1. PRODUCTOS NATURALES, VOL. IV: PERSPECTIVAS BIOTECNOLOGICAS
COPYRIGHT © 1999 UAM-IZTAPALAPA
ISBN 970-654-441-0
EFECTO ANTICOAGULANTE DE LA ESTIRILPIRONA 4’-HIDROXI-DEHIDROKAVAINA
AISLADA DE Brongniartia intermedia
J. Salinas Sánchez, R. Reyes Chilpa1, G.A. Magos Guerrero2
y M. Jimenez Estrada1
UAM-Xochimilco, Calzada del Hueso 1100, Col. Villa Quietud, Del. Coyoacán 04960 México, D.F.
1Instituto de Química de la UNAM, Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, Coyoacán 04510 México, D.F.
Tel. 56-22-44-30 e-mail: chilpa@servidor.unam.mx, mjimenez@servidor.unam.mx y 2Facultad de
Medicina de la UNAM Ciudad Universitaria, Coyoacán 04510 México, D.F.
Las estirilpironas son productos naturales típicos de plantas
pertenencientes a las Piperaceas y Lauraceas, pero eventualmente
también se encuentran en Asteraceas y Leguminosas. Este tipo de
compuestos poseen actividad ansiolítica, relajante, espasmolítica y
anestésica local, también se ha demostrado que presentan actividad
antiplaquetaria. Recientemente la industria farmacéutica empezó a
producir fitofármacos ansiolíticos a partir del extracto seco de Piper
methysticum. Esta especie es originaria de 0ceanía y posee una alta
concentración de estirilpironas. El objetivo del presente estudio fue
aislar estirilpironas de una leguminosa mexicana, así como evaluar su
posible efecto anticoagulante. Del extracto metanólico de las raíces de
Brongniartia intemedia se aislaron e identificaron cuatro compuestos
por RMN1H, RMN13C, IR, UV y EM. Se obtuvo: una estirilpirona, 4´-
hidroxi-dehidrokavaina, un derivado del ácido nervónico, el 3,5-diprenil-p-
hidroxi-cinamato de metilo, dos esteroles, b-sitosterol y estigmasterol,
así como dos compuestos aún no identificados. Las propiedades
anticoagulantes de la 4´-hidroxi-dehidrokavaina no han sido evaluadas,
por lo tanto se decidió estudiarlas in vivo con ratones (cepas CD-1 y
takoni). La 4´-hidroxi-dehidrokavaina se administró vía subcutánea. La
significancia estadística de los resultados fue evaluada utilizando la
prueba U Mann-Whitney. La 4´-hidroxi-dehidrokavaina mostró un efecto
anticoagulante a la dosis de 100 mg/kg sin que se manifestara algún
efecto tóxico o letal. El efecto anticoagulante fue estadísticamente
significativo en el segundo día después de la administración. Estos
resultados se compararon con los mostrados por dos anticoagulantes
utilizados en la terapéutica: warfarina y heparina. La actividad retardada
de la 4´-hidroxi-dehidrokavaina fue semejante a la mostrada por la
warfarina (31 mg/Kg) y fue diferente a la de la heparina (100 U.I.). Lo
anterior sugiere que el mecanismo de acción de la 4´-hidroxi-dehidrokavaina
podrá ser semejante al de la warfarina y podrá deberse
a algunas semejanzas estructurales que comparten.
INTRODUCCION
El género Brongniartia
(Leguminosae: Papilionoideae)
comprende aproximadamente 65
especies, casi todas ellas endémicas de
México. (Sousa y Delgado, 1993). Este
género ha sido bien estudiado desde el
punto de vista taxonómico (Rydberg,
1923; Dorado, 1992) pero es
practicamente desconocido desde el
punto de vista químico y farmacológico.
Los antecedentes etnobotánicos indican
que diversas especies de éste género
reciben tres usos principales: 1) En el
199

2. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
tratamiento de enfermedades y
parasitárias externas (piojos, pulgas,
ácaros). 2). Como veneno para pescar y
3). En el tratamiento de mordeduras de
serpientes (Reyes, et al. 1994).
