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ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA
CICLO : IV
SEMESTRE ACADEMICO : 2022-2
UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA
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PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA
“Dr
.Wilfredo ErwinGardini T
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ACREDITADAPORSINEACE
REACREDIT
ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV
PRÁCTICA N° 4. COCOS GRAM
POSITIVOS Y GRAM NEGATIVOS.
Staphylococcus, Streptococcus,
Enterococcus, Neisseria.
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA
SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER
: PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ
: CORNEJO ESPINOZA DIEGO
: ARANGUREN SANDOVAL YUDY
: LLACZA LADERA HENRY FRANS
Paciente adulto con celulitis
estafilocócica en el labio superior.
Paciente adulto con lesiones
vesiculares ampollosas del
estafilocócico facial.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
Recién nacido con síndrome de piel
escaldada estafilocócica.
Coloración Gram de una lesión de celulitis
estafilocócica. Cocos agrupados G (+)
extracelulares. Nótese los leucocitos PMN.
Coloración Gram procedente de un cultivo.
Nótese los racimos de uva.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
Colonias de S. aureus en agar sangre de
carnero.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1052, 2436
Colonias de S. aureus en agar
manitol salado.
Colonias de Micrococcus luteus en agar
sangre de carnero.
Colonias de Staphylococcus epidermidis en
agar sangre de carnero.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2436, 2440
Prueba de catalasa positiva
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1053, 2436
S. saprophyticus. Prueba de sensibilidad a la
novobiocina y a la furazolidona.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1060, 2438, 2440
Prueba de coagulasa en tubo.
Paciente con erisipela por GAS
β-hemolíticos. Nótese las
lesiones ampollosas.
Exudado faríngeo
Exudado vaginal
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
Streptococcus en hemocultivo.
Cocos G (+) en cadenas
Streptococcus pneumoniae en
esputo. Cocos G (+) en
forma de lanceta. Nótese la
degeneración de los PMN.
Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 215, 222; Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17
Edition. Pág. 2441, 2443
Streptococcus. Nótese las
cadenas largas.
Streptococcus β-hemolíticos del grupo
A en SBA
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
Streptococcus α-hemolíticos en SBA.
Streptococcus α-hemolíticos en SBA. Nótese la β–
hemólisis en unas áreas más intensas, debido a la
actividad combinada de las SLO y SLS.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
Prueba de sensibilidad a la bacitracina. Nótese las
reacciones de un GAS β–hemolíticos y otro GBS
β–hemolíticos.
Prueba de CAMP. Nótese la hemólisis sinérgica en
el área de intersección donde el factor CAMP y la
β-hemolisina se han difundido.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1175, 1176, 2444, 2445
Prueba de tolerancia a la sal 6.5% e
hidrólisis de bilis esculina.
Prueba de PYR
Caldo BHI. Crecimiento a 10°C y 45°C
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1176, 1177, 2444, 2445
Prueba de susceptibilidad a la
optoquina
Prueba de solubilidad a la bilis
(flecha)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1178, 2444, 2445; Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 224
https://www.youtube.com/watch?v=QIQ5g3ww8lk
Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 252; Murray P et al 2014. Microbiologia Medica 7a Edicion. Pág. 250
Secreción uretral purulenta de un
hombre con uretritis
Muestra de LCR. Nótese la distribución
espacial de los microorganismos.
Morfología de las colonias
Colonias de Neisseria gonorrhoeae en
MTM
Colonias de Neisseria meningitidis en
SBA
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2429, 2430
Tinción GRAM
Prueba de citocromo
oxidasa
Prueba de catalasa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 971, 972
Utilización de carbohidratos. Medio CTA con
G, M, S, L
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 972, 2431
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PRÁCTICA N° 5.
BACILOS GRAM POSITIVOS FORMADORES Y
NO FORMADORES DE ESPORAS
Bacillus, Listeria, Corynebacterium.
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA
SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER
: PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ
: CORNEJO ESPINOZA DIEGO
: ARANGUREN SANDOVAL YUDY
: LLACZA LADERA HENRY FRANS
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition.
Es un microorganismo grande (1 x 3 a 8 um) que se dispone de
forma aislada o en parejas de bacilos en las muestras clínicas, o
bien como cadenas largas en forma de serpentina. Anaerobio
facultativo. Gram y Catalasa (+).
B. anthracis
B. cereus
B. subtilis
✓ Coloración tipo especial para reconocimiento de
CÁPSULA BACTERIANA
El cuerpo bacteriano de Bacillus
anthracis se observa de color púrpura y
la cápsula de color claro o incoloro.
B. cereus y B. subtilis no presentan cápsula.
B. cereus B. anthracis
β-hemólisis γ-hemólisis Nótese la morfología de las
colonias
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2453, 2454
B. subtilis B. cereus
B. subtilis
B. cereus
B. anthracis
+
-
Determinar la producción de la
exoenzima gelatinasa (hidrólisis de la
gelatina
B. subtilis
B. cereus
B. anthracis
11
1. Bacillus anthracis
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Aerobio y anaerobio facultativo
• Crecimiento no exigente de colonias
• No hemolítico
• Inmóvil
• Cápsula formada por ácido poli-D-glutámico
• Sensible a penicilina
Colonias no hemolíticas de 4 a 5 mm de diámetro, con
apariencia de vidrio esmerilado y bordes irregulares.
Las colonias se extienden sobre el medio.
12
2. Bacillus cereus
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Es saprófito
• Anaerobio facultativo
• β-hemolítico
• Catalasa (+)
• Crecimiento de requerimientos no
exigentes
• Móvil, con flagelos perítricos
• No capsulado
Colonias de 3-8 mm de diámetro, beta hemolíticas con
hemólisis completa, de color gris a verde, aspecto de vidrio
esmerilado y márgenes onduladas.
Las colonias se extienden por el medio.
