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1. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
“Calidad Pertinencia y Calidez”
D.L. N° 69-04, DE 14 DE ABRIL DE 1969
PROV. DE EL ORO-REP. DEL ECUADOR
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA
PRÁCTICA BF.9.01-08
1. DATOS INFORMATIVOS
ESTUDIANTE: Celina Katherine Veintimilla Macías
CARRERA: Bioquímica y Farmacia
CICLO/NIVEL: 9no semestre “A”
FECHA DE ELABORACIÓN DE LA PRÁCTICA: jueves, 01 de febrero de 2018
FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRÁCTICA: jueves, 15 de febrero de 2018
DOCENTE RESPONSABLE: Dr. Carlos Alberto García González Msc.
2. TITULO DE LA PRÁCTICA:
CUANTIFICACIÓN DE FENOLES EN PLANTAS Y EN MEDICAMENTOS.
3. DATOS DEL MEDICAMENTO.
Muestras de plantas analizadas.
Nombre comercial Diosmina
Laboratorio fabricante MK
Principio Activo Diosmina y Flavonoides
expresados en Hesperidina
Concentración del p.a. 500 mg
Forma farmacéutica Sólido
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2. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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4. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
 Determinar el contenido de fenoles en medicamentos como la Diosmina
 Determinar el contenido de fenoles en polvos extraídos de algunas plantas.
 Validar la calidad de un principio activo a base de patrones.
 Minimizar el uso de reactivos en la cuantificación de fenoles.
5. FUNDAMENTACIÓN.
FENOLES.
El Fenol es moderadamente volátil a temperatura ambiente (se
evapora con mayor lentitud que el agua). Es soluble en Alcohol,
Glicerol, petróleo y una cantidad moderada del mismo puede
solubilizarse con agua; a temperaturas por encima de 68ºC, el Fenol
es completamente soluble en agua (Biblioteca Virtual, 210).
Los componentes fenólicos se encuentran en los alimentos y juegan un papel
fundamental en la dieta humana; estos metabolitos secundarios los encontramos en las
plantas, de acuerdo a la clasificación general se encuentran fenoles, ácidos fenólicos y
flavonoides (López, 2009).
Existe gran interés de estudiarlos debido a sus propiedades antioxidantes, su
participación en procesos sensoriales de los alimentos naturales y procesados, además
de sus posibles para las salud humana; tales como en el tratamiento y prevención del
cáncer, enfermedades cardiovasculares y otras patologías de carácter antiinflamatorio
(López, 2009).
DIOSMINA.
Los Flavonoides tienen su acción farmacológica sobre los
procesos inflamatorios. Entre ellos están: la Diosmina que
es una Flavona; la Herperidina que es una Flavonona,
componentes específicos en el tratamiento de los trastornos
perivenosos, proinflamatorios. Los flavonoides son

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conocidos como inhibidores de la actividad de las enzimas involucradas en la
transformación de los ácidos grasos poliinsaturados de la membrana citoplasmática.
Útiles en la estasis venosa.
La Hesperidina tiene propiedades venotónicas, vasculoprotectoras, flevolíticas, y
antivaricoso. Su acción es sobre la microcirculación, aumentan la resistencia y la
permeabilidad, y protegen el endotelio vascular. Además de estas propiedades
antiinflamatorias, los flavonoides tienen también efectos analgésicos y antiagregantes
plaquetarios. La diosmina y herperidina, reducen el edema inducido por obstrucción
venosa (Granados, 2003).
6. MATERIALES, SUSTANCIAS Y MUESTRA.
MATERIALES SUSTANCIAS EQUIPO MUESTRAS
Vaso de
precipitación
Ácido gálico Espectrofotómetro Cúrcuma
Balón volumétrico
10, 25, 5 y 100ml.
Reactivo de Folin
Ciocalteu 20%
Moringa
Pipetas Carbonato de sodio
10%
Jenjibre
Tubos de ensayo Metanol Cód. 4
Micropipetas Agua destilada Cód. 8
Puntas azules y
amarillas para
micropipetas
Guayusa
Vaso de
precipitación
Ají M
Materiales de
protección
personal
Cód. 60
Guantes Cód. 24
Mascarilla Rocoto amarillo
Cofia Cód. 36
Mandil Cód. 19
Zapatones Cód. 48
Materiales de
protección personal
Medicamento
Diosmina MK
500mg

4. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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7. INSTRUCCIONES:
a) Trabajar con orden, limpieza y sin prisa.
b) Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios
innecesarios para el trabajo que se esté realizando.
c) Llevar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla,
cofia, zapatones, gafas.
d) Utilizar la campana de extracción de gases siempre que sea necesario.
8. PROCEDIMIENTO.
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)
Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada en
un balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a un
balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un
balón de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4. Preparación de las diluciones de la solución madre.
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a las
siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
2. Para una concentración 0,1

5. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo de
ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta 5ml.
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL

6. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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ELABORACIÓN DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS Y DEL
MEDICAMENTOS.
1. Preparación de las muestras vegetales.
Pesar 0,025g de polvo de las plantas y disolver con 5ml de Metanol.
2. Preparación del medicamento de Diosmina.
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y
enrazar con agua destilada.
CUANTIFICACÓN DE FENOLES
1. Desinfectar el área de trabajo.
2. Prepara los materiales y reactivos de trabajo.
3. Pesar 0,025 g de polvo del material vegetal y traspasar al tubo de vidrio tapa
rosca
4. Añadir 5 ml de metanol puro y homogenizar.
5. Con la ayuda de una jeringa de 1 ml y con el filtro de aguja, debemos obtener el
sobrenadante (muestra).
6. En un tubo Eppendorfs protegidos de la luz le adicionamos 50 uL de solución
del medicamento o del extracto vegetal.
7. Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin – Ciocalteu (1:4).
8. Adicionamos 50 uL de agua destilada y esperamos de 4 – 5 minutos para que se
dé la reacción.
9. Luego añadir 100 uL de la dilución de carbonato de sodio al 10%.
10. Finalmente preparar un blanco en las mismas proporciones, es decir: 100uL de
Agua destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y luego
añadir 1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
11. Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a 760nm.
12. Después realizar la primera lectura con el blanco y encerar para realizar las
siguientes lecturas.
Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.

7. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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9. GRÁFICOS.
MUESTRAS DE PLANTAS ANALIZADAS.
CÓDIGO 4 ROCOTO GUAYUSA CÓDIGO 60
CÓDIGO 36 CÓDIGO 24 CÓDIGO 19
Pesar 0.0250g de muestra Agregar metanol e incubar Filtrar cada muestra
Filtrar cada muestra Leer la absorbancia de la muestra

8. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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10. CALCULOS.
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
x = 15,824mg/g Hesperina
11. RESULTADOS OBTENIDOS
CURVA DE CALIBRACIÓN DEL ÁCIDO GÁLICO
Concentración
(mg/ml)
Absorbancia
0 0
0 0
0 0
0,025 0,078
0,025 0,085
0,025 0,072
0,050 0,224
0,050 0,220
0,050 0,214
0,100 0,366
0,100 0,371
0,100 0,371
0,150 0,594
0,150 0,597
0,150 0,599
0,200 0,790
0,200 0,804
0,200 0,801
0,250 1,042
0,250 1,057
0,250 0,990
y = 4,093x - 0,0115
R² = 0,9964
-0,2
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Curva de Calibración del Acido
Gálico 760nm

9. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RESPECTO A LA CURVA DEL ÁCIDO
GÁLICO.
Codigo Absorbancias
Ẍ
Absorbancia
Concentración
mg/ml
Fenoles mg
EAG/g PS
Curcuma 0,472 0,576 0,565 0,538 0,135 26,92
Moringa 0,081 0,085 0,084 0,083 0,025 4,93
Jengibre 0,253 0,272 0,275 0,267 0,069 13,80
Codigo 4 0,351 0,442 0,499 0,431 0,109 21,74
Codigo 8 0,180 0,249 0,256 0,228 0,060 11,94
Aji M 0,243 0,280 0,283 0,269 0,069 13,90
Codigo
60 0,341 0,421 0,450 0,404 0,102 20,45
Guayusa 0,630 0,665 0,669 0,655 0,163 32,58
Codigo
24 0,260 0,348 0,348 0,319 0,082 16,32
Rocoto
amarillo 0,212 0,242 0,242 0,232 0,061 12,12
Codigo
36 0,181 0,224 0,227 0,211 0,055 11,09
Codigo
19 0,266 0,299 0,287 0,284 0,073 14,64
Codigo
48 0,211 0,179 0,171 0,187 0,050 9,94
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
35,00
Fenoles mg EAG/g PS

10. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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12. OBSERVACIONES
Se debe de verificar el extracto o algún otro factor que haya influido en el contenido de
fenoles de la Moringa ya que según los diferentes artículos esta es una planta que
contiene gran contenido de fenoles.
13. CONCLUSIÓNES:
De todas las muestras analizadas de guayusa, pimiento, ají, moringa, entre otros; las que
más contenido de fenoles tienen son la Guayusa, Cúrcuma, Cód. 4 y Cód. 8.
14. RECOMENDACIONES

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,
mascarilla.