Los estudios químicos indican la
presencia de alcaloides, isoflavonoides,
triterpenoides, derivados del ácido
cinámico y estirilpironas. Brongniartia
discolor, B. lupinoides, B. sousae y B.
intermedia muestran un patrón típico de
a-pironas con citisina, anagirina y
baptifolina. En las hojas de las primeras
tres especies fueron encontrados
alcaloides tipo omosanina. Brongniartia
flava y B. vazquezii no presentaron a-
pironas; pero mostraron alcaloides tipo
lupanina, lupaninas hidroxiladas y
ésteres de alcaloides (Greinwald et al.,
1996).
Reyes (1994) aisló de las raíces
de Brongniartia podalyrioides los
pterocarpanos, (-) -edunol, neorautenol,
3´- epineurautenol; así como otros
isoflavonoides del tipo de los
cumestanos, 3-aril-cumarinas,
benzofuranos y una estirilpirona. De las
hojas de B. intermedia se aislaron b-
sitosterol, estigmasterol, taraxasterol,
lupeol, edunol y pinitol, mientras que de
las raíces se obtuvo neorautanano,
edunol. 3,5-diprenil-p-hidroxi-cinamato
de metilo, 3-prenil-4,5-(2´,2´-
dimetilpirano) cinamato de metilo,
brongniol y brongtimedol (Corona,
1993). Reyes (1994), aisló la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
de la raiz de
Brongniartia podalyrioides (conocida
como hierba de la víbora); sin embargo
no se sabe si este tipo de compuestos
pudiera estar presente en otras
especies como B. intermedia.
A la fecha solo existen dos
estudios farmacológicos sobre el
género Brongniartia. Armendaris (1906),
analizó una especie de Brongniartia sp.
(garbancillo) del estado de Queretaro y
concluyó que el polvo de las hojas, raíz
y extractos hidroalcóholicos, preparados
por separado eran inócuos
administrados a palomas y conejos.
Reyes et al., (1994) estudiaron las
propiedades farmacológicas del edunol,
el cual neutralizó la toxicidad del
veneno de la serpiente Bothrops atrox.
El edunol (3.1 mg/kg) administrado vía
intraperitonal (i.p) incrementó
notoriamente la sobrevivencia de
ratones envenenados previamente con
la dosis letal media (DL50) del veneno.
Generalidades de las estirilpironas
(=kava lactonas). Los derivados
aromáticos de las a- pironas,
especialmente las 6-substituídas, son
constituyentes químicos típicos de
Lauráceas y Piperáceas, siendo rara su
presencia en otras familias vegetales
(Hipólito, 1977). Sin embargo uno de
estos compuestos, la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(=4-metoxi-6-(p-hidroxi-estiril)-
a- pirona) (figura 1) y derivados
han sido aisladas de dos especies de
las Asteraceae (Kaloga et al., 1983;
Talapatra, et al., 1983).
8 O
Figura 1. Fórmula estructural de la 4´-
hidroxi-dehidrokavaina (= 4-metoxi-6-
(p-hidroxi-estiril)- a- pirona)
Hipólito et al., (1977) aislaron la 4
´-hidroxi-dehidrokavaína de la corteza
de la raíz de Acosmium subelegans
(Leguminosae, Lotoideae). Dicha
200
O
5
6
7
OMe
OH
2´
3´
6´
5´
3

3. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
especie es un árbol de las regiones del
“Cerrado Brasileiro” conocida por el
nombre popular de “perobinha” o
“perobinha de campo”. En la misma
época (1972) Romo et al., aislaron un
glucósido de la corteza de Sweetia
panamensis Benth, (Leguminosae,
Papilionoideae) al cual denominaron
“panamina”. Este compuesto por
hidrólisis ácida produjo glucosa y una
aglucona que correspondió a la 4´-
hidroxi-dehidrokavaína (figura 1).
