4. Paciente adulto con celulitis
estafilocócica en el labio superior.
Paciente adulto con lesiones
vesiculares ampollosas del
estafilocócico facial.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
Recién nacido con síndrome de piel
escaldada estafilocócica.
5. Coloración Gram de una lesión de celulitis
estafilocócica. Cocos agrupados G (+)
extracelulares. Nótese los leucocitos PMN.
Coloración Gram procedente de un cultivo.
Nótese los racimos de uva.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
6. Colonias de S. aureus en agar sangre de
carnero.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1052, 2436
Colonias de S. aureus en agar
manitol salado.
7. Colonias de Micrococcus luteus en agar
sangre de carnero.
Colonias de Staphylococcus epidermidis en
agar sangre de carnero.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2436, 2440
9. S. saprophyticus. Prueba de sensibilidad a la
novobiocina y a la furazolidona.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1060, 2438, 2440
Prueba de coagulasa en tubo.
10.
11. Paciente con erisipela por GAS
β-hemolíticos. Nótese las
lesiones ampollosas.
Exudado faríngeo
Exudado vaginal
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
12. Streptococcus en hemocultivo.
Cocos G (+) en cadenas
Streptococcus pneumoniae en
esputo. Cocos G (+) en
forma de lanceta. Nótese la
degeneración de los PMN.
Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 215, 222; Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17
Edition. Pág. 2441, 2443
Streptococcus. Nótese las
cadenas largas.
13. Streptococcus β-hemolíticos del grupo
A en SBA
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
Streptococcus α-hemolíticos en SBA.
14. Streptococcus α-hemolíticos en SBA. Nótese la β–
hemólisis en unas áreas más intensas, debido a la
actividad combinada de las SLO y SLS.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
15. Prueba de sensibilidad a la bacitracina. Nótese las
reacciones de un GAS β–hemolíticos y otro GBS
β–hemolíticos.
Prueba de CAMP. Nótese la hemólisis sinérgica en
el área de intersección donde el factor CAMP y la
β-hemolisina se han difundido.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1175, 1176, 2444, 2445
16. Prueba de tolerancia a la sal 6.5% e
hidrólisis de bilis esculina.
Prueba de PYR
Caldo BHI. Crecimiento a 10°C y 45°C
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1176, 1177, 2444, 2445
17. Prueba de susceptibilidad a la
optoquina
Prueba de solubilidad a la bilis
(flecha)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1178, 2444, 2445; Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 224
20. Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 252; Murray P et al 2014. Microbiologia Medica 7a Edicion. Pág. 250
Secreción uretral purulenta de un
hombre con uretritis
Muestra de LCR. Nótese la distribución
espacial de los microorganismos.
21. Morfología de las colonias
Colonias de Neisseria gonorrhoeae en
MTM
Colonias de Neisseria meningitidis en
SBA
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2429, 2430
22. Tinción GRAM
Prueba de citocromo
oxidasa
Prueba de catalasa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 971, 972
23. Utilización de carbohidratos. Medio CTA con
G, M, S, L
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 972, 2431
27. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition.
Es un microorganismo grande (1 x 3 a 8 um) que se dispone de
forma aislada o en parejas de bacilos en las muestras clínicas, o
bien como cadenas largas en forma de serpentina. Anaerobio
facultativo. Gram y Catalasa (+).
29. ✓ Coloración tipo especial para reconocimiento de
CÁPSULA BACTERIANA
30. El cuerpo bacteriano de Bacillus
anthracis se observa de color púrpura y
la cápsula de color claro o incoloro.
B. cereus y B. subtilis no presentan cápsula.
31. B. cereus B. anthracis
β-hemólisis γ-hemólisis Nótese la morfología de las
colonias
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2453, 2454
34. Determinar la producción de la
exoenzima gelatinasa (hidrólisis de la
gelatina
B. subtilis
B. cereus
B. anthracis
35. 11
1. Bacillus anthracis
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Aerobio y anaerobio facultativo
• Crecimiento no exigente de colonias
• No hemolítico
• Inmóvil
• Cápsula formada por ácido poli-D-glutámico
• Sensible a penicilina
Colonias no hemolíticas de 4 a 5 mm de diámetro, con
apariencia de vidrio esmerilado y bordes irregulares.
Las colonias se extienden sobre el medio.
36. 12
2. Bacillus cereus
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Es saprófito
• Anaerobio facultativo
• β-hemolítico
• Catalasa (+)
• Crecimiento de requerimientos no
exigentes
• Móvil, con flagelos perítricos
• No capsulado
Colonias de 3-8 mm de diámetro, beta hemolíticas con
hemólisis completa, de color gris a verde, aspecto de vidrio
esmerilado y márgenes onduladas.
