Inyección intracitoplasmática de espermatozoides (1)

1. Inyección Intracitoplasmática
de Espermatozoides
Alejandra Salazar Gonzalez
Ana Patricia Durazo
Alan Alduenda Dewar

2. Inyección Intracitoplasmática de Espermatozoides
Es una técnica de reproducción asistida que consiste en la
fecundación de los ovocitos por inyección de un
espermatozoide en su citoplasma

3. Inicialmente las pruebas del ICSI conducidas entre
1965 y 1980 fueron para:
Investigar los primeros eventos de la fecundación
tales como;
Fusión de membrana entre gametos homólogos
y heterólogos,
Activación del citoplasma del ovocito
Formación de pronúcleos femeninos y
masculinos en roedores y especies no
mamíferas.

4. En las dos últimas décadas las especies domésticas tales como la vaca, el
caballo o el cerdo,han sido el foco de atención de los programas de
investigación de numerosos laboratorios.
La experimentación con animales resulta útil para comprobar la seguridad de
la propia técnica y puede ofrecer grandes ventajas para el entrenamiento de
técnicos en ICSI humana.

5. Los primeros estudios en bovinos fueron realizados por Westhusin y
colaboradores en 1984
reportaron la formación de pronúcleos masculino y femenino después de la
inyección de los espermatozoides en ovocitos vacunos madurados in vitro.
Posteriormente, Goto y colaboradores en 1990 demostraron que ovocitos
vacunos, madurados in vitro, se desarrollaron en blastocistos después de
que fueron fecundados por la inyección de espermatozoides, generando crías
normales.

6. Procesamiento ICSI
Gameto femenino
Los ovocitos que serán microinyectados pueden ser obtenidos de hembras
vivas a través de la técnica de ovum pick-up o provenientes de matadero,
Los ovocitos deben ser madurados in vitro por un período de 22 a 24 horas
antes del proceso de microinyección

8. Preparación de los ovocitos para la inyección
Después de la maduración in vitro, los ovocitos son expuestos a un medio con
1mg/ml de Hialuronidasa (sustancia enzimática que modifica la permeabilidad
del tejido conjuntivo) para proceder a la retirada del cumulus. (Barrera
alrededor del ovocito)
A partir de aquí se pasan por lo menos por 4 gotas de medio fresco para
eliminar los restos de Hialuronidasa.

9. Una vez que los ovocitos son desnudados
correctamente, se guardan en la incubadora
antes de la inyección.
Deben pasar aproximadamente 1.5-2 horas
(mínimo) en la incubadora antes de la
inyección.
Los ovocitos que presentan el primer
corpúsculo (células que contienen el material
genético sobrante del ovocito) polar son
seleccionados para proceder al ICSI.

10. Preparación de los espermatozoides del epidídimo y
eyaculado para la microinyección
Las pajillas de semen del eyaculado y epidídimo son descongeladas en agua a
una temperatura de 35ºC por 30 segundos.
Los espermatozoides son seleccionados a través de centrifugación a 700 g por
20 minutos.
Los espermatozoides seleccionados son capacitados a través de incubación
con heparina (200 μg/ml), durante 15 minutos antes de que sean utilizados en
el ICSI.

11. Microinyección
El ovocito es fijado horizontalmente en la
pipeta usando leve succión.
El corpúsculo polar debe ser orientado en
la parte posterior del ovocito
La pipeta de inyección que contiene un
único espermatozoide es transferida de la
gota de gametos masculinos a la gota que
contiene el ovocito.

12. La pipeta de inyección es empujada firmemente hasta perforar a el ovocito.
Para garantizar que la membrana plasmática esté rota y que el
espermatozoide sea depositado correctamente, una pequeña cantidad
del citoplasma del ovocito es aspirado a la pipeta para indicar que la
membrana se rompió.
El citoplasma aspirado debe ser empujado suavemente dentro del ovocito
en conjunto con el espermatozoide.
La pipeta de inyección se retirada del ovocito
La perforación de la membrana plasmática cierra lentamente (1-5 minutos)
a su configuración original.

15. El procedimiento sigue los mismos pasos que
en la FIV.
Se trasplanta uno o dos embriones en el
útero ya través de el cuello uterino usando
un catéter delgado.
Esta técnica tiene una tasa de de fecundación
de un 75%