También realizaron la conversión de
esta sustancia en yangoina mediante
metilación con sulfato de dimetilo. La
síntesis de la yangoina había sido
realizada previamente por Edwards y
Mir (1967) utilizando el método de Bu
´Lock y Smith (1960) por medio de
condensación de p-metoxibenzaldehido
con 4-metoxi-6-metil-a-pirona, en
presencia de metoxido de magnesio en
solución metanólica, seguida de la
hidrólisis (con ácido sulfúrico diluído)
del producto formado
Smith (1983) aisló kava lactonas
con diferentes substituyentes en la
posición C-6 de la especie Piper
methysticum, originaria de Oceanía. El
nombre común de esta especie es
“Kava Kava”. Cabe destacar que dicha
especie es de importancia médica y
comercial. La primera descripción
botánica la realizó Foster (1754-1794),
quién además, describió la acción
relajante de una bebida de kava kava
que se obtiene de las raíces.
Actualmente extractos de kava kava se
comercializan como ansiolíticos por
diferentes compañías farmacéuticas. La
acción relajante de la bebida de kava
kava es producida por las denominadas
kava-lactonas (figura 2): kavaína,
metisticina, desmetoxiyangonina
yangonina, dihidrokavaína y
dihidrometisticina (Hansel, 1964).
8 O
R R´
Dihidrokavaína H H
Kavaína H H
Desmetoxiyangonina H H
Tetrahidroyangonina OMe H
Yangonina OMe H
Dihidrometisticin
Metisticin
OCH2O
OCH2O
2´
C5 C6 C7 C8
Figura 2. Kava lactonas de Piper methisticum
Uno de los fitofármacos
formulados con estirilpironas es
LaikanÔ de Laboratorios Farmasa S.A.
de C.V. del grupo Schwabe, Alemania.
201
O
5
6
7
OMe
R
R´
3´
6´
3

4. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
Su presentación es en cápsulas. Cada
una contiene 100 mg del extracto seco
de las raíces de la planta kava. LaikanÔ
es comercializado como un ansiolítico y
se recomienda 1 cápsula tres veces al
día. Otro fitofármaco es AntaresÔ 120
de Krewel Meuselbach, Alemania. Su
presentación es en tabletas de 120 mg.
También contiene el extracto seco de
las raíces de kava pirona. Se ha
demostrado que la absorción de las
kava lactonas de un extracto de kava es
mejor que las sustancias puras. Asi
mismo se ha podido comprobar que las
cuatro lactonas estudiadas, es decir,
dihidrokavaina, kavaina,
desmetoxiyangonina y yangonina, están
biodisponibles en el tejido cerebral.
LaikanÔ posee acción relajante,
espasmolítica, anestésico local y
antiarrítmica sobre los músculos
(Lehmann et al., 1996). En estudios
clínicos han demostrado tener un perfil
de acción claramente ansiolítico sin
signos de provocar adicción o
dependencia en dosis terapéuticas
(Bhate, 1988; Warnecke, 1986-1989).
Hsu, et al., (1993). aislaron dos
estirilpironas de la especie Alpinis
speciosa K. Schum (Zingiberaceae); la
dihidro-5,6-dehidrokawaina (DDK) y la
5,6-dehidrokawaina (DK) (demetoxi-yangoina)
(figura 3). Estas substancias
demostraron en experimentos
farmacológicos que inhiben la secreción
gástrica en ratas (30-200 mg/kg). Otra
actividad biológica de estos
constituyentes fué el efecto
antiplaquetario debido a la inhibición de
la formación del tromboxano A2 (Teng,
et al., 1990). También se reportó que
producen analgesia por un mecanismo
de acción diferente al de los opioides.
8 O
8 O
Figura 3. Fórmulas moleculares de la DK (5,6-dehidrokavaína) y de la DDK
(dihidro-5,6-dehidrokavaína)
Es importante señalar que los
datos etnobotánicos de la especie de
Alpinis speciosa K. Schum
(Zingiberaceae); indican que es
empleada en China como remedio
estomacal, también es usado en el
tratamiento de vómito y dispepsia, como
astringente, tónico y sedante. (Shih, et
al., 1993).