3. Bacillus subtilis
• Bacilos Gram (+)
• Esporulados
• Aerobia
• Es saprófito
• Comúnmente encontrada en el suelo
• β-hemolítico
• Catalasa (+)
• Móvil, resistente a penicilina
Colonias, de 2 a 4 mm de diámetro, beta hemolíticas con
hemólisis completa, que pueden ser de aspecto liso, mucoide
o rugoso; los bordes pueden ser ondulados o extendidos en el
medio y ocasionalmente dan la apariencia de cultivos mixtos
Morfología:
Las bacterias pertenecientes al género
Listeria son bacilos (cocobacilos) gram-
positivos cortos, regulares, no
esporulados ni ramificados, que suelen
observarse en disposición individual o
formando cadenas cortas.
Coco bacilos gram positivos del genero
listeria. Coloración gram
Presentan de 1 a 5 flagelos peritricos que les confieren movilidad a
28ºC.
Anaerobio Facultativo, fermentador de glucosa, lactosa, no
formador de gas.
En cultivos viejos pueden aparecer formando filamentos de 6-20
mm de longitud.
Flagelos periticos de genero listeria.
Microscopia electrónica.
L. monocytogenes se aísla fácilmente de muestras orgánicas
habitualmente estériles: Sangre, líquidos cefalorraquídeo y
amniótico, placenta y tejido fetal.
Éstas pueden ser inoculadas directamente en medios habituales
como el agar sangre. Las muestras de sangre pueden inocularse en
cualquier sistema convencional de hemocultivos.
Listeria monocytogenes. Nótese la B-hemólisis.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1261,
MOVILIDAD ( + ) CATALASA ( + ) OXIDASA ( - )
MEDIO SIM
CITRATO ( - ) UREA ( - ) ROJO METILO (+) , VOGES PROSKAUER ( +)
CALDOS ROJO DE FENOL ESCULINA ( + )
Lactosa
Sacarosa
La tinción de Gram de estas
bacterias revela la presencia de
agregados y cadenas cortas (en
forma de V o de Y, letras chinas o
empalizadas) o bacilos de forma
irregular (semejantes a un
garrote).
Agrupación bacteriana. Caracteres chinos correspondientes
al genero Corynebacterium
AGAR CHOCOLATE TELURITO DE POTASIO
(MEDIO SELECTIVO INHIBIDOR DE GRAM NEGATIVOS)
BIOTIPOS
a)Tipo gravis: colonias grandes
grisáceas.
b) Tipo mitis: colonias medianas,
circulares, lisas totalmente negras.
c) Tipo intermedius: colonias
pequeñas, lisas o rugosas con centro
negro.
Las colonias Tipo mitis
producen beta hemólisis
GRANULOS METACROMATICOS
MOVILIDAD ( - ) CATALASA ( + ) OXIDASA ( - )
MEDIO SIM
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PRÁCTICA N° 6.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACILOS
ANAERÓBICOS TOXIGÉNICOS - CLOSTRIDIUM.
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA
SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER
: PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ
: CORNEJO ESPINOZA DIEGO
: ARANGUREN SANDOVAL YUDY
: LLACZA LADERA HENRY FRANS
Clostridium spp.
• La mayoría de los Clostridium son de importancia médica, ya
que muchos de ellos producen enfermedades en el hombre;
sin embargo los más importantes son:
✓ Clostridium perfringens, produce gangrena gaseosa
✓ Clostridium tetani, causante del tétanos.
✓ Clostridium botulinum, causante del botulismo.
✓ Clostridium difficile, productor de enterocolitis tóxica.
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
Clostridium perfringens
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
MUESTRA
Gangrena gaseosa. Brazo de una mujer usuaria de drogas
ilegales, con úlceras e inflamación cuyo origen se encontró
en las huellas de inyecciones.
Celulitis por clostridios. Los clostridios se pueden introducir
en los tejidos durante la cirugía o por una herida traumática. El
paciente había sufrido una fractura abierta de la tibia. Cinco
días después de la lesión, la piel se decoloró y se formaron
ampollas y necrosis.
Kenneth R et al 2010. Microbiología Medica 5a Edición. Pág. 398; Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 330
Clostridium perfringens. Tinción de Gram de una muestra de una herida. Nótese
la forma rectangular de los bacilos, la presencia de muchos bacilos decolorados
que parecen gramnegativos y la ausencia de esporas y células sanguíneas.
Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 328
C. perfringens. Tinción Gram de un tejido muscular aspirado de un paciente con
gangrena gaseosa - mionecrosis . Nótese el fondo necrótico sin células
inflamatorias y bacilos G (+) en forma de “box car” y un bacilo G (-) que es un
Gram variable.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS
• CULTIVO EN MEDIO DE
ROBERTSON CMP O CALDO DE
TROZOS DE CARNE.
✓ El medio de carne cocida es un medio
de enriquecimiento utilizado para el
cultivo de microorganismos
anaerobios, especialmente los
pertenecientes al género Clostridium.
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de un cultivo de Caldo
tioglicolato de 24 h. Nótese la ausencia de esporas y presencia de
formas filamentosas.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473
Clostridium sp. observa de color rosado y la
espora de color verde.
Coloración de Wirtz Conklin
AISLAMIENTO
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
INCUBACIÓN EN AMBIENTE ANAERÓBICO
azul de metileno (azul en presencia de O2, incoloro en su ausencia) introducida en la jarra es el indicador de
anaerobiosis.
https://www.youtube.com/watch?v=aFDYx-7ceS8 https://www.youtube.com/watch?v=OwnGnLMNn2U
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
C. perfringens en agar sangre. Nótese la doble hemólisis. C. perfringens en agar sangre. Nótese las colonias en forma
de huevo frito con bordes irregulares.
C. perfringens en agar sangre de 24 h. Nótese la zona de doble hemólisis,
interna y externa.
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473
C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de A. sangre de 24 h. Nótese la
ausencia de esporas y células de color rojo.
MICROSCOPÍA
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
C. perfringens en agar SPS. Nótese las
colonias negras características.
C. perfringens agar yema de huevo. Nótese la
producción de lipasa
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
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PRÁCTICA N° 7
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE
BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES.