Las colonias se extienden por el medio.
37. 3. Bacillus subtilis
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Aerobia
• Es saprófito
• Comúnmente encontrada en el suelo
• β-hemolítico
• Catalasa (+)
• Móvil, resistente a penicilina
Colonias, de 2 a 4 mm de diámetro, beta hemolíticas con
hemólisis completa, que pueden ser de aspecto liso, mucoide
o rugoso; los bordes pueden ser ondulados o extendidos en el
medio y ocasionalmente dan la apariencia de cultivos mixtos
38. Morfología:
Las bacterias pertenecientes al género
Listeria son bacilos (cocobacilos) gram-
positivos cortos, regulares, no
esporulados ni ramificados, que suelen
observarse en disposición individual o
formando cadenas cortas.
Coco bacilos gram positivos del genero
listeria. Coloración gram
39. Presentan de 1 a 5 flagelos peritricos que les confieren movilidad a
28ºC.
Anaerobio Facultativo, fermentador de glucosa, lactosa, no
formador de gas.
En cultivos viejos pueden aparecer formando filamentos de 6-20
mm de longitud.
Flagelos periticos de genero listeria.
Microscopia electrónica.
40. L. monocytogenes se aísla fácilmente de muestras orgánicas
habitualmente estériles: Sangre, líquidos cefalorraquídeo y
amniótico, placenta y tejido fetal.
Éstas pueden ser inoculadas directamente en medios habituales
como el agar sangre. Las muestras de sangre pueden inocularse en
cualquier sistema convencional de hemocultivos.
Listeria monocytogenes. Nótese la B-hemólisis.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1261,
44. La tinción de Gram de estas
bacterias revela la presencia de
agregados y cadenas cortas (en
forma de V o de Y, letras chinas o
empalizadas) o bacilos de forma
irregular (semejantes a un
garrote).
Agrupación bacteriana. Caracteres chinos correspondientes
al genero Corynebacterium
45.
46. AGAR CHOCOLATE TELURITO DE POTASIO
(MEDIO SELECTIVO INHIBIDOR DE GRAM NEGATIVOS)
BIOTIPOS
a)Tipo gravis: colonias grandes
grisáceas.
b) Tipo mitis: colonias medianas,
circulares, lisas totalmente negras.
c) Tipo intermedius: colonias
pequeñas, lisas o rugosas con centro
negro.
54. Clostridium spp.
• La mayoría de los Clostridium son de importancia médica, ya
que muchos de ellos producen enfermedades en el hombre;
sin embargo los más importantes son:
✓ Clostridium perfringens, produce gangrena gaseosa
✓ Clostridium tetani, causante del tétanos.
✓ Clostridium botulinum, causante del botulismo.
✓ Clostridium difficile, productor de enterocolitis tóxica.
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
56. MUESTRA
Gangrena gaseosa. Brazo de una mujer usuaria de drogas
ilegales, con úlceras e inflamación cuyo origen se encontró
en las huellas de inyecciones.
Celulitis por clostridios. Los clostridios se pueden introducir
en los tejidos durante la cirugía o por una herida traumática. El
paciente había sufrido una fractura abierta de la tibia. Cinco
días después de la lesión, la piel se decoloró y se formaron
ampollas y necrosis.
Kenneth R et al 2010. Microbiología Medica 5a Edición. Pág. 398; Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 330
57. Clostridium perfringens. Tinción de Gram de una muestra de una herida. Nótese
la forma rectangular de los bacilos, la presencia de muchos bacilos decolorados
que parecen gramnegativos y la ausencia de esporas y células sanguíneas.
Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 328
58. C. perfringens. Tinción Gram de un tejido muscular aspirado de un paciente con
gangrena gaseosa - mionecrosis . Nótese el fondo necrótico sin células
inflamatorias y bacilos G (+) en forma de “box car” y un bacilo G (-) que es un
Gram variable.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
59. MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS
• CULTIVO EN MEDIO DE
ROBERTSON CMP O CALDO DE
TROZOS DE CARNE.
✓ El medio de carne cocida es un medio
de enriquecimiento utilizado para el
cultivo de microorganismos
anaerobios, especialmente los
pertenecientes al género Clostridium.
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
60. C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de un cultivo de Caldo
tioglicolato de 24 h. Nótese la ausencia de esporas y presencia de
formas filamentosas.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473
61. Clostridium sp. observa de color rosado y la
espora de color verde.