En el presente estudio se describe
el aislamiento de la estirilpirona 4´-
hidroxi-dehidrokavaina de la raíz de
Brongniartia intermedia y en razón a las
propiedades antiplaquetarias
reportadas para la DDk y DK (fig. 3), se
decidió evaluar la posible acción
anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
en ratón, mediante el
micro-metódo del capilar (Mandoki JJ,
et al., 1983).
202
O
5
6
7
OMe
2´
3´
6´
3
4´
5´
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5
6
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5´

5. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
METODOLOGIA
Estudio químico (Instrumentación).
Los puntos de fusión se determinaron
en un aparato Fisher Jonhs y no están
corregidos, los espectros de UV se
determinaron en un epectrofotómetro
Perkin-Elmer modelo 552 en solución
metanólica. Los espectros IR fueron
determinados en un espectofotómetro
Perkin-Elmer modelo 283-B y Nicolet
FT-JR 5 SX, en KBr (pastilla). Los
espectros de RMNP fueron
determinados en espectrómetros
analíticos Varian VXR 3005 (300 MHz) y
Varian Gemini 200 (200 MHz) en
solución de CDCl3, D2O y/o acetona
deuterada, los desplazamientos
químicos (d) están dados en ppm
referidos al tetrametilsilano (TMS) como
patrón interno. Para la obtención de los
espectros de masas se utilizó un
espectrometro de masas Hewlett-
Packard 5985-B.
Material Biológico. Brongniartia
intermedia fué colectada en el estado
de México, cerro del Tetzcutzingo,
municipio de Texcoco, en junio de 1995.
Sus raíces se maceraron por una
semana a temperatura ambiente con
metanol; posteriormente se concentró
en un rotavapor y el disolvente se
eliminó in vacuo.
Extracto metanólico. En la figura 4
se muestran las etapas principales para
la obtención del compuesto I del
extracto metanólico de las raices de B.
intermedia.
Figura 4. Extracto metanólico de la raíz de B. intermedia (30g)
Maceración (30g) en acetato de etilo
La parte soluble se concentró (13.4 g)
Cromatografía en columna (silicagel 60, mezclas de diclorometano-acetona)
Metabolitos aislados
Fracción 2 (754 mg) Fracción 7-8 (700 mg) Fracciones 9-10, 11-12, 13
C. Columna C. Columna
(Silica gel, diclorometano-hexano) (Silica gel, hexano-diclorometano)
p.f. 252-254° 265-270° 261°
Subfracciones 7-8 (líquido viscoso) Subfracciones Sólido amarillo
3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de metilo 30-36, 37-40, 41-52, 4-hidroxi-dehidrokawaina
(II)
p.f. 138-140° 125-126° 270-273° (I)
b-sitosterol (III) No identificados (V y VI)
Stigmasterol (IV)
203

6. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
Estudio farmacológico. Las
propiedades anticoagulantes de la 4´-
hidroxi-dehidrokavaína (I) aislada de B.
intermedia se examinaron in vivo. Se
utilizaron ratones machos (20-30 g)
cepa CD-1 y takoni del bioterio de la
Facultad de Medicina de la UNAM. Se
emplearon Heparina y Warfarina como
patrones positivos (Sigma Chem. Co.) y
solución salina como control. Se utilizó
Tween 80 y dimetilsulfóxido como
vehículo. La vía de administración de
las sustancias fue subcutánea (s.c). El
tiempo de coagulación se determinó
siguiendo el método de Mandoki (1983),
el cual emplea un dispositivo
prísmatico, un cronómetro, una hoja de
rasurar, capilares no heparinizados de
1.3 mm de diámetro por 75 mm de largo
y un termómetro. Para saber si había
diferencias entre los tratamientos se
utilizó la prueba U Mann-Whitney, Rnk
sum test, con un nivel de significancia
de 0.05. Se realizaron 3 experimentos
(tabla 1).
Tabla 1. Tratamientos utilizados para evaluar el efecto de la 4´-hidroxi-dehidrokavaina
en la sangre del ratón
Tratamientos A B C
Peso (cepa) 20-26 g (CD-1) 25-30 g (takoni) 20-25 g (CD-1)
Nº de animales 4 4 4
Vía de
administración
(s.c.) (s.c.) (s.c.)
