1. IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS
Introducción
Se entiende por aislamiento, al proceso que permite separar uno o más
microorganismos presentes en un sustrato, forzándolos a crecer en medios de
cultivosartificiales.
Formando asi un Cultivo puro, este es aquel que contiene una sola especie o tipo
de microorganismo y que presumiblemente se ha obtenido a partir de una sola
célula. En un cultivo puro, no necesariamente todas las células que lo componen
tienen que ser exactamente iguales, ya que es factible que algunas de ellas
sufran mutaciones y se diferencien de las restantes.
Aislamiento de bacterias
el método utilizado en nuestro trabajo, para la obtención de cultivo puro, fue:
Siembra en estrías en placas de Petri.
Mediante un asa de punta previamente esterilizada en la llama de un mechero y
enfriada en el agar, se deposita en un medio sólido, una pequeña cantidad de la
muestra y se distribuye extendiéndola sobre ella. De este modo, las bacterias se
van distribuyendo sobre la superficie del agar y separándose unas de otras. Los
microorganismos se adhieren a la superficie del medio y se multiplican formando
colonias. Cada una de estas colonias se ha originado a partir de la multiplicación
de una sola célula. Al trasladar una de estas colonias aislada a una nueva placa
(repique), se obtendrá un cultivo puro en el que todas las colonias presentarán
lasmismascaracterísticas.
*Identificacion
Mediante diferentes pruebas bioquimicas y agares determinados , pudimos
encontrar que el microorganismo que aislamos de la espuma biologica (foaming)
de las aguas contaminadas fue la k. Pneumoniae.

2. Enterobacterias:
E.coli:
Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser
humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales
—incluido el humano— y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en
1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli.
Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su
descubridor. Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del
proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tinción de Gram, es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos
(que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa.
Prueba en agar McConkey: Este es un medio diferencial para la selección y
recuperación de bacilos gram-negativos; las sales biliares y el cristal violeta inhiben el
crecimiento de bacterias gram-positivas. Los organismos fermentadores de lactosa crecen
formando colonias rojas-rosas mientras que los no fermentadores de lactosa forman
colonias incoloras o blancas.
Composición:
Bacto-peptona, 17g
Proteosa-peptona, 3g
Lactosa, 10g
Sales biliares, 1.5g
NaCl, 5g
Agar, 13.5g
Rojo neutro, 0.03g
Cristal violeta, 0.001g
Agua destilada, 1000ml

3. Preparación:
Se utiliza un medio comercial deshidratado (Difco). Para rehidratarlo disolver 50g de
medio en 100ml de agua destilada y calentar (mediante un baño de agua) hasta que el
medio se disuelva completamente. Ajustar el pH a 7,1 y esterilizar en autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos. Distribuir en placas.
Condiciones Generales:
Las bacterias Gram negativas fermentadoras se desarrollan en agar sangre de carnero y agar
Mc Conkey, pero en agar sangre de carnero no podemos hacer mayor diferenciación entre
colonias, sin embargo en el agar Mc Conkey podemos diferenciar las colonias lacotsa
positivas y lactosa negativas. y una vez obtenido el crecimiento de colonias, se lleva a cabo
la identificación mediante pruebas bioquímicas y enzimáticas. Los organismos
fermentadores de lactosa crecen formando colonias rojas-rosas.
Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones basadas en el metabolismo de
los microorganismos que generalmente se realizan en sistemas miniaturizados y
automáticos. Entre otros aspectos, se analiza la acción de la bacteria sobre los hidratos
de carbono, la liberación de enzimas y metabolitos al medio de cultivo etc. A partir
del conocimiento del metabolismo, las pruebas bioquímicas nos permiten determinar el
género y la especie de la bacteria en estudio.
Características del crecimiento de las colonias de E. coli en Agar
McConkey

4. Lectura de cultivos en agar Mc Conkey:
En agar Mc Conkey, Escherichia coli lacotsa positiva forma colonias de borde entero, de
color fucsia, opacas, de 2mm-3mm de diámetro, usualmente rodeadas de una zona opaca
alrededor de la colonia(bilis precipitada). Las cepas de E. coli que son lactosa negativa dan
colonias incoloras de 3-4mm.
Crecimiento de las colonias de Proteus vulgaris en Agar McConkey
Es fácil de aislar al P. vulgaris de individuos que habitan hogares de cuidados de larga data,
hospitales y en pacientes con enfermedades crónicas o con un sistema inmune
comprometido. P. vulgaris es un microorganismo que fermenta glucosa, sucrosa y
amigdalina, pero no fermenta la lactosa ni el manitol.
Placa de Agar Mc Conkey con
colonias de Escherichia coli

5. Crecimiento de las colonias de Proteus mirabillis en Agar McConkey
Proteus mirabilis es una bacteria Gram-negativa, facultativamente anaeróbico. Muestra
aglutinación, motilidad, y actividad ureasa. P. mirabilis causa el 90% de todas las
infecciones por 'Proteus'
Esta bacteria de colonias redondeadas tiene la habilidad de producir grandes niveles de
ureasa. La ureasa hidroliza urea a amoniaco, (NH3) y eso hace a la orina más alcalina. Y al
subir la alcalinidad puede liderar la formación de cristales de carbonato de calcio, y/o
apatita.
P. mirabilis puede usar urea y citrato. Puede producir gas de sulfuro de hidrógeno, y formar
filmes claros en medios de crecimiento. Es mótil, posee flagelo peritricoso, y es conocido
por su habilidad para aglutinarse.

6. Crecimiento de las colonias de Klebsiella en Agar McConkey
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En agar Mc Conkey. K. neumoniae forma colonias de borde entero, de color rosado de 2-
4mm de diámetro, no tan mucoides como K. pneumoniae
tamaño: mediana
borde: ondulado
elevación: convexa
superficie: lisa
consistencia: mucoide
aspecto: mate y opaco

7. Crecimiento de las colonias de Klebsiella en Agar McConkey
hjhjk
En agar Mc Conkey. K. neumoniae forma colonias de borde entero, de color rosado de 2-
4mm de diámetro, no tan mucoides como K. pneumoniae
tamaño: mediana
borde: ondulado
elevación: convexa
superficie: lisa
consistencia: mucoide
aspecto: mate y opaco