Construcción de vectores de expresión del receptor de hormonas tiroideas tipo beta. Mutante

1. Campus Juriquilla, Querétaro
LABORATORIO FFIISSIIOOLLOOGGIIAA EEVVOOLLUUTTIIVVAA
AALLUUMMNNAA DDEE LLAA UUNNIIDDAADD AACCAADDEEMMIICCAA DDEE MMEEDDIICCIINNAA DDEE LLAA
UUNNIIVVEERRSSIIDDAADD AAUUTTOONNOOMMAA DDEE NNAAYYAARRIITT
1

2. 2
En todos los vertebrados las hormonas tiroideas (THs)
regulan la ontogenia o desarrollo del individuo así como
numerosos procesos metabólicos.
HHiippoottáállaammoo
AAddeennoo
hhiippóóffiissiiss
GG.. TTiirrooiiddeess
TTTRTRRRHHHH
TTTSTSSHSHHH
TTTT4444
TTTT3333
Desyodación
Instituto de Análisis. Biodiiagnósticos 2009. Disponible en
http://www.biodiagnostics.com.mx/bc/img/tsh01.gif
Consultado 06 Agosto 2009. 14:00 hrs

3. 3
Tiroxina (T4)
3,5,3’-Triyodotironina
(T3)
3,5-diyodotironina (T2)
₪ HHoorrmmoonnaass TTiirrooiiddeeaass
I
3´ 3
HO- -O- -R
I
5´
5

4. 4
₪ Organización Estructural de un GGeenn HHoorrmmoonnoo--RReegguullaaddoo
SSEECCUUEENNCCIIAA 55’’
RREEGGUULLAATTOORRIIAA
E.Horm/Resp (TRE) TATA
UUNNIIDDAADD DDEE
TTRRAANNSSCCRRIIPPCCIIOONN
SSEECCUUEENNCCIIAA 33’’
NNOO TTRRAADDUUCCIIBBLLEE
UU RR EE SSIITTIIOO DDEE
IINNIICCIIAACCIIOONN
La secuencia 5' regulatoria contiene 3 elementos
funcionales:
1) la región hormono-responsiva (TRE);
2) los elementos regulatorios "rio arriba" , y
3) el promotor basal también llamado caja TATA
por su secuencia rica en A y T. La unidad de trascripción incluye: el sitio de
iniciación; y las regiones codificantes (barras verdes)
y no codificantes (barras blancas), conocidas también
como exones e intrones, respectivamente.

5. 5
Hasta hace poco se creía que T4 y T3 eran las únicas THs
bioactivas. Recientemente se han acumulado evidencias acerca de
que la 3,5-diyodotironina (T2) también es bioactiva.
3´ 3
3,5-diyodotironina (T2)
TTTTRRRRββββmmmm
Específicamente se busca conocer si la T2 interactúa
con la isoforma beta mutante (TRβm), construida en
el laboratorio
I
HO- -O- -R
I
5´
5

6. 6
₪ OObbtteenncciióónn ddeell TTRRββmm aa ttrraavvééss ddeell ppccDDNNAA33,, ccoonn
aayyuuddaa ddee eennzziimmaass ddee rreessttrriicccciióónn..
NOT I (Nocardia Otitidis-cavarium)
-G-C/G-G-C-C-G-C-
-C-G-C-C-G-GC-G-Bam
HI (Bacillus amyloliquefaciens H)
-G/G-A-T-C-C-
-C-C-T-A-GG-pcDNA3
TRβ

7. 7
₪ Inserción ddee llaa sseeccuueenncciiaa KKOOZZAAKK
Área que se
clonará
DNA original
Primers
Taq Polimerasa
1. Desnaturalización 2. Etapa de Alineación 3. Replicación de la
cadena de DNA original

8. 8
₪ Ligación al Vector de Expresión y transformación en células E. coli Ligasa
T4
Marcador Col. 1 Col.2 Col.3 Col.4 Col.5 Col.6 Col.7 Col.8 Control
+
Control
-

9. 9
₪ Cultivo eenn MMeeddiioo LLííqquuiiddoo
₪ PPuurriiffiiccaacciióónn ddee PPlláássmmiiddooss

10. 10
•Los resultados de este trabajo forman parte del soporte
metodológico necesario para avanzar en el conocimiento del
mecanismo de acción de la T2.
• Se pueden abrir nuevos horizontes a la investigación de los
efectos genómicos observados en los peces estudiados en el
laboratorio de Fisiología Evolutiva.
•Con la disponibilidad de las proteínas TRβm, se podrán correr
los bioensayos indispensables para este fin.

11. Arthur C. Guyton, John E Hall. Tratado de Fisiología Médica. Elsevier Saunders. 11 Edición.
España.
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11