Coloración de Wirtz Conklin
67. C. perfringens en agar sangre de 24 h. Nótese la zona de doble hemólisis,
interna y externa.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
68. Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473
C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de A. sangre de 24 h. Nótese la
ausencia de esporas y células de color rojo.
MICROSCOPÍA
76. MUESTRAS
• Una buena muestra es aquella que proviene del sitio de la lesión,
en cantidad suficiente, recolectada en un envase adecuado y
conservada correctamente.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1795
77. ESPUTO CALIDAD DE MUESTRA
Saliva Mucopurulento Hemoptoica Hidrolizado
78. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Tratar la muestra con N-
acetil L-cistina NaOH
(NALC-NaOH)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1797
Descontaminar con
NaOH 6%
79. PREPARACIÓN Y FIJACIÓN DE LA
MUESTRA
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 34
81. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Identifique las características morfológicas del bacilo
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 43
82. LECTURA E INFORME DE RESULTADOS
Colocar una gota de aceite de inmersión
Realizar el recorrido en línea recta y sistemático.
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 44
84. INFORME DE RESULTADOS
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 45, 46
85. ESCALA PARA EL INFORME DE
RESULTADOS
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 47
86. REGISTRO E INFORME DE RESULTADOS
• El informe y registro mediante la escala semicuantitativa estandarizada asegura la
reproducibilidad de los resultados y permite evaluar:
✓ La gravedad de la enfermedad
✓ El grado de infectividad del paciente
✓ La evolución del paciente bajo tratamiento
• Registrar inmediatamente el resultado de la
lectura en el Registro del Laboratorio.
Marcar los resultados positivos en rojo, para
identificarlos rápidamente.
• Escribir el resultado en el formulario
adoptado para el informe
• Verificar que el informe contenga:
❑ El nombre del paciente
❑ El número de identificación de la muestra
❑ El método de tinción utilizado
❑ El resultado del examen microscópico
expresado según la escala estandarizada
❑ La fecha
❑ Toda observación que considere relevante,
por ejemplo la calidad de la muestra
inadecuada Firma del responsable del
examen microscópico.
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 52
88. CULTIVO
Agar Middlebrook 7H10 con hidrazida de ácido tiofeno 2-
carboxílico (T2H). Nótese el crecimiento de 3 cepas
diferentes de M. tuberculosis en 3 cuadrantes. M. bovis no
creció en un cuadrante.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481
Agar Middlebrook 7H10. Nótese las colonias típicas con
apariencia áspera y beige de M. tuberculosis después de 25 d
de incubación a 35oC en CO2 al 10%.
89. Medio Lowenstein-Jensen. Nótese las colonias atípicas
de consistencia rugosa de M. tuberculosis después de 22
d de incubación a 35oC con CO2 al 10%.
Lowestein-Jensen
El verde de malaquita inhibidor
La glicerina estimula el crecimiento de M.
tuberculosis.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481
94. Enterobacterias
Son Gram-negativos y tienen unos requerimientos nutricionales
sencillos:
• Fermentan la glucosa,
• Reducen los nitratos,
• Son catalasa-positivos y
• Oxidasa-negativos; para diferenciar a las enterobacterias de otros
bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores (Vibrio
y Pseudomonas)
95. Características de detección
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 378, 2390-2392
Fermentación de glucosa Citocromo oxidasa Reducción de nitratos a nitritos
97. Aislamiento primario
Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento y
diferencie.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394
Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento de E.
coli.
98. Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli y
Shigella sp.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394
99. Agar XLD. Nótese el crecimiento de E. coli Agar XLD. Nótese las especies no fermentadoras de
lactosa y la pigmentación
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
100. Agar XLD. Nótese el crecimiento de
Salmonella sp. y E. coli.
Agar XLD. Nótese el crecimiento de Proteus
sp.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
101. Agar HE. Nótese el crecimiento de E.
coli.
Agar HE. Nótese el crecimiento de
Enterobacterias no fermentadoras de
lactosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
102. Agar SS. Nótese el crecimiento de
Salmonella sp.
Agar SS. Nótese el crecimiento de las
especies fermentadoras de lactosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
104. Agar LIA. Nótese las diferencias entre la
desaminación y descarboxilación de lisina, y la
producción de H2S.
Medio motilidad. Nótese el crecimiento de los
microorganismos móviles e inmóviles.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. , 2397- 2398
109. Pseudomonas aeruginosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
▪ Tipo de muestra: quemaduras severas, pus, sangre, orina,
LCR, lavados bronquiales, esputo y tracto genital femenino.