Mycobacterium tuberculosis
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA
SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER
: PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ
: CORNEJO ESPINOZA DIEGO
: ARANGUREN SANDOVAL YUDY
: LLACZA LADERA HENRY FRANS
Mycobacterium tuberculosis
TIPOS DE MUESTRA
PULMONARES EXTRAPULMONARES
Esputo
ORINA
EXUDADOS
SANGRE
TEJIDOS
2.5
LCR, SINOVIAL, PLEURAL
JUGO GÁSTRICO
MUESTRAS
• Una buena muestra es aquella que proviene del sitio de la lesión,
en cantidad suficiente, recolectada en un envase adecuado y
conservada correctamente.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1795
ESPUTO CALIDAD DE MUESTRA
Saliva Mucopurulento Hemoptoica Hidrolizado
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Tratar la muestra con N-
acetil L-cistina NaOH
(NALC-NaOH)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1797
Descontaminar con
NaOH 6%
PREPARACIÓN Y FIJACIÓN DE LA
MUESTRA
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 34
COLORACIÓN ZIEHL-NEELSEN
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 38
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Identifique las características morfológicas del bacilo
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 43
LECTURA E INFORME DE RESULTADOS
Colocar una gota de aceite de inmersión
Realizar el recorrido en línea recta y sistemático.
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 44
EXTENDIDOS
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 45
INFORME DE RESULTADOS
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 45, 46
ESCALA PARA EL INFORME DE
RESULTADOS
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 47
REGISTRO E INFORME DE RESULTADOS
• El informe y registro mediante la escala semicuantitativa estandarizada asegura la
reproducibilidad de los resultados y permite evaluar:
✓ La gravedad de la enfermedad
✓ El grado de infectividad del paciente
✓ La evolución del paciente bajo tratamiento
• Registrar inmediatamente el resultado de la
lectura en el Registro del Laboratorio.
Marcar los resultados positivos en rojo, para
identificarlos rápidamente.
• Escribir el resultado en el formulario
adoptado para el informe
• Verificar que el informe contenga:
❑ El nombre del paciente
❑ El número de identificación de la muestra
❑ El método de tinción utilizado
❑ El resultado del examen microscópico
expresado según la escala estandarizada
❑ La fecha
❑ Toda observación que considere relevante,
por ejemplo la calidad de la muestra
inadecuada Firma del responsable del
examen microscópico.
INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 52
https://www.youtube.com/watch?v=H3APlERaTtg
CULTIVO
Agar Middlebrook 7H10 con hidrazida de ácido tiofeno 2-
carboxílico (T2H). Nótese el crecimiento de 3 cepas
diferentes de M. tuberculosis en 3 cuadrantes. M. bovis no
creció en un cuadrante.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481
Agar Middlebrook 7H10. Nótese las colonias típicas con
apariencia áspera y beige de M. tuberculosis después de 25 d
de incubación a 35oC en CO2 al 10%.
Medio Lowenstein-Jensen. Nótese las colonias atípicas
de consistencia rugosa de M. tuberculosis después de 22
d de incubación a 35oC con CO2 al 10%.
Lowestein-Jensen
El verde de malaquita inhibidor
La glicerina estimula el crecimiento de M.
tuberculosis.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481
SENSIBILIDAD DEL DIAGNÓSTICO
Baciloscopía con
el microscopio
Cultivos para ver
crecimiento
Métodos de
biología
molecular
Detecta
±90%
Detecta
±60%
Detecta
±80%
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PRÁCTICA N° 8.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS Y
TÉCNICAS DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN:
COPROCULTIVO.
DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA
SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER
: PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ
: CORNEJO ESPINOZA DIEGO
: ARANGUREN SANDOVAL YUDY
: LLACZA LADERA HENRY FRANS
Enterobacterias
Son Gram-negativos y tienen unos requerimientos nutricionales
sencillos:
• Fermentan la glucosa,
• Reducen los nitratos,
• Son catalasa-positivos y
• Oxidasa-negativos; para diferenciar a las enterobacterias de otros
bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores (Vibrio
y Pseudomonas)
Características de detección
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 378, 2390-2392
Fermentación de glucosa Citocromo oxidasa Reducción de nitratos a nitritos
Fermentación de carbohidratos
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 382, 2398, 2392
Agar KIA y SIM Agar TSI
Aislamiento primario
Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento y
diferencie.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394
Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento de E.
coli.
Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli y
Shigella sp.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394
Agar XLD. Nótese el crecimiento de E. coli Agar XLD. Nótese las especies no fermentadoras de
lactosa y la pigmentación
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
Agar XLD. Nótese el crecimiento de
Salmonella sp. y E. coli.
Agar XLD. Nótese el crecimiento de Proteus
sp.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
Agar HE. Nótese el crecimiento de E.
coli.
Agar HE. Nótese el crecimiento de
Enterobacterias no fermentadoras de
lactosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
Agar SS. Nótese el crecimiento de
Salmonella sp.
Agar SS. Nótese el crecimiento de las
especies fermentadoras de lactosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
Identificación diferencial
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. , 2397- 2398
IMVIC. E. coli. IMVIC. Klebsiella / Enterobacter.
Agar LIA. Nótese las diferencias entre la
desaminación y descarboxilación de lisina, y la
producción de H2S.
Medio motilidad. Nótese el crecimiento de los
microorganismos móviles e inmóviles.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. , 2397- 2398
PRÁCTICA N° 9.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
DE Pseudomonas aeruginosa, Vibrio
cholerae.
Pseudomonas aeruginosa
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
▪ Tipo de muestra: quemaduras severas, pus, sangre, orina,
LCR, lavados bronquiales, esputo y tracto genital femenino.
Lactante con ectima gangrenoso en región crural
izquierda y muslo derecho en fase avanzada
Lactante con ectima gangrenoso que provoca
solución de continuidad en “sacaboacado”
Autopsia de pulmones de un adulto joven.