Dosis
administradas de 4
´-hidroxi-dehidrokavaina
31 mg/kg
10 mg/kg
3.1 mg/kg
100 mg/kg 100 mg/kg
Patrón positivo Heparina 100 U.I. Warfarina 10
mg/kg
Heparina 100 U.I.
Warfarina 31
mg/kg
Grupo control
Solución salina
más tween 80 al
2%
Solución salina
más tween 80 al
4%
Solución salina
más tween 80 al
5% y 4% de
dimetilsulfoxido
Evaluación del
tiempo de
coagulación a:
15 min 15 min
24, 48 y 72 h
15 min
24, 48 y 72 h
RESULTADOS
Estudio químico. De las raíces de
B. intermedia (tabla 2) se aislaron e
identificaron 4 compuestos químicos
pertenecientes a tres grupos de
metabolitos secundarios: estirilpironas,
ácido nervónico y triterpenos. El primer
grupo esta compuesto por la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I). El segundo grupo
por el 3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de
metilo (II) y el tercero por el b-sitosterol
(III) y el estigmasterol (IV). En seguida
se muestran los datos espectroscópicos
204

7. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
y químicos que permiten proponer las
estructuras respectivas de los
componentes aislados.
4´-hidroxi-dehidrokavaína (1).
C14H12O4, sólido amarillo, p.f. 265-270°.
UV lmax [MeOH]nm (e): 218 (21472), 283
(6283), 360 (27999). IR umax [KBr]cm-1:
3401 y 3264 (OH); 1699 (C=O); 1633,
1608, 1550, 1443, 1406, 1260, 1154,
958, 822 (C=C). EM m/z (%): 244 [M+]
(100), 243 [M+-H] (2), 216 [M+-CO] (28),
188 [ M+-C3H4O] (5), 173 [M+-C3H3O2]
(25), 145 (6), 127 (3), 115 (3), 91 (4), 69
(7), 65 (2), 39 (2). El espectro de masas
muestra el ion molecular en 244
(100%), el cual también es el pico base.
Dicho peso molecular es congruente
con la formula C14H12O4.
El espectro de RMNP (CDCl3–
DMSO) mostró las siguientes señales:
3.77 (s) 3H (OMe); 9.55 (s) 1H (OH), en
5.43 (d) y 6.01 (d) (2H del anillo pirona,
J=2.1 Hz), 7.21 (d) y 6.52 (d) (protones
vinílicos, J=16 Hz), 7.33 (d) y 6.74 (d)
(4H del anillo bencénico, sistema A2B2
J=8.5 Hz)
El espectro de RMN 13C mostró
una señal en 170.7 ppm la cual fue
asignada al carbonilo de la posición 2,
dos señales en 162.8 y 158.7 ppm para
los carbonos cuaternarios C-4 y C-6,
respectivamente. Dos señales en 99.7 y
87.6 ppm se atribuyeron a los carbonos
C-3 y C-5 y una señal en 55.6 que se
asigno al metoxilo C-4. También mostró
dos señales dobles en 115.5 y 128.7
ppm asignados a los carbonos C-11 -C-
13 y C10-C-14 respectivamente.
Acetato de 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(Ia). C16H14O5, agujas
largas ligeramente anaranjadas, p.f.
175-178°. UV lmax [ MeOH ]nm (e): 254
(10582), 340 (18232). IR umax [CHCl3]
cm-1: 1762 (OCOCH3), 1711 (CO); 1641,
1604, 1555; 1455, 1406, 1371, 1153,
(C=C). EM m/z (%): 286 [M+] (47), 267
[M+-] (1), 244 [M+-C2OH2] (100), 216
(37), 188 (5), 173 (21), 145 (4), 127
(3),115 (4), 91 (2), 69 (7), 43 (14).
El espectro de RMNP (CDCl3)
mostró las siguientes señales: 2.31 ppm
(s) 3H (OCOMe); y 3.83 (s) 3H (OMe);
5.5 (d) y 5.95 (d) (2H del anillo de la
pirona, J=2.4 Hz), 7.47 (d) y 6.53 (d)
2H, protones etilénicos J=15.7 Hz), 7.5
(d) y 7.11 (d) (4H del anillo bencénico,
sistema A2B2, J=8.5 Hz).