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio

Titular y pesar adecuadamente

Verificar que la balanza se encuentre correctamente calibrada
 Preparar todos los extractos de acuerdo a lo establecido ya que cualquier error
puedan influenciar en el resultado.
 De acuerdo a lo establecido siempre realizar la lectura de las muestras a 760nm.
 Es de vital importancia preparar el blanco ya que caso contrario vamos a obtener
resultados erróneos.
15. CUESTIONARIO.
1. ¿De dónde provienen los compuestos fenólicos en las plantas?
Las plantas destinan una cantidad significativa del carbono asimilado y de la energía, a
la síntesis de una amplia variedad de moléculas orgánicas que no tienen una función
directa en procesos fotosintéticos, respiratorios, asimilación de nutrientes, transporte de
solutos o síntesis de proteínas, carbohidratos o lípidos, y que se denominan metabolitos
secundarios.
2. ¿Qué son los compuestos fenólicos?
Los fenoles o compuestos fenólicos son compuestos orgánicos cuyas estructuras
moleculares contienen al menos un grupo fenol, un anillo aromático unido al menos a
un grupo funcional hidroxilo

11. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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3. ¿Cuáles son los principales fenoles naturales para su uso en la industria de
los bioestimulantes?
Entre los principales compuestos fenólicos naturales se encuentran los taninos y los
flavonoides.
4. ¿Cuáles son las características y funciones generales de los fenoles?
Los fenoles suelen ser ácidos y pueden formar puentes de hidrógeno. Algunos fenoles
son solubles en solventes orgánicos, otros son glucósidos o ácidos carboxílicos y por lo
tanto solubles en agua, y otros son polímeros muy grandes e insolubles en agua. Pueden
establecer interacciones con grupos peptídicos (taninos).
5. En una mándala mencione los principales metabolitos secundarios
Terpenos:
pigmentos o
aceites esenciales.
Compuestos fenólicos:
cumarinas,
flavonoides, lignina y
taninos.
Glicósicos: saponinas,
glicósidos y
glucosinolatos.
Alcaloides.

12. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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16. GLOSARIO:
 Fenol.- en su forma pura es un sólido cristalino de color blanco-incoloro a
temperatura ambiente. Su fórmula química es C₆H₆O, y tiene un punto de fusión
de 43 °C y un punto de ebullición de 182 °C.
 Absorbancia.- es definida como: es la intensidad de la luz con una longitud de
onda específica y que es pasada por una muestra es la intensidad de la luz antes
de que entre a la muestra
 Extracto.- Sustancia muy concentrada que se obtiene de una planta, semilla u
otra cosa por diversos procedimientos.
 Cúrcuma .- es una especia muy usada en India y el sudeste asiático, de donde es
originaria la planta, aunque en la actualidad se cultiva en muchas otras regiones
cálidas y húmedas. Se usa desde hace más de cuatro mil años en la gastronomía
 Flavonoide.- es el término genérico con que se identifica a una serie de
metabolitos secundarios de las plantas.
17. BIBLIOGRAFIA
o Biblioteca Virtual. (210). Obtenido de
http://documentacion.ideam.gov.co/openbiblio/bvirtual/018903/Links/Guia14.pdf
o López, P. L. (2009). Importancia de los grupos fenólicos en alimentos. Temas
Seletos de Ingeniería en Alimentos., 14.
o Manejo del dolor agudo postoperatorio en cirugía ambulatoria p38. S. López
Álvarez Servicio de Anestesiología, Reanimación y Terapéutica del Dolor.
Complexo Hospitalario Universitario Juan Canalejo. A Coruña
o Departamento Técnico del Consejo General de Colegios Oficiales de Farmacéuticos
(marzo de 2008). Catálogo de medicamentos. Madrid: Consejo General de Colegios
Oficiales de Farmacéuticos. p. 2245. ISBN 9788487276637.
o Verges, Elvira; Silvia G. de Camacho; Valsecia Mabel (2008). «Fenoles y
Flavonoides». Consultado el 13 de diciembre de 2017.

13. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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18. ANEXOS.
FARMACOPEA ARGENTINA 7° ED. VOL. II

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FARMACOPEA ARGENTINA 7° ED. VOL. II

15. “Solamente la dosis permite clasificar una sustancia venenosa” Paracelso.
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FIRMA DE RESPONSABLE:
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Celina Veintimilla Macías.
0705606408