Este documento describe los pasos fundamentales del procesamiento histológico para microscopía óptica, incluyendo la fijación, inclusión, obtención de cortes, tinción, montaje y observación. También explica los diferentes tipos de tejidos y técnicas histológicas como las tinciones topográficas, específicas, histoquímicas e inmunocitoquímicas.
1. Introducción a la Histología
Definir que es un tejido celular.
Enumerar los diferentes tipos de tejidos y su clasificación.
Describir los diferentes pasos del procesamiento histológico para
microscopía óptica y electrónica.
Identificar el colorante y técnica apropiados para la demostración
de un tejido o estructura celular específicos.
Identificar, a partir de imágenes, secciones teñidas con tinciones
topográficas, histoquímicas, inmunocitoquímicas,
inmunofluorescencia, micrografías electrónicas de transmisión y
de barrido.
Concepto de Tejido
• Los tejidos son agrupaciones funcionales de células
• Conjunto de células ordenadas en una formación
regular.
• Entramado, fisiológicamente útil al organismo,
constituido por células especializadas morfológica y
funcionalmente.
• ....
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2. Concepto de Histología
• Término procedende del griego "histos" que significa tejido de
telar y "logos" que significa estudio o aprendizaje. Histología
puede definirse como el estudio de los tejidos
• Histología: Ciencia que estudia la estructura, la organización,
la función y la capacidad de respuesta de los tejidos
• Histología: Ciencia que estudia los entramados celulares,
fisiológicamente útiles para el organismo, que están constitudos
por células especializades morfológica y funcionalmente
• Histología general: Rama de la Histología que comprende la Citología y el
estudio de los tejido báicos.
• Histología especial: Rama de la Histología que comprende el estudio
microscópico de órganos y sistemas.
Tejidos fundamentales
Clasificación
• Tejidos epiteliales
– epitelios de revestimiento
– epitelios glandulares
• Tejidos conectivos
– conjuntivo
– sanguíneo
– adiposo
– cartilaginoso
– óseo
• Tejidos musculares
– muscular liso
– muscular esquelético
– muscular cardiaco
• Tejido nervioso
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18. Procesamiento histológico para
microscopía óptica
• Fijación
• Inclusión
• Obtención de cortes
• Tinción
• Montaje permanente
• Observación al microscopio
• Obtención de microfotografías
Montaje de las preparaciones
• Para observar con el microscopio óptico los cortes teñidos se
procede a montar las preparaciones utilizando una sustancia
cementante (medio de montaje) y un cubreobjetos.
• El medio de montaje facilita la observación y si se trata de un
medio de montaje permanente estabiliza la coloración
histológica durante mucho tiempo.
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19. Procesamiento histológico para
microscopía óptica
• Fijación
• Inclusión
• Obtención de cortes
• Tinción
• Montaje permanente
• Observación al microscopio
• Obtención de microfotografías
Observación al microscopio
Obtención de microfotografías
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20. Tinciones histológicas
• Técnicas topográficas
• Técnicas específicas
• Técnicas histoquímicas
• Técnicas inmunocitoquímicas
Técnicas histológicas específicas
• Técnicas para el tejido conjuntivo: tricrómico
de Masson, van Gieson
• Glucógeno: carmin de Best
• Mucinas: azul alcian, mucicarmín
• Lípidos: oil red O, negro sudán B, OsO4
• Ácidos nucleicos: naranja de acridina, verde
de metilo-pironina
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22. Técnicas histológicas específicas
Lípidos
Oil red O
Oil red O
Oil red O
Técnicas histológicas específicas
Ácidos nucleicos
Verde de metilo - pironina
Naranja de acridina
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23. Tinciones histológicas
• Técnicas topográficas
• Técnicas específicas
• Técnicas histoquímicas
• Técnicas inmunocitoquímicas
Técnicas histoquímicas
Implican una reacción química: transformación de un
producto en otro diferente con características
diferenciables
• PAS (ácido periódico de Shiff): detección de carbohidratos
– Ácido periodico que actúa sobre los carbohidratos produciendo la formación
de grupos aldehidos que son los que reaccionan con el colorante
• Lectinas: detección de residuos glucosilados
– Lectinas biotinadas. Tripsina o neuraminidasa para exponer los residuos
escondidos. Avidina peroxidasa. Revelado con DAB
• Reacción de Feulgen: detección de ADN
– Hidrólisis de la unión purina-deoxirribosa con HCl para formar aldheidos
que reaccionan con el colorante
• Técnicas histoenzimáticas: detección de proteínas enzimáticas
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24. Detección histoquímica de carbohidratos
Azul Alcian / PAS
PAS
Detección histoquímica de ADN
Feulgen
Feulgen
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25. Detección histoquímica de residuos
glucosilados
Lectina de tomate
Revelado de la peroxidasa
H2O2
H2O + 1/2 O2 DAB
DAB-O
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26. Técnicas histoenzimáticas
• Detección de una fosfatasa: NDPasa
NDPasa
ADP P + AMP
Nitrato Pb
Fosfato de Pb
Sulfuro amonio
Sulfuro de Pb
NDPasa
Tinciones histológicas
• Técnicas topográficas
• Técnicas específicas
• Técnicas histoquímicas
• Técnicas inmunocitoquímicas
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27. Técnicas inmunocitoquímicas
• Se basan en el empleo de anticuerpos dirigidos
hacia epitopos (grupos con características
antigénicas) concretos de moléculas
• Los anticuerpos son proteinas séricas
(inmunoglobulinas) sintetizadas por las células
plasmáticas, derivadas de los linfocitos B activados
tras reconocer un antígeno extraño (inmunógeno).
Usualmente se utilizan IgG o IgM
•Anticuerpos policlonales: conjunto de anticuerpos específicos para un
inmunógeno (diferentes epitopos)
•Anticuerpos monoclonales: específicos de un epitopo único de un
inmunógeno
Anticuerpos
Policlonales Monoclonales
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