

8. Preparación de un cultivo líquido Preparación de un cultivo en caja de Petri

9. Medios de cultivo complejos o no definidos
Para muchos microorganismos exigentes no se conocen bien los requerimientos
nutritivos. Se cultivan en disoluciones que contienen extracto de levadura,
autolisado de levadura, peptona o extracto de carne.
Para algunos grupos de organismos son también corrientes: mosto (extracto de
malta), infusión de heno, jugo de ciruelas, juga de zanahoria, agua de coco, y para
hongos coprófilos incluso extracto de excremento de caballo.

11. Medios de cultivo sólidos.
Un solidificante casi ideal es el descubierto en 1883 por Hesse, un
colaborador de R. Koch, al introducir el agar en la técnica bacteriológica. Es
un polisacárido extraído de algas marinas, intensamente ramificado y
entrelazado, de composición compleja.
Los cultivos sólidos tienen una proporción de agar de aproximadamente el
1.5%. El crecimiento se desarrolla en la superficie del medio. Estos medios
pueden depositarse en placas de Petri o en tubos de ensayo.

12. Agar sangre: Permite el crecimiento de la mayoría de las bacterias con
importancia clínica. Está compuesto por un medio base rico en nutrientes
más un suplemento de sangre desfibrinada animal en una proporción del 5-
10%.
Agar chocolate: Es un medio enriquecido similar al agar sangre; la
diferencia es que los glóbulos rojos están lisados y liberan al medio
nutrientes como la hemoglobina, factor X (hemina) y factor V (NAD). La lisis
se produce cuando se añade el agar base fundido a la sangre. La hemólisis
le confiere un color marrón característico parecido al del chocolate, de ahí
su nombre.

13. Caja de Petri con agar chocolate (izq)
y sangre (der)
Cultivo en agar sangre

14. Agar MacConkey: Es un medio diferencial y selectivo muy utilizado para el
aislamiento e identificación de enterobacterias (bacilos gramnegativos).
Llevan en su composición sales biliares y cristal violeta que inhiben el
crecimiento de grampositivos y hongos.
Agar Schaedler: Es un tipo de agar sangre con suplementos, utilizado para
el aislamiento de anaerobios (también pueden crecer aerobios).
Medio Lowenstein-Jensen: Es un medio selectivo que se utiliza para el
cultivo de especies de micobacterias (Mycobacterium spp.) como
Mycobacterium tuberculosis.

15. • Agar Mac Conkey que contiene cristal violeta

16. Medios líquidos
Comúnmente llamados caldos. Se emplean para la homogeneización de
muestras, realizar diluciones y enriquecimiento del medio de cultivo. Así
mismo, son útiles para la activación de cepas microbianas liofilizadas. Por
lo general, estos medios suelen servirse en tubos de ensayos o en
matraces cuando se requiere analizar grandes cantidades de muestras.
Ejemplos: Caldo peptona, Caldo infusión cerebro corazón, Caldo
lactosado, Caldo brila, etcétera.

17. Medios semisólidos
Tienen una consistencia sólida leve o gelatinosa. Provienen de medios de
cultivos líquidos a los cuales se les ha adicionado una pequeña cantidad de
agar-agar (0,4-0,8%). Por lo general, se usan tubos de ensayo y se
emplean para determinar la movilidad de bacterias.
Ejemplo: agar SIM, agar MIO, etcétera.

18. • Medio de cultivo en cajas petri

19. Muchos microorganismos aparentes a simple vista pueden someterse a un
aislamiento directo. Para estos organismos pudieron establecerse fácilmente los
medios de cultivo y las condiciones de crecimiento que permitieran su desarrollo.
No obstante, muchos tipos fisiológicos distintos de microorganismos pudierón
investigarse sólo cuando se desarrolló la técnica del cultivo de enriquecimiento
de Winogradsky y Beijerinck
Medios de cultivo selectivo

20. Agar EMB Ó Eosina Azul de Metileno
Cultivo selectivo y diferencial
Agar McConkey
Cultivo selectivo y diferencial

21. Cultivo de enriquecimiento: Las condiciones de enriquecimiento son aquellas
en las que un organismo se implanta por competencia. Estableciendo una serie
de factores (fuentes de energía, carbono, nitrógeno, aceptor de hidrógenos,
atmósfera, luz, temperatura, pH, etc.).
Se determinan unas condiciones ambientales precisas, y se siembra con una
población mixta, como la que se presenta en el suelo o los lodos. En un caldo de
enriquecimiento de este tipo se desarrolla mejor el más adaptado y sobre crece
a todos los demás organismos acompañantes.

22. • Medios de cultivo enriquecido en caja Petri y tubo
transportador

23. Cultivo puro: Se entiende por cultivo puro a la descendencia (clon) de una
sola célula. La función principal es la obtención de un cultivo puro para
demostrar su pureza y mantener el cultivo puro libre de contaminación. El
aislamiento del cultivo puro tiene lugar, con alguna excepción en medios
sólidos.
Las bacterias aeróbicas se aíslan según el método de vertido en placa de
KOCH, o más sencillamente por siembra en estría con el asa de platino
sobre medios con agar. Las bacterias anaeróbicas se suspenden en agar
calentado a una temperatura de 45°C y se incuban en ausencia de aire .

24. Medios diferenciales
A estos medios se le adicionan sustancias para que solo crecen ciertas
bacterias y estas, al actuar sobre alguna de las sustancias adicionadas,
permiten observar macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento
que ayudan a diferenciar sus colonias de otras especies.
Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color, verde metalico
brillante) de colonias de enterobacter aerogenes (color rosado, consistencia
mucosa y crecimiento abundante)
Agar salmonella-shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite
diferenciar las colonias de bacterias fermentadoras de este disacárido

26. Cultivo anaeróbico
Para el cultivo de bacterias anaeróbicas estrictas es imprescindible la
exclusión del oxígeno del aire. La técnica anaeróbica emplea medios de
cultivo a los que se elimina el aire: hervidos, frascos cerrados sin que
queden burbujas, atmósferas sin oxígeno en desecadores o frascos de Witt,
sustancias para la absorción del oxígeno (pirogalol alcalino, ditionito, cloruro
de cobre I), y otros medios auxiliares.
La adición de sustancias reductoras (ácido ascórbico, tioglicolato ó también
sulfuro) a los caldos de cultivo permite reducir ó eliminar los efectos tóxicos
del oxígeno del aire.

27. Jarras de cultivo anaeróbico

28. Bibliografía
Barrero L. (2016). Microbiología clínica. Madrid, España: Editorial Síntesis
S.A. Pág: 38-48.
Fontalvo L. (2020). Métodos analíticos de microbiología general y aplicada.
Santa Marta: Editorial Unimagdalena. Pág: 41-49.
Schlegel H. y Zaborosch C. (1991). Microbiología general. Barcelona:
Ediciones Omega, S.A. Pág: 193-204