Lactante con ectima gangrenoso en región crural
izquierda y muslo derecho en fase avanzada
Lactante con ectima gangrenoso que provoca
solución de continuidad en “sacaboacado”
Autopsia de pulmones de un adulto joven.
Observe el proceso inflamatorio extenso y
una biopelícula viscosa
111. Medios de aislamiento
Caldo nutritivo
Lectura:
Pigmento de verde y olor
característico a uvas
Agar nutritivo
PIOCIANINA
▪ Siembra por dispersión y agotamiento
▪ Incubadora a 37°C x 24-48 h
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2404
112. • Colonias grandes, brillantes, confluentes, de borde continuo o a veces ondulado, con
un centro opaco y de consistencia mucoide
• El pigmento azul verdoso (piocianina) se difunde en el medio
Aislamiento selectivo
Agar cetrimide
113. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406, 2407
• Colonias lactosa positiva, color púrpura oscuro: E. coli.
• Colonias lactosa negativa, color azul turquesa difusible:
P. aeruginosa, productora de piocianina
Agar Mac Conkey
• Colonias mucoides de P. aeruginosa.
• Muestra de esputo, paciente con fibrosis quística.
• Nótese la pigmentación en algunas áreas.
Agar Mac Conkey
114. Agar Sangre
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406
• Colonias grandes B-hemolíticas con periferia extendida.
• Observe el brillo metálico en áreas con mayor crecimiento.
• Colonias presentan olor dulce a uva
115.
116. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
• Prueba de diferenciación en KIA entre un
microorganismo fermentador y no fermentador
• Se demuestra la actividad de la citocromo oxidasa.
Prueba de la Citocromo-oxidasa
Detección de fermentación
117. Utilización oxidativa de la
glucosa
• Medio Hugh Leifson. Identifica al microorganismo
capaz de oxidar la glucosa.
Prueba de motilidad
• Medio motilidad con TTC. Los microorganismos móviles
reducen el TTC a lo largo de su crecimiento,
observándose un color rojo.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
118. PIOCIANINA: Color azul verdoso y soluble en cloroformo
Caldo Tripticasa Soya (TSB) + cloroformo
incuba 24 h a 37 °C Se agita y deja en reposo
119. Producción de pigmentos
• Tubos con agar Flo y Tech bajo luz visible. Producción de
pioverdina (fluoresceína) y piocianina, ambas producidas
por P. aeruginosa.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
122. Especies del género Vibrio
Vibrio alginolyticus
Responsable de otitis
externa, infección de
heridas cutáneas, tejidos
blandos.
TCBS: colonias amarillas
Vibrio cholerae
Agente etiológico del
cólera epidémico y
pandémico en los
humanos.
La última pandemia fue
producida por el biotipo
El Tor, serotipo Ogawa
TCBS: colonias amarillas
Vibrio
parahaemolyticus
Causante de
gastroenteritis aguda en
humanos después de la
ingestión de mariscos
contaminados
TCBS: colonias verdes
Vibrio vulnificus
Causante de
bacteriemia, infecciones
en heridas cutáneas muy
dolorosas, con necrosis
cutáneas, celulitis.
TCBS: colonias verdes
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
123. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
DIRECTO
• Muestras: heces, sangre, heridas.
• Examen directo: campo oscuro, Inmunofluorescencia.
• Cultivo: medio enriquecido (agua de peptona alcalina pH
8.5) y medios selectivos (agar TCBS, agar TTG, agar
Macconkey) y no selectivos (agar gelatina, agar de
extracto de carne).
• Identificación:
• Pruebas bioquímicas
• Serológica: aglutinación (antisueros serogrupos O1 y
O 139)
• Hibridación con sondas de ADN y PCR.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
124. PROCEDIMIENTO
• Cultivar el hisopo en un tubo de agua peptonada
alcalina (APA). El APA se incuba a 37°C durante 6 a
8 horas.
• Siembran las placas de TCBS y agar TSA
• Leer las placas de agar TSA Leer las placas de agar
TCBS
• Las colonias típicas son amarillas planas o
ligeramente convexas.
• Subcultivar 2 colonias sospechosas de Vibrio
cholerae de las placas de agar TSA y/o TCBS en
estrías de agar TSA, agar TSI, agar LIA y en caldo
triptofano.
• Leer las reacciones bioquímicas: TSI, LIA e indol del
triptofano, si son compatibles con, Vibrio cholerae.
• Realizar la prueba de la oxidasa y si ésta es positiva
se siembran las pruebas bioquímicas
complementarias y se hace la serotipificación.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
127. Agar TSI
A/A
Gas (-)
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Agar LIA
K/K
Medios diferenciales
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416