Observe el proceso inflamatorio extenso y
una biopelícula viscosa
Coloración Gram
Bacilos pequeños Gram (-)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615
Medios de aislamiento
Caldo nutritivo
Lectura:
Pigmento de verde y olor
característico a uvas
Agar nutritivo
PIOCIANINA
▪ Siembra por dispersión y agotamiento
▪ Incubadora a 37°C x 24-48 h
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2404
• Colonias grandes, brillantes, confluentes, de borde continuo o a veces ondulado, con
un centro opaco y de consistencia mucoide
• El pigmento azul verdoso (piocianina) se difunde en el medio
Aislamiento selectivo
Agar cetrimide
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406, 2407
• Colonias lactosa positiva, color púrpura oscuro: E. coli.
• Colonias lactosa negativa, color azul turquesa difusible:
P. aeruginosa, productora de piocianina
Agar Mac Conkey
• Colonias mucoides de P. aeruginosa.
• Muestra de esputo, paciente con fibrosis quística.
• Nótese la pigmentación en algunas áreas.
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406
• Colonias grandes B-hemolíticas con periferia extendida.
• Observe el brillo metálico en áreas con mayor crecimiento.
• Colonias presentan olor dulce a uva
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
• Prueba de diferenciación en KIA entre un
microorganismo fermentador y no fermentador
• Se demuestra la actividad de la citocromo oxidasa.
Prueba de la Citocromo-oxidasa
Detección de fermentación
Utilización oxidativa de la
glucosa
• Medio Hugh Leifson. Identifica al microorganismo
capaz de oxidar la glucosa.
Prueba de motilidad
• Medio motilidad con TTC. Los microorganismos móviles
reducen el TTC a lo largo de su crecimiento,
observándose un color rojo.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
PIOCIANINA: Color azul verdoso y soluble en cloroformo
Caldo Tripticasa Soya (TSB) + cloroformo
incuba 24 h a 37 °C Se agita y deja en reposo
Producción de pigmentos
• Tubos con agar Flo y Tech bajo luz visible. Producción de
pioverdina (fluoresceína) y piocianina, ambas producidas
por P. aeruginosa.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
Asilamiento e identificación
de Vibrio cholerae
VIDEO: Motilidad de Vibrio
https://www.youtube.com/watch?v=Uej7_vFOjNU
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
Especies del género Vibrio
Vibrio alginolyticus
Responsable de otitis
externa, infección de
heridas cutáneas, tejidos
blandos.
TCBS: colonias amarillas
Vibrio cholerae
Agente etiológico del
cólera epidémico y
pandémico en los
humanos.
La última pandemia fue
producida por el biotipo
El Tor, serotipo Ogawa
TCBS: colonias amarillas
Vibrio
parahaemolyticus
Causante de
gastroenteritis aguda en
humanos después de la
ingestión de mariscos
contaminados
TCBS: colonias verdes
Vibrio vulnificus
Causante de
bacteriemia, infecciones
en heridas cutáneas muy
dolorosas, con necrosis
cutáneas, celulitis.
TCBS: colonias verdes
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
DIRECTO
• Muestras: heces, sangre, heridas.
• Examen directo: campo oscuro, Inmunofluorescencia.
• Cultivo: medio enriquecido (agua de peptona alcalina pH
8.5) y medios selectivos (agar TCBS, agar TTG, agar
Macconkey) y no selectivos (agar gelatina, agar de
extracto de carne).
• Identificación:
• Pruebas bioquímicas
• Serológica: aglutinación (antisueros serogrupos O1 y
O 139)
• Hibridación con sondas de ADN y PCR.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
PROCEDIMIENTO
• Cultivar el hisopo en un tubo de agua peptonada
alcalina (APA). El APA se incuba a 37°C durante 6 a
8 horas.
• Siembran las placas de TCBS y agar TSA
• Leer las placas de agar TSA Leer las placas de agar
TCBS
• Las colonias típicas son amarillas planas o
ligeramente convexas.
• Subcultivar 2 colonias sospechosas de Vibrio
cholerae de las placas de agar TSA y/o TCBS en
estrías de agar TSA, agar TSI, agar LIA y en caldo
triptofano.
• Leer las reacciones bioquímicas: TSI, LIA e indol del
triptofano, si son compatibles con, Vibrio cholerae.
• Realizar la prueba de la oxidasa y si ésta es positiva
se siembran las pruebas bioquímicas
complementarias y se hace la serotipificación.
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
Coloración Gram
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
Agar TCBS
Sacarosa (+)
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
Agar TSI
A/A
Gas (-)
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Agar LIA
K/K
Medios diferenciales
Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
Rojo de metilo (RM)
Vibrio cholerae
(* 10- 50% cepas)
Vibrio
parahaemolyticus
Voges Proskauer (VP)
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
(-)
(-)
(+)
Agar citrato de Simmons
Medio SIM
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
sin cambio de color o
amarillo
Ureasa -
Prueba de la ureasa
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Prueba de Catalasa
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
(+) Vibrio cholerae
(-) Vibrio parahaemolyticus
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  • 1. ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA CICLO : IV SEMESTRE ACADEMICO : 2022-2
  • 2. UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA F ACUL T ADDECIENCIASDELASALUD ESCUELA PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA “Dr .Wilfredo ErwinGardini T uesta” ACREDITADAPORSINEACE REACREDIT ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV PRÁCTICA N° 4. COCOS GRAM POSITIVOS Y GRAM NEGATIVOS. Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Neisseria. DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER : PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ : CORNEJO ESPINOZA DIEGO : ARANGUREN SANDOVAL YUDY : LLACZA LADERA HENRY FRANS
  • 3.
  • 4. Paciente adulto con celulitis estafilocócica en el labio superior. Paciente adulto con lesiones vesiculares ampollosas del estafilocócico facial. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436 Recién nacido con síndrome de piel escaldada estafilocócica.
  • 5. Coloración Gram de una lesión de celulitis estafilocócica. Cocos agrupados G (+) extracelulares. Nótese los leucocitos PMN. Coloración Gram procedente de un cultivo. Nótese los racimos de uva. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436
  • 6. Colonias de S. aureus en agar sangre de carnero. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1052, 2436 Colonias de S. aureus en agar manitol salado.