3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de
metilo (II). C20H26O3, aceite amarillo. IR
(CHCl3) cm-1: 3443 (OH); 2929 (CH);
1702 (CO); 1633 (C=C); 1471 y 1439
(CH2); 1267 (C-O); 982 (aromático). EM
m/z (%): 314 [M+] (72), 297 [M+-OH]
(100), 259 [M+-C4H7] (61), 243 [M+-
C3H3O2] (30), 211 (14), 203 (40), 183
(9), 167 (7), 149 (15), 115 (10), 91 (6),
69 (14), 41 (18).
El espectro de RMNP (CDCl3).
1.78 (s) 12H (4 metilos), 3.78 (s) 3H
(OMe), 7.26 s (1H, H aromático), 7.17
(s) (1H, H aromático), 3.34 (d) (4H,
metilenos bencílicos, J= 7.3 Hz), 5.32 (t)
(2H, H vinílicos del isoprenilo, J=7.3
Hz), 7.6 (d) y 6.27 (d) (2H, sistema AB
para los protones de una doble ligadura
“trans” de la cadena del ester metílico,
J= 16 Hz), 5.65 (1H, OH).
Tabla 2. Compuestos aislados de Brongniartia intermedia
Nombre Punto de
fusión
Fórmula
molecular
Estructura molecular PM
205

8. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
4-hidroxi-dehidro
kavaína*
(I)
265-270° C14 H12 O4 244
206
O
5
6
8 O
7
OMe
OH
2´
3´
6´
3
5´

9. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
Acetato de
4-hidroxi-dehidro-kavaína
(a)
175-178° C16 H14 O5 286
3,5-
diprenil-p-hidroxi-cinamato
de metilo
(II)
Líquido
viscoso
C20 H26 O3
8 O
OH
C-OMe
O
314
b-sitosterol
(III)
138-140°
(mezcla)
C29H50O
HO
414
Estigmaste
rol
(IV)
138-140°
(mezcla)
C29H48O
HO
412
Pendiente
(V)
125-126° C25H16O6 ? Pendiente 412
Pendiente
(VI)
270-273° C20H24O3 ? Pendiente 310
207
O
5
6
7
OMe
OCCH3
2´
3´
6´
5´
3´
O

10. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
450
400
350
300
250
200
150
100
50
Figura 5. Efecto anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína en la sangre del
ratón (Valores promedios de los tiempos de coagulación), Tratamiento A (cepa
CD-1)
Estudio farmacológico.
Tratamiento A (cepa CD-1) los tiempos
de coagulación de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I) a la dosis mas alta
(31 mg/kg) comparados con el grupo
control no mostraron diferencias
significativas (prueba U Mann-Whitney,
Rnk sum test). Sin embargo el efecto
del compuesto I representó el 55% del
tiempo de coagulación de la heparina.
El efecto anticoagulante de la heparina
fue estadísticamente significativo
comparado con el grupo control
(p=0.0004, d.e=70.5,`X=419). En
cuanto a las dosis de 10 y 3.1 mg/kg de
la 4´-hidroxi-dehidrokavaína no hubo
ninguna diferencia significativa
comparados con el grupo control
(Figura 5).
Tratamiento B. (cepa takoni) no se
observó alguna diferencia
estadísticamente significativa en el 1°,
3° y 4° día comparando la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
y la warfarina con el
grupo control. En el 2° día, solamente la
warfarina tuvo diferencia
estadísticamente significativa
(p=0.0093, `X=265.5, d.e.= 76.6). Sin
embargo se puede observar (grafica 2)
que en el segundo día los tiempos de
coagulación de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
y la warfarina son casi
iguales, pero estadísticamente no
existió diferencia alguna (Figura 6)
Tratamiento C. (cepa CD-1). La 4´-
hidroxi-dehidrokavaína a la dosis mas
alta (100 mg/kg) mostró un efecto
anticoagulante estadísticamente
significativo con respecto al control a
partir del 2° día (p=0.0286 prueba U
Mann-Whitney, Rnk sum Test). En el
caso de la warfarina y heparina también
mostraron diferencia significativa en el
segundo día (p=0.0286 y p=0.0046
respectivamente). En la grafica 3 se
observa que el efecto anticoagulante de
la 4´-hidroxi-dehidrokavaína fue
superior al de la warfarina y heparina,
sin embargo la dosis utilizada no es la
misma para cada sustancia. En cuanto
al 1°, 3° y 4° día la diferencia entre los
grupos no fué estadísticamente
significativa (Figura 7).
