seminario quimica organica

1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ENCB
PRACTICA N° 6
“CROMATOGRAFÍA”
GRUPO: 1QV1

2. OBJETIVOS
1. Conocer la técnica de cromatografía y los factores experimentales que
la afectan.
2. Aplicar y comparar los métodos cromatográficos de capa fina y
columna, para separar, identificar y purificar compuestos orgánicos.
3. Observar el efecto de diferentes fases móviles y estacionarias en la
separación.
4. Determinar los valores de Rf (factor de retención), como un parámetro en
la identificación de los compuestos separados.

3. FUNDAMENTO
• La cromatografía es un método en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, consiste en una serie
de métodos que sirven para la separación de una mezcla de
solutos. Se basa en la diferente velocidad con que se mueve
cada uno de los solutos a través de un medio poroso,
arrastrados por un disolvente en movimiento.

4. • Consiste en el reparto o distribución diferencial de dos o mas
compuestos (llamados solutos) entre dos fases.
Sólido o líquido
Líquido o
gas

5. CLASIFICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA
CONSIDERANDO EL ESTADO FÍSICO DE LAS
FASES
1. Cromatografía de gases
Fase móvil: gas inerte (helio o nitrógeno)
Fase estacionaria: liquido o sólido.
La muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de
una columna cromatográfica.
La fase móvil no interacciona con las moléculas del
analito, su única función es la de transportar el
analito a través de la columna.

6. a) Cromatografía de solido-gas (CSL)
b) Cromatografía liquido-gas (CLG)
Aplicaciones
• Medioambientales: Análisis de
pesticidas y herbicidas.
• Alimentos y aromas: fragancias y
aromas, aceites, bebidas.
• Biociencia: drogas, fármacos,
alcoholes.

7. 2) cromatografía de líquidos
Fase móvil: líquido.
Fase estacionaria: sólido o líquido.
La fase móvil circula en intimo contacto con la
fase estacionaria; al introducirle una mezcla de
analitos en la corriente de fase móvil , cada
analito avanzará a lo largo del sistema de una
velocidad diferente que va a depender de su
afinidad por cada una de las fases.

8. a)cromatografía solido-líquido (CSL)
b) cromatografía líquido-líquido (CLL)
liquido inmiscible con la fase móvil.
Cuando la fase estacionaria es solida. La
cromatografía puede llevarse a cabo en
columna y en placa (cromatografía en
capa fina)
Aplicaciones
• Tecnología de alimentos y Productos
Naturales:
Puede realizarse la caracterización de
Aceites Esenciales y Aromas.

9. CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS
a) Adsorción.
Fenómeno de adhesión superficial cuyo mecanismo consiste en
interacciones dipolo-dipolo. La fase estacionaria es un solido
finamente dividido, que retiene a los solutos por adsorción.
b)Partición.
Fenómeno de reparto entre las dos fases debido a su solubilidad. La
solubilidad es una medida de la polaridad y de otro tipo de
interacciones moleculares.

10. c) Cromatografía de intercambio
iónico.
Este tipo de cromatografía se da
cuando la fase estacionaria
presenta en su superficie iones
capaces de retener
selectivamente a iones de signo
contrario que circulan en la fase
móvil.
d) Ultra filtración.
Se debe a un fenómeno de
tamizado molecular.

11. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
En la cromatografía en columna la separación se
consigue haciendo fluir la mezcla a través de una
columna de adsorbente.
La muestra que se quiere
separar se deposita en la
parte superior de este
soporte. El resto de la
columna se llena con el
eluyente (disolvente que
constituye la fase móvil)
que, por efecto de la
gravedad, hace mover la
muestra a través de la
columna.

12. CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA
Consta de un recipiente o cámara del tamaño
adecuado para contener una placa de vidrio o
aluminio adsorbida con silica gel. En la cámara se
coloca una muestra del o los disolventes que
servirán de fase móvil.
Esta placa puede ser de tamaño variable.

13. PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
I. Tiempo muerto (t0): Tiempo que tarda un soluto idealmente no retenido, en
salir del sistema cromatográfico.
II. Tiempo de retención (Tr): Tiempo que tarda que tarda el 50% de un soluto en
eluir y corresponde a la posición máxima de concentración en un
cromatograma.
III. Velocidad de flujo del disolvente (F).
IV. Velocidad de retención (Vr): Volumen en el que se eluye el 50% de un soluto.
Se calcula mediante:
𝑉𝑟 = 𝑡𝑟𝐹

14. • En caso de la cromatografía de capa fina:
I. Frente del disolvente (fd)
II. Centro del soluto (fs)
III. Relación de frentes (Rf): Cociente de la división:
𝑓𝑠
𝑓𝑑
IV. Diferencia de Rfs: Medida del grado de separación.

15. REACTIVOS
Reactivo Propiedades fisicoquimicas Toxicidad
Silica gel para columna
Sólido blanco, inodoro, insoluble en agua y con densidad
aparente de 1.43 kg/m3
No muestra características
peligrosas al contacto con la
piel u ojos.
Hexano
Liquido incoloro, olor parecido al petróleo, es menos denso que
el agua (0.66 g/ml) e insoluble en ella.
Vapor: Irrita la nariz y garganta.
Liquido: Irrita la piel y los ojos.
Acetato de Etilo
Liquido incoloro con olor a frutas, inflamable, menos denso que
el agua (0.902 g/ml a 4°C y 0.898 a 25°C) y ligeramente miscible
en ella.
Vapor: Irrita los ojos, tráquea y
nariz.
Liquido: Irrita la piel y los ojos.
Benceno
Liquido incoloro de olor característico, muy inflamable, menos
denso que el agua (0.8736 g/ml a 25°C) e insoluble en ella.
Puede generar daños severos a
los componentes de la sangre
e incluso leucemia.
Acetona
Líquido incoloro, de olor característico, volátil y altamente
inflamable, su densidad es de 0.788 g/ml
Puede producir dolor de
cabeza, irritación de ojos, nariz
y tráquea que desaparecen al
salir del área contaminada.

16. Silica gel para
columna
Acetato de etilo.
Benceno
Acetona
Hexano

17. DESARROLLO EXPERIMENTAL CROMATOGRAFIA EN PLACA FINA
A)SEPARACION DE LOS CAROTENOS

18. B) IDENTIFICACION DE ACEITES ESCENCIALES POR
CROMATOGRAFIA EN PLACA FINA
RF= distancia recorrida por el compuesto
distancia recorrida por el disolvente

19. EXPERIENCIA 2 SEPARACCION DE CAROTENOS POR
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

20. NOTA: NO PERMITIR QUE EL NIVEL DEL DISOLVENTE BAJE MAS ALLA
DE LA SUPERFICIE DE LA SILICE PUES ESTA SE AGRIETARIA Y NO
PERMITIRIA UN DESARROLLO HOMOGENEO

21. BIBLIOGRAFIAS
• Universidad Autónoma de México, (diciembre 2007), TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS.
• Rojo Callejas F., Manual de Química Analítica Instrumental II, Anexo III, Facultad de Química UNAM,
México 2002
• Skoog A. Douglas. Principios de análisis instrumental, 5ª ed., Saunders Collage Publishing, España, 2001,
págs.: 785- 791 y 831- 836.
• HARRIS, D. - Análisis Químico Cuantitativo - Ed. Reverté - 2ª edición - España, 2001.