  • 7. Colonias de Micrococcus luteus en agar sangre de carnero. Colonias de Staphylococcus epidermidis en agar sangre de carnero. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2436, 2440
  • 8. Prueba de catalasa positiva Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1053, 2436
  • 9. S. saprophyticus. Prueba de sensibilidad a la novobiocina y a la furazolidona. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1060, 2438, 2440 Prueba de coagulasa en tubo.
  • 10.
  • 11. Paciente con erisipela por GAS β-hemolíticos. Nótese las lesiones ampollosas. Exudado faríngeo Exudado vaginal Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
  • 12. Streptococcus en hemocultivo. Cocos G (+) en cadenas Streptococcus pneumoniae en esputo. Cocos G (+) en forma de lanceta. Nótese la degeneración de los PMN. Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 215, 222; Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443 Streptococcus. Nótese las cadenas largas.
  • 13. Streptococcus β-hemolíticos del grupo A en SBA Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443 Streptococcus α-hemolíticos en SBA.
  • 14. Streptococcus α-hemolíticos en SBA. Nótese la β– hemólisis en unas áreas más intensas, debido a la actividad combinada de las SLO y SLS. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2441, 2443
  • 15. Prueba de sensibilidad a la bacitracina. Nótese las reacciones de un GAS β–hemolíticos y otro GBS β–hemolíticos. Prueba de CAMP. Nótese la hemólisis sinérgica en el área de intersección donde el factor CAMP y la β-hemolisina se han difundido. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1175, 1176, 2444, 2445
  • 16. Prueba de tolerancia a la sal 6.5% e hidrólisis de bilis esculina. Prueba de PYR Caldo BHI. Crecimiento a 10°C y 45°C Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1176, 1177, 2444, 2445
  • 17. Prueba de susceptibilidad a la optoquina Prueba de solubilidad a la bilis (flecha) Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1178, 2444, 2445; Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 224
  • 19.
  • 20. Jawetz 2016. Medical Microbiology ESP. Pág. 252; Murray P et al 2014. Microbiologia Medica 7a Edicion. Pág. 250 Secreción uretral purulenta de un hombre con uretritis Muestra de LCR. Nótese la distribución espacial de los microorganismos.
  • 21. Morfología de las colonias Colonias de Neisseria gonorrhoeae en MTM Colonias de Neisseria meningitidis en SBA Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2429, 2430
  • 22. Tinción GRAM Prueba de citocromo oxidasa Prueba de catalasa Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 971, 972
  • 23. Utilización de carbohidratos. Medio CTA con G, M, S, L Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 972, 2431
  • 24.
  • 25. ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA CICLO : IV SEMESTRE ACADEMICO : 2022-II
  • 26. UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA F ACUL T ADDECIENCIASDELASALUD ESCUELA PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA “Dr .Wilfredo ErwinGardini T uesta” ACREDITADAPORSINEACE REACREDIT ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV PRÁCTICA N° 5. BACILOS GRAM POSITIVOS FORMADORES Y NO FORMADORES DE ESPORAS Bacillus, Listeria, Corynebacterium. DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER : PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ : CORNEJO ESPINOZA DIEGO : ARANGUREN SANDOVAL YUDY : LLACZA LADERA HENRY FRANS
  • 27. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Es un microorganismo grande (1 x 3 a 8 um) que se dispone de forma aislada o en parejas de bacilos en las muestras clínicas, o bien como cadenas largas en forma de serpentina. Anaerobio facultativo. Gram y Catalasa (+).
  • 29. ✓ Coloración tipo especial para reconocimiento de CÁPSULA BACTERIANA
  • 30. El cuerpo bacteriano de Bacillus anthracis se observa de color púrpura y la cápsula de color claro o incoloro. B. cereus y B. subtilis no presentan cápsula.
  • 31. B. cereus B. anthracis β-hemólisis γ-hemólisis Nótese la morfología de las colonias Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2453, 2454
  • 32. B. subtilis B. cereus
  • 33. B. subtilis B. cereus B. anthracis + -
  • 34. Determinar la producción de la exoenzima gelatinasa (hidrólisis de la gelatina B. subtilis B. cereus B. anthracis
  • 35. 11 1. Bacillus anthracis • Bacilos Gram (+) • Esporulados • Aerobio y anaerobio facultativo • Crecimiento no exigente de colonias • No hemolítico • Inmóvil • Cápsula formada por ácido poli-D-glutámico • Sensible a penicilina Colonias no hemolíticas de 4 a 5 mm de diámetro, con apariencia de vidrio esmerilado y bordes irregulares. Las colonias se extienden sobre el medio.
  • 36. 12 2. Bacillus cereus • Bacilos Gram (+) • Esporulados • Es saprófito • Anaerobio facultativo • β-hemolítico • Catalasa (+) • Crecimiento de requerimientos no exigentes • Móvil, con flagelos perítricos • No capsulado Colonias de 3-8 mm de diámetro, beta hemolíticas con hemólisis completa, de color gris a verde, aspecto de vidrio esmerilado y márgenes onduladas. Las colonias se extienden por el medio.
  • 37. 3. Bacillus subtilis • Bacilos Gram (+) • Esporulados • Aerobia • Es saprófito • Comúnmente encontrada en el suelo • β-hemolítico • Catalasa (+) • Móvil, resistente a penicilina Colonias, de 2 a 4 mm de diámetro, beta hemolíticas con hemólisis completa, que pueden ser de aspecto liso, mucoide o rugoso; los bordes pueden ser ondulados o extendidos en el medio y ocasionalmente dan la apariencia de cultivos mixtos
  • 38. Morfología: Las bacterias pertenecientes al género Listeria son bacilos (cocobacilos) gram- positivos cortos, regulares, no esporulados ni ramificados, que suelen observarse en disposición individual o formando cadenas cortas. Coco bacilos gram positivos del genero listeria. Coloración gram
  • 39. Presentan de 1 a 5 flagelos peritricos que les confieren movilidad a 28ºC. Anaerobio Facultativo, fermentador de glucosa, lactosa, no formador de gas. En cultivos viejos pueden aparecer formando filamentos de 6-20 mm de longitud. Flagelos periticos de genero listeria. Microscopia electrónica.