208
0
Tratamientos
Seg
4´-hidroxi-dehidrokavaína 3.1 mg/kg
4´-hidroxi-dehidrokavaína 10 mg/kg
4´-hidroxi-dehidrokavaìna 31 mg/kg
Heparina 100 U.I.
Solución salina (control)

11. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
600
500
400
300
200
100
Figura 6. Efecto anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavína en la sangre
del raton (Valores promedios de los tiempos de coagulación), Tratamiento B
(cepa takoni)
350
300
250
200
150
100
50
Figura 7. Efecto anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína en la sangre
del ratón (Valores promedios de los tiempos de coagulación) Tratamiento C (cepa
CD-1).
209
0
1 2 3 4
Día
Seg
4´-hidroxi-dehidrokavaína 100 mg/kg
Warfarina 31 mg/kg
heparina 100 U.I.
Solución salina (control)
0
1 2 3 4
Día
Seg
4´-hidroxi-dehidrokavaína
Warfarina 10 mg/kg
Solución salina (control)

12. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
ANALISIS Y DISCUSION
En el extracto metanólico de las
raíces de B. intermedia se encontró la
estirilpirona 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I), un derivado del ácido nervónico el
3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de metilo
(II), una mezcla de los esteroles b-
sitosterol (III) y estigmasterol (IV), así
como dos compuestos más que no se
identificaron (V y VI).
La 4-hidroxidehidrokavaína (I) se
aisló como un sólido amarillo p.f. 265-
270°, (reportado 270° Hipólito et al.,
1977; 280-283° Romo et al., 1971). Sus
espectros de I.R., U.V., E.M. y RMNP
fueron similares a los previamente
reportados por (Hipólito et al., 1977;
Romo et al., 1971; Talapatra et al, 1982
y Kaloga et al., 1983). Este compuesto
ya habìa sido aislado de Brongniartia
podalyrioides (Reyes, 1994); sin
embargo no se sabía si también estaba
presente en B. intermedia. Es
significativa su presencia en dos
especies de Brongniartia ya que las
estirilpironas son compuestos típicos de
Lauráceas y Piperáceas (Hipólito et al.,
1977; Smith, 1983; Talapatra et al.,
1982 y Kaloga et al., 1983) siendo rara
su presencia en otras familias vegetales
como las Leguminosas y Asteraceas.
Adicionalmente se preparó el acetato de
la 4´-hidroxi-dehidrokavaína (Ia)
mediante reacción química con
anhídrido acético y piridina. Sus
espectros de I.R., U.V., E.M. y RMNP
fueron similares a los reportados por
(Hipólito et al., 1977; Romo et al., 1971).
El derivado del ácido nervónico
3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de metilo
(II) y la mezcla de esteroles; el b-
sitosterol (III) y el estigmasterol (IV) ya
habían sido aislados previamente por
Corona (1993) de B. intermedia. Sus
espectros de I.R., U.V., E.M. y RMNP
fueron similares a los reportados por
este mismo autor. Cabe señalar que
Corona (1993) en su estudio fitoquímico
de B. intermedia no aisló a la
estirilpirona 4-hidroxidehidrokavaína.
La evaluación farmacológica in
vivo indicó que la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
a la dosis de 100 mg/Kg
puede tener un efecto anticoagulante en
el segundo día de administración
(Figura 7). Su actividad anticoagulante
retardada es similar a la de la warfarina.
