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1. Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular FAMURP
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PRACTICA N° 9
VISUALIZACION DE MITOCONDRIAS Y LISOSOMAS
I) Identificación de organelas:
Las células eucarióticas se caracterizan por tener un subsistema o nivel de organización de
organelas, en estos orgánulos tienen lugar actividades celulares específicas; las organelas se
caracterizan por presentar una membrana que separa el compartimiento interno de la organela del
entorno citoplasmático. El núcleo, la mitocondria y los cloroplastos están limitados por dos
membranas bicapas separadas por un espacio intermembrana. Todos los otros orgánulos están
rodeados por una membrana única.
El núcleo alberga el genoma de una célula. Las membranas nucleolar interna y externa están
fusionadas en numerosos poros nucleares, a través de los cuales pasan los materiales entre el núcleo
y el citosol. La membrana nuclear externa se continua con la del retículo endoplasmático rugoso.
Entre otras organelas tenemos los endosomas que internalizan las proteínas de la membrana
plasmática y los materiales solubles del medio extracelular y los clasifican para devolverlos a la
membrana o a los lisosomas para su degradación.
Los peroxisomas son orgánulos pequeños que contienen enzimas que oxidan diversos compuestos
organicos sin la producción de ATP. Los subproductos de la oxidación se utilizan en reacciones
biosinteticas.
La enorme superficie de membranas internas proporciona a las células no solamente un soporte
para la localización ordenada de multiples sistemas enzimáticos diferentes, sino que les provee de
subcompartimentos funcionales cerrados que constituyen los diferentes organoides membranosos
especializados, cada uno de ellos con estructura, dotación enzimática y propiedades funcionales que
lo caracterizan.
Numerosos compartimentos rodeados de membrana son responsables de funciones celulares vitales,
entre las cuales se encuentran la separación y asociación de sistemas enzimáticos, la digestión
intracelular de sustancias, la distribución de cada una de las miles de proteínas diferentes de la
célula hacia sus destinos finales.
El mayor sistema de membranas corresponde al retículo endosplasmático (RE), de donde se originan
la mayoría de las organelas celulares, como el aparato de Golgi y los lisosomas.
Las proteínas secretadas y las proteínas de membrana se sintetizan sobre el retículo endoplasmático
rugoso, una red de sacos aplanados limitados por membrana tachonados de ribosomas. Las
proteínas sintetizadas en el RE rugoso luego se mueven al complejo de Golgi, donde son procesadas y
clasificadas para ser transportadas a la superficie celular o a otros destinos.
Algunas vesículas provenientes del RE o del Aparato de Golgi, forman orgánulos limitados por
membranas llamados lisosomas, que contienen hidrolasas ácidas (enzimas que degradan polímeros
en sus unidades monoméricas). Los lisosomas varían en cuanto a su tamaño y forma y en una célula
pueden encontrarse en grandes cantidades. Los lisosomas intervienen en la digestión celular
uniéndose a las vesículas endocíticas o fagocíticas constituyendo lisosomas secundarios o
fagolisosomas.
Las células eucarióticas poseen organelas que traducen la energía y reciben el nombre de
mitocondrias y cloroplastos. Estas organelas se caracterizan por tener doble membrana que separa
su compartimiento interno o matriz del medio citoplasmático. En la membrana interna de ambas
organelas se encuentra una serie de proteínas que define en conjunto la llamada cadena

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transportadora de electrones, así como presentan una estructura denominada complejo F1, F0, a
través del cual y por quimiosmosis se va a formar el ATP.
Tanto los lisosomas como las mitocondrias no pueden ser observados directamente al microscopio
óptico, es necesario para ello, utilizar colorantes en concentraciones muy diluidas, de tal manera que
no presenten toxicidad a las células.
Actualmente existen muchas evidencias de que el rojo neutro en concentraciones no tóxicas es
tomado por la célula y se concentra en el sistema lisosomal.
Las mitocondrias pueden ser observadas en células vivas mediante coloración con una solución de
verde de Janus muy diluida con la cual toman un color azul - verdoso.
Esta coloración se debe al sistema citocromo - oxidasa, esta es una hemoproteína con amplia
distribución en muchos tejidos, constituye el componente terminal de la cadena de acarreadores
respiratorios presente en la mitocondria, por tanto, es el componente responsable de la reacción por
la cual los electrones resultantes de la oxidación de las moléculas del sustrato, catalizada por las
deshidrogenasa, se transfiere al aceptor final, oxigeno. En cambio en el citoplasma el colorante es
reducido a su leucobase.
La presencia de pigmentos fotosíntéticos en el cloroplasto, hace posible observarlos sin necesidad de
utilizar colorantes.
II) OBJETIVOS
Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:
• Reconocer lisosomas y mitocondrias en preparaciones frescas.
• Utilizar los colorantes adecuados para cada organela.
III) MATERIAL
1. Muestra de semen.
2. Raspado bucal
3. Solución de cristal de violeta
4. Solución de verde de Janus (1/10000)
5. Esquemas de referencia.
PROCEDIMIENTO
a) Observación de mitocondrias en epitelio bucal
1. Enjuagar varias veces la boca.
2. Obtenga una muestra de células de epitelio bucal mediante un raspado suave utilizando un
hisopo largo.
3. Realice el frotis con ayuda del hisopo, extendiendo la muestra sobre la parte central de una
lámina portaobjetos, deje secar a medio ambiente.
4. Agregar unas gotas de colorante verde de Janus hasta cubrir la muestra por 10 minutos.
5. lavar con agua corriente y secar al mechero.
6. Observe a 10 x y 40x.

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b) Observación de flagelos
1. Diluya el semen humano con suero fisiológico, mezclando una gota de semen y tres de suero.
2. Coloque una gota del colorante cristal violeta en el tubo de ensayo donde se realizó la
dilución.
6. Tome una muestra con la pipeta pasteur y colóquelo en un portaobjeto cubra con la laminilla
y observe nuevamente.
VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana Fred H.E, 1990:
Biología. Edit. Mc Graw Hill.
Smith C.A. y Wood E.J., 1997: Biología Celular Ed. Addison - Wesley Iberoamericana .
Cooper G. 2002. La Célula. Ed. Marban Libros.
http://books.google.com.pe/books?id=QcU0yde9PtkC&pg=PA512&dq=la+vida+en+la+tierra
&hl=es-
419&sa=X&ei=AwL5U_GqF87msASdu4KgBA&ved=0CDoQ6AEwBQ#v=onepage&q=la%20vida
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Núcleo
Acrosoma
Cabeza
Flagelo