  • 40. L. monocytogenes se aísla fácilmente de muestras orgánicas habitualmente estériles: Sangre, líquidos cefalorraquídeo y amniótico, placenta y tejido fetal. Éstas pueden ser inoculadas directamente en medios habituales como el agar sangre. Las muestras de sangre pueden inocularse en cualquier sistema convencional de hemocultivos. Listeria monocytogenes. Nótese la B-hemólisis. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1261,
  • 41. MOVILIDAD ( + ) CATALASA ( + ) OXIDASA ( - ) MEDIO SIM
  • 42. CITRATO ( - ) UREA ( - ) ROJO METILO (+) , VOGES PROSKAUER ( +)
  • 43. CALDOS ROJO DE FENOL ESCULINA ( + ) Lactosa Sacarosa
  • 44. La tinción de Gram de estas bacterias revela la presencia de agregados y cadenas cortas (en forma de V o de Y, letras chinas o empalizadas) o bacilos de forma irregular (semejantes a un garrote). Agrupación bacteriana. Caracteres chinos correspondientes al genero Corynebacterium
  • 45.
  • 46. AGAR CHOCOLATE TELURITO DE POTASIO (MEDIO SELECTIVO INHIBIDOR DE GRAM NEGATIVOS) BIOTIPOS a)Tipo gravis: colonias grandes grisáceas. b) Tipo mitis: colonias medianas, circulares, lisas totalmente negras. c) Tipo intermedius: colonias pequeñas, lisas o rugosas con centro negro.
  • 47. Las colonias Tipo mitis producen beta hemólisis
  • 49. MOVILIDAD ( - ) CATALASA ( + ) OXIDASA ( - ) MEDIO SIM
  • 50.
  • 51.
  • 52. ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA CICLO : IV SEMESTRE ACADEMICO : 2022-II
  • 53. UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA F ACUL T ADDECIENCIASDELASALUD ESCUELA PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA “Dr .Wilfredo ErwinGardini T uesta” ACREDITADAPORSINEACE REACREDIT ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV PRÁCTICA N° 6. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACILOS ANAERÓBICOS TOXIGÉNICOS - CLOSTRIDIUM. DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER : PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ : CORNEJO ESPINOZA DIEGO : ARANGUREN SANDOVAL YUDY : LLACZA LADERA HENRY FRANS
  • 54. Clostridium spp. • La mayoría de los Clostridium son de importancia médica, ya que muchos de ellos producen enfermedades en el hombre; sin embargo los más importantes son: ✓ Clostridium perfringens, produce gangrena gaseosa ✓ Clostridium tetani, causante del tétanos. ✓ Clostridium botulinum, causante del botulismo. ✓ Clostridium difficile, productor de enterocolitis tóxica. https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
  • 56. MUESTRA Gangrena gaseosa. Brazo de una mujer usuaria de drogas ilegales, con úlceras e inflamación cuyo origen se encontró en las huellas de inyecciones. Celulitis por clostridios. Los clostridios se pueden introducir en los tejidos durante la cirugía o por una herida traumática. El paciente había sufrido una fractura abierta de la tibia. Cinco días después de la lesión, la piel se decoloró y se formaron ampollas y necrosis. Kenneth R et al 2010. Microbiología Medica 5a Edición. Pág. 398; Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 330
  • 57. Clostridium perfringens. Tinción de Gram de una muestra de una herida. Nótese la forma rectangular de los bacilos, la presencia de muchos bacilos decolorados que parecen gramnegativos y la ausencia de esporas y células sanguíneas. Murray P et al 2014. Microbiología Medica 7a Edición. Pág. 328
  • 58. C. perfringens. Tinción Gram de un tejido muscular aspirado de un paciente con gangrena gaseosa - mionecrosis . Nótese el fondo necrótico sin células inflamatorias y bacilos G (+) en forma de “box car” y un bacilo G (-) que es un Gram variable. Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
  • 59. MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS • CULTIVO EN MEDIO DE ROBERTSON CMP O CALDO DE TROZOS DE CARNE. ✓ El medio de carne cocida es un medio de enriquecimiento utilizado para el cultivo de microorganismos anaerobios, especialmente los pertenecientes al género Clostridium. https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y
  • 60. C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de un cultivo de Caldo tioglicolato de 24 h. Nótese la ausencia de esporas y presencia de formas filamentosas. Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473
  • 61. Clostridium sp. observa de color rosado y la espora de color verde. Coloración de Wirtz Conklin
  • 63. INCUBACIÓN EN AMBIENTE ANAERÓBICO
  • 64. azul de metileno (azul en presencia de O2, incoloro en su ausencia) introducida en la jarra es el indicador de anaerobiosis.
  • 66. https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y C. perfringens en agar sangre. Nótese la doble hemólisis. C. perfringens en agar sangre. Nótese las colonias en forma de huevo frito con bordes irregulares.
  • 67. C. perfringens en agar sangre de 24 h. Nótese la zona de doble hemólisis, interna y externa. Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473, 2474
  • 68. Koneman 2017. Diagnóstico microbiológico. Pág. 1532, 2473 C. perfringens. Tinción Gram, proveniente de A. sangre de 24 h. Nótese la ausencia de esporas y células de color rojo. MICROSCOPÍA
  • 69. https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/15458/OrtegonMejiaAngelaMaria2015.pdf?sequence=1&isAllowed=y C. perfringens en agar SPS. Nótese las colonias negras características. C. perfringens agar yema de huevo. Nótese la producción de lipasa
  • 71.