Desde el punto de vista químico la 4´-
hidroxi-dehidrokavaína (I) y la warfarina
así como otros anticoagulantes orales
comparten características estructurales
similares (anillo de alfa lactona); en
cambio no existen semejanza alguna
entre la heparina y la 4-
hidroxidehidrokavaína (I).
La warfarina es un anticoagulante
oral, su efecto in vivo es lento por inferir
con la biosintesis de los factores de
coagulación dependientes de la
vitamina K. Se emplea terapéuticamente
para disminuir la coagulación de la
sangre con el objeto de prevenir
trombosis venosa y otros
padecimientos. También se utiliza como
rodenticida (Goldstein, 1978). En
contraste la heparina tiene un efecto
rápido tanto in vivo como in vitro por
inhibir la acción de uno a más factores
de la coagulación (Katzung B.G, 1991;
Goodman y Gilman´s, 1991). Los
resultados de los ensayos de el efecto
anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I) sugieren que ésta
puede tener un mecanismo de acción
semejante al de la warfarina y diferente
al de la heparina. Es importante señalar
que a la dosis de 100 mg/kg, la 4´-
hidroxi-dehidrokavaína no presentó
ningun efecto tóxico, ni letalidad en
algunos de los ratones utilizados al
cabo de 72 h.
Las estirilpironas DDK y DK
aisladas de la especie Alpinis speciosa
K. (Zingiberaceae) por Shih (1994),
guardan estrecha relación estructural
210

13. Estirilpirona 4’-hidroxi-dehidrokavaina aislada de Brongniartia intermedia, Salinas Sánchez et al., 1999.
con la 4´-hidroxi-dehidrokavaína. Esta
solo difiere de los compuestos citados
por la presencia de un hidroxilo sobre el
Carbono 4´. El efecto antiplaquetario de
la DDK y DK es debido a la inhibición
de la formación del tromboxano A2
(Teng et al., 1990) lo cual sugiere que
posiblemente la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
también pueda tener
este mecanismo de acción. Por otro
lado, las Kava lactonas extraídas de
Piper methysticum; kavaína, metisticina,
desmetoxiyangonina y yangonina
(Hansel, 1994) que poseen efecto
ansiolítico son químicamente parecidas
a la 4´-hidroxi-dehidrokavaína. En este
caso también se podría suponer que
esta tuviera un efecto relajante, pero se
requiere demostrarlo
experimentalmente.
El análisis de nuestros resultados
nos lleva a concluir que aunque se
observó el efecto anticoagulante de la 4
´-hidroxi-dehidrokavaína en el último
ensayo (Figura 7), es necesario realizar
otro ensayo con mayor número de
animales y posiblemente aplicar otro
tipo de método para determinar el
tiempo de coagulación.
CONCLUSIONES
Se aislaron e identificaron 4
compuestos químicos presentes en el
extracto metanólico de las raíces de B.
intermedia. Se encontró una
estirilpirona 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I); un derivado del ácido nervónico el
3,5-diprenil-p-hidroxicinamato de metilo
(II); una mezcla de esteroles b-sitosterol
(III) y stigmasterol (IV) y dos
compuestos más que no se identificarón
(V y VI). También se logró evaluar el
efecto anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I). Se obtuvo por
reacción química el 4´-acetil-dehidrokavaína
(Ia).
La estirilpirona 4´-hidroxi-dehidrokavaína
(I) aislada de B.
intermedia tuvo efecto anticoagulante a
la dosis de 100 mg/kg. Su estructura
molecular es semejante a las
estirilpironas (Kava lactonas)
previamente descritas: DDk (dihidro-
5,6-dehidrokavaína), DK
(5,6.dehidrokavaína). También guarda
cierta semejanza estructural con un
anticoagulante oral que es la warfarina,
en especial por la función lactónica. El
efecto anticoagulante de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
fué semejante al de la
warfarina, un anticoagulante oral ya
conocido terapéuticamente. La dosis de
100 mg/Kg de la 4´-hidroxi-dehidrokavaína
administrada
subcutaneamente no presentó
tóxicidad, ni letalidad en los animales
de experimentación al cabo de 72 h.
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