Practicas de microbiología clínica

1. PRÁCTICAS DE
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
(CURSO 2012–2013)

2. Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Miércoles
PRÁCTICAS A REALIZAR
ANÁLISIS
CUALITATIVO
MUCOSA
FARÍNGEA
X-1
Observación de halos de hemólisis
en las placas de Agar Sangre nº 1 y nº 2
X-2
Tinción de Gram
de presuntos cocos Gram + crecidos en:
placa de Agar Sangre nº 2
X-3
Observación de la placa de Agar
Salino Manitol
y tinción de Gram de colonias aisladas
X-4
Siembra en Agar Sangre
de cocos Gram + en sectores
(placa nº 3)

3. METODOLOGÍA
Se parte de la placa de agar sangre nº 2 (se puede utilizar también la de Agar
Salino Manitol). Después de 48 horas de incubación, debe haber colonias aisladas
con un crecimiento adecuado.
a) Colocando la placa frontalmente a la luz, se observará la existencia de
halos de hemólisis (α y β).
b) Podrán existir colonias de cocos Gram positivos que no sean hemolíticas.
c) Se considerará la relación tamaño de la colonia / tamaño del halo de
hemólisis.
d) Se realizará una tinción de Gram a cada tipo diferente de colonias
aisladas.
ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE
IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM POSITIVOS
SOBRE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 2
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Miércoles

4. OBSERVACIÓN DE HALOS DE HEMÓLISIS
FUNDAMENTO
Los microorganismos hemolíticos liberan enzimas (hemolisinas) al medio que
destruyen los glóbulos rojos apareciendo halos de hemólisis.
METODOLOGÍA
Se trabajará con colonias aisladas y bien crecidas a las 48 horas.
Observación de la hemólisis
α-hemólisis
β-hemólisis
γ-hemólisis: no hay hemólisis
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5. Beta
hemólisis
Lisis completa de los glóbulos rojos
Halo transparente alrededor de la colonia
Alfa
hemólisis
Lisis parcial de los glóbulos rojos
Se abren poros en la membrana
Salida de hemoglobina al medio
Oxidación del grupo hemo
Formación de biliverdina (color verdoso)
Halo verdoso alrededor de la colonia
CARACTERÍSTICAS DE BETA Y ALFA HEMÓLISIS
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6. β
α
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7. β α
γ
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8. IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE
COLONIAS EN AGAR SANGRE
COCOS GRAM POSITIVOS
Colonia grande/Halo hemólisis pequeño Æ Staphylococcus
Colonia pequeña/Halo hemólisis grande Æ Streptococcus
BACTERIA CATALASA HEMÓLISIS
AGRUPACIÓN
MICROSCÓPICA
S. aureus + β Racimos
S. epidermidis + NO Racimos
S. saprophyticus + NO Racimos
Streptococcus
pyogenes
- β Cadenas
S. pneumoniae - α
Aisladas
Parejas
Cadenitas
S. agalactiae - β Cadenas
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9. OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE
Colonia Morfología celular Podría ser
Grande
Amarillenta- incolora
Beta-hemolítica
Células esféricas
Racimos irregulares Staphylococcus aureus
Pequeña
Blanca-grisácea
No hemolítica
Células esféricas
Racimos irregulares Staphylococcus epidermidis
Grande
Blanca-amarillenta
Anaranjada
No hemolítica
Células esféricas
Racimos irregulares Staphylococcus saprophyticus
Pequeña
Grisácea-traslúcida
Beta-hemolítica
Células esféricas
Células ovoides
Aisladas-parejas
Cadenas
Streptococcus pyogenes
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10. OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE
Colonia Morfología celular Podría ser
Pequeña
Grisácea-traslúcida
Alfa-hemolítica
Células esféricas
Células ovoides
Aisladas-parejas
Cadenas
Streptococcus pneumoniae
Pequeña
Gris
Alfa-hemolítica
No hemolítica
Células esféricas
Células ovoides
Aisladas-parejas
Cadenas
Grupo Viridans
Streptococcus mutans
S. Salivarius
S. Bovis
S. mitis
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11. ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA
MUCOSA FARÍNGEA
Observación de la placa de Agar Salino Manitol
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12. Microorganismos Fermentación
manitol
Colonia
Staphylococcus aureus SI Halo amarillo
S. epidermidis NO Incolora
S. urealyticus SI Halo amarillo
S. xylosus SI Halo amarillo
S. lentus SI Halo amarillo
S. simulans SI Halo amarillo
S. saprophyticus Variable Halo amarillo o
incoloro
Enterococcus faecalis SI Halo amarillo
E. faecium Variable Halo amarillo o
incoloro
E. avium SI Halo amarillo
E. durans Variable Halo amarillo o
incoloro
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13. TINCIÓN DE GRAM DE COLONIAS AISLADAS
(BÚSQUEDA DE COCOS GRAM POSITIVOS)
Se realizará tinción de Gram de:
1. Colonias aisladas de la placa de Agar
Sangre nº 2 (preferentemente)
2. Colonias aisladas de la placa de AgarSalino
Manitol
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14. Tinción de Gram
1. Extensión.
2. Desecación.
3. Fijación.
4. Colorante: Cristal violeta, 2 minutos.
5. Lavar con agua.
6. Mordiente: Lugol, 2 minutos.
7. Lavar abundantemente con agua.
8. Decoloración: Alcohol etílico 96%, 20 segundos.
9. Lavar abundantemente con agua.
10. Colorante de contraste: Safranina, 3-4 minutos.
11. Lavar abundantemente con agua.
12. Dejar secar a temperatura ambiente.
13. Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100X).
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15. Gram positiva Gram negativa
Extender y fijar
la preparación
Etanol
Lugol
Cristal violeta
Safranina
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16. Staphylococcus
Levaduras
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17. Corynebacterium
Enterococcus faecalis
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18. Neisseria
Fusobacterium
Streptococcus
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19. METODOLOGÍA
a) Se sembrarán aquellas colonias identificadas como cocos Gram positivos.
La siembra se hará por sectores en una placa de agar sangre que
llamaremos nº 3.
b) Cada alumno deberá sembrar, al menos, dos sectores de cocos Gram
positivos.
ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE
SIEMBRA POR SECTORES DE LA PLACA
DE AGAR SANGRE Nº 3
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