  • 72. ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA CICLO : IV SEMESTRE ACADEMICO : 2022-II
  • 73. UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA F ACUL T ADDECIENCIASDELASALUD ESCUELA PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA “Dr .Wilfredo ErwinGardini T uesta” ACREDITADAPORSINEACE REACREDIT ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV PRÁCTICA N° 7 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES. Mycobacterium tuberculosis DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER : PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ : CORNEJO ESPINOZA DIEGO : ARANGUREN SANDOVAL YUDY : LLACZA LADERA HENRY FRANS
  • 75. TIPOS DE MUESTRA PULMONARES EXTRAPULMONARES Esputo ORINA EXUDADOS SANGRE TEJIDOS 2.5 LCR, SINOVIAL, PLEURAL JUGO GÁSTRICO
  • 76. MUESTRAS • Una buena muestra es aquella que proviene del sitio de la lesión, en cantidad suficiente, recolectada en un envase adecuado y conservada correctamente. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1795
  • 77. ESPUTO CALIDAD DE MUESTRA Saliva Mucopurulento Hemoptoica Hidrolizado
  • 78. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Tratar la muestra con N- acetil L-cistina NaOH (NALC-NaOH) Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 1797 Descontaminar con NaOH 6%
  • 79. PREPARACIÓN Y FIJACIÓN DE LA MUESTRA INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 34
  • 80. COLORACIÓN ZIEHL-NEELSEN INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 38
  • 81. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Identifique las características morfológicas del bacilo INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 43
  • 82. LECTURA E INFORME DE RESULTADOS Colocar una gota de aceite de inmersión Realizar el recorrido en línea recta y sistemático. INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 44
  • 83. EXTENDIDOS INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 45
  • 84. INFORME DE RESULTADOS INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 45, 46
  • 85. ESCALA PARA EL INFORME DE RESULTADOS INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 47
  • 86. REGISTRO E INFORME DE RESULTADOS • El informe y registro mediante la escala semicuantitativa estandarizada asegura la reproducibilidad de los resultados y permite evaluar: ✓ La gravedad de la enfermedad ✓ El grado de infectividad del paciente ✓ La evolución del paciente bajo tratamiento • Registrar inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del Laboratorio. Marcar los resultados positivos en rojo, para identificarlos rápidamente. • Escribir el resultado en el formulario adoptado para el informe • Verificar que el informe contenga: ❑ El nombre del paciente ❑ El número de identificación de la muestra ❑ El método de tinción utilizado ❑ El resultado del examen microscópico expresado según la escala estandarizada ❑ La fecha ❑ Toda observación que considere relevante, por ejemplo la calidad de la muestra inadecuada Firma del responsable del examen microscópico. INS. 2018. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis.. Pág. 52
  • 88. CULTIVO Agar Middlebrook 7H10 con hidrazida de ácido tiofeno 2- carboxílico (T2H). Nótese el crecimiento de 3 cepas diferentes de M. tuberculosis en 3 cuadrantes. M. bovis no creció en un cuadrante. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481 Agar Middlebrook 7H10. Nótese las colonias típicas con apariencia áspera y beige de M. tuberculosis después de 25 d de incubación a 35oC en CO2 al 10%.
  • 89. Medio Lowenstein-Jensen. Nótese las colonias atípicas de consistencia rugosa de M. tuberculosis después de 22 d de incubación a 35oC con CO2 al 10%. Lowestein-Jensen El verde de malaquita inhibidor La glicerina estimula el crecimiento de M. tuberculosis. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 2479, 2480, 2481
  • 90. SENSIBILIDAD DEL DIAGNÓSTICO Baciloscopía con el microscopio Cultivos para ver crecimiento Métodos de biología molecular Detecta ±90% Detecta ±60% Detecta ±80%
  • 91.
  • 92. ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA CICLO : IV SEMESTRE ACADEMICO : 2022-II
  • 93. UNIVERSIDADPRIVADASANJUANBAUTISTA F ACUL T ADDECIENCIASDELASALUD ESCUELA PROFESIONALDEMEDICINAHUMANA “Dr .Wilfredo ErwinGardini T uesta” ACREDITADAPORSINEACE REACREDIT ADAINTERNACIONALMENTEPORRIEV PRÁCTICA N° 8. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN: COPROCULTIVO. DOCENTES RESPONSABLES DE PRÁCTICA SEDE CHORRILLOS : GAMBOA RUIZ ROGER : PRIETO MARCOS JUAN JOSÉ : CORNEJO ESPINOZA DIEGO : ARANGUREN SANDOVAL YUDY : LLACZA LADERA HENRY FRANS
  • 94. Enterobacterias Son Gram-negativos y tienen unos requerimientos nutricionales sencillos: • Fermentan la glucosa, • Reducen los nitratos, • Son catalasa-positivos y • Oxidasa-negativos; para diferenciar a las enterobacterias de otros bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores (Vibrio y Pseudomonas)
  • 95. Características de detección Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 378, 2390-2392 Fermentación de glucosa Citocromo oxidasa Reducción de nitratos a nitritos
  • 96. Fermentación de carbohidratos Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 382, 2398, 2392 Agar KIA y SIM Agar TSI
  • 97. Aislamiento primario Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento y diferencie. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394 Agar Mc Conckey. Nótese el crecimiento de E. coli.
  • 98. Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli Agar EMB. Nótese el crecimiento de E. coli y Shigella sp. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2393- 2394
  • 99. Agar XLD. Nótese el crecimiento de E. coli Agar XLD. Nótese las especies no fermentadoras de lactosa y la pigmentación Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
  • 100. Agar XLD. Nótese el crecimiento de Salmonella sp. y E. coli. Agar XLD. Nótese el crecimiento de Proteus sp. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
  • 101. Agar HE. Nótese el crecimiento de E. coli. Agar HE. Nótese el crecimiento de Enterobacterias no fermentadoras de lactosa Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
  • 102. Agar SS. Nótese el crecimiento de Salmonella sp. Agar SS. Nótese el crecimiento de las especies fermentadoras de lactosa Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. 386-389, 2394- 2396
  • 103. Identificación diferencial Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. , 2397- 2398 IMVIC. E. coli. IMVIC. Klebsiella / Enterobacter.
  • 104. Agar LIA. Nótese las diferencias entre la desaminación y descarboxilación de lisina, y la producción de H2S. Medio motilidad. Nótese el crecimiento de los microorganismos móviles e inmóviles. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 edition. Pág. , 2397- 2398
  • 105.
  • 106.
  • 107.
  • 108. PRÁCTICA N° 9. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE Pseudomonas aeruginosa, Vibrio cholerae.
  • 109. Pseudomonas aeruginosa Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 1051, 1052, 2436 ▪ Tipo de muestra: quemaduras severas, pus, sangre, orina, LCR, lavados bronquiales, esputo y tracto genital femenino. Lactante con ectima gangrenoso en región crural izquierda y muslo derecho en fase avanzada Lactante con ectima gangrenoso que provoca solución de continuidad en “sacaboacado” Autopsia de pulmones de un adulto joven. Observe el proceso inflamatorio extenso y una biopelícula viscosa
  • 110. Coloración Gram Bacilos pequeños Gram (-) Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615
  • 111. Medios de aislamiento Caldo nutritivo Lectura: Pigmento de verde y olor característico a uvas Agar nutritivo PIOCIANINA ▪ Siembra por dispersión y agotamiento ▪ Incubadora a 37°C x 24-48 h Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2404
  • 112. • Colonias grandes, brillantes, confluentes, de borde continuo o a veces ondulado, con un centro opaco y de consistencia mucoide • El pigmento azul verdoso (piocianina) se difunde en el medio Aislamiento selectivo Agar cetrimide
  • 113. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406, 2407 • Colonias lactosa positiva, color púrpura oscuro: E. coli. • Colonias lactosa negativa, color azul turquesa difusible: P. aeruginosa, productora de piocianina Agar Mac Conkey • Colonias mucoides de P. aeruginosa. • Muestra de esputo, paciente con fibrosis quística. • Nótese la pigmentación en algunas áreas. Agar Mac Conkey
  • 114. Agar Sangre Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2406 • Colonias grandes B-hemolíticas con periferia extendida. • Observe el brillo metálico en áreas con mayor crecimiento. • Colonias presentan olor dulce a uva
  • 115.
  • 116. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404 • Prueba de diferenciación en KIA entre un microorganismo fermentador y no fermentador • Se demuestra la actividad de la citocromo oxidasa. Prueba de la Citocromo-oxidasa Detección de fermentación
  • 117. Utilización oxidativa de la glucosa • Medio Hugh Leifson. Identifica al microorganismo capaz de oxidar la glucosa. Prueba de motilidad • Medio motilidad con TTC. Los microorganismos móviles reducen el TTC a lo largo de su crecimiento, observándose un color rojo. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
  • 118. PIOCIANINA: Color azul verdoso y soluble en cloroformo Caldo Tripticasa Soya (TSB) + cloroformo incuba 24 h a 37 °C Se agita y deja en reposo
  • 119. Producción de pigmentos • Tubos con agar Flo y Tech bajo luz visible. Producción de pioverdina (fluoresceína) y piocianina, ambas producidas por P. aeruginosa. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 613,614,615, 2403, 2404
  • 121. VIDEO: Motilidad de Vibrio https://www.youtube.com/watch?v=Uej7_vFOjNU Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 122. Especies del género Vibrio Vibrio alginolyticus Responsable de otitis externa, infección de heridas cutáneas, tejidos blandos. TCBS: colonias amarillas Vibrio cholerae Agente etiológico del cólera epidémico y pandémico en los humanos. La última pandemia fue producida por el biotipo El Tor, serotipo Ogawa TCBS: colonias amarillas Vibrio parahaemolyticus Causante de gastroenteritis aguda en humanos después de la ingestión de mariscos contaminados TCBS: colonias verdes Vibrio vulnificus Causante de bacteriemia, infecciones en heridas cutáneas muy dolorosas, con necrosis cutáneas, celulitis. TCBS: colonias verdes Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 123. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DIRECTO • Muestras: heces, sangre, heridas. • Examen directo: campo oscuro, Inmunofluorescencia. • Cultivo: medio enriquecido (agua de peptona alcalina pH 8.5) y medios selectivos (agar TCBS, agar TTG, agar Macconkey) y no selectivos (agar gelatina, agar de extracto de carne). • Identificación: • Pruebas bioquímicas • Serológica: aglutinación (antisueros serogrupos O1 y O 139) • Hibridación con sondas de ADN y PCR. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 124. PROCEDIMIENTO • Cultivar el hisopo en un tubo de agua peptonada alcalina (APA). El APA se incuba a 37°C durante 6 a 8 horas. • Siembran las placas de TCBS y agar TSA • Leer las placas de agar TSA Leer las placas de agar TCBS • Las colonias típicas son amarillas planas o ligeramente convexas. • Subcultivar 2 colonias sospechosas de Vibrio cholerae de las placas de agar TSA y/o TCBS en estrías de agar TSA, agar TSI, agar LIA y en caldo triptofano. • Leer las reacciones bioquímicas: TSI, LIA e indol del triptofano, si son compatibles con, Vibrio cholerae. • Realizar la prueba de la oxidasa y si ésta es positiva se siembran las pruebas bioquímicas complementarias y se hace la serotipificación. Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 125. Coloración Gram Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 126. Agar TCBS Sacarosa (+) Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 127. Agar TSI A/A Gas (-) Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Agar LIA K/K Medios diferenciales Konemans. 2017. Diagnostic Microbiology 17 Edition. Pág. 2415,2416
  • 128. Rojo de metilo (RM) Vibrio cholerae (* 10- 50% cepas) Vibrio parahaemolyticus Voges Proskauer (VP) Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus (-) (-) (+)
  • 129. Agar citrato de Simmons Medio SIM Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus
  • 130. sin cambio de color o amarillo Ureasa - Prueba de la ureasa Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus
  • 131. Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Prueba de Catalasa Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus (+) Vibrio cholerae (-) Vibrio parahaemolyticus Pruebas bioquímicas