1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA
ESCUELA DE POST GRADO
Maestría en Ciencias Veterinarias
Mención: Salud Animal
PROYECTO DE TESIS
TÍTULO:
“Evaluación de la Respuesta Inmune Humoral en Terneros
Inmunizados con Saposina 2 de Fasciola hepatica”
Presentado por
María Noemí. Cusquisibán Minchán
Asesor Ph.D. Pedro Luis Ortiz Oblitas
Co-Asesor: PhD Ana María Espino

2. INTRODUCCIÓN
 Problema salud pública: Infección humana.
 Fasciolias: Parasitosis mas importante en ganado vacuno y ovino.
 Importantes pérdidas económicas.
 Control: Dosificaciones periódicas - alto costo.
 Fasciolicidas:Triclabendazole.
 Problema de resistencia.
 Calidad de fármacos.
 Residuos químicos en alimentos.

3. I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la región Cajamarca, no existen estudios sobre el uso de vacunas
recombinantes para inmunizar al ganado vacuno contra F.
hepatica. En el mundo del campo científico se están realizando
diversos estudios tendentes a la obtención de vacunas (Ramajo et
al., 2001; Almeida et al., 2003; Martínez et al., 2004) y se han
propuesto elaborar diversos antígenos protectores potenciales
frente al trematodo (F. hepatica), dentro de ellas está la proteína
recombinante Saposina 2 de F.hepatica (Fh SAP-2) (Espino, 2005).

4. II FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cuál es la respuesta inmune humoral en terneros
inmunizados con Saposina 2 recombinante de Fasciola
hepatica (FhSAP-2).?

5. III. JUSTIFICACIÓNDELESTUDIO
 La resistencia de las drogas existentes y la constante
presión del consumidor para disminuir los residuos de
fármacos en lácteos hacen a los antihelmínticos una opción
cada vez menos deseable para el control de la fasciolosis en
los animales domésticos (Golden et al., 2010). Una vacuna
efectiva contra la Fascioliasis sería importante para el futuro
control y prevención de la enfermedad siendo una alternativa
ecológica, de bajo costo y con una estrategia sostenible.

6. IV. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN:
1. Objetivo General:
 Evaluar la respuesta inmune humoral de la FhSAP-2 en terneros
inmunizados e infectados artificialmente con F. hepatica.
2. Objetivos Específicos:
 Evaluar los niveles de anticuerpos IgG1 en terneros inmunizados
con FhSAP-2 e infectados artificialmente con F. hepatica.
 Evaluar los niveles de anticuerpos IgG2 en terneros inmunizados
con FhSAP-2 e infectados artificialmente con F. hepatica.

7. V. HIPÓTESIS.
La FhSAP-2 produce altos títulos de anticuerpos específicos
IgG1 e IgG2 en terneros inmunizados.

8. Recuadro 1. Matriz de Consistencia y
Operacionalización de Variables
Efectividad de inmunización de la Saposina 2 de Fasciola hepatica en terneros .
problema Objetivo Variables Operacionalización de variables
Indicador Instrumento Escala Fuente
Cuál es la respuesta
inmune humoral en
terneros
inmunizados con
Saposina-2
recombinate de
F.hepatica (FhSAP-
2)?
O.General: Evaluar
la respuesta inmune
humoral de la
FhSAP-2 e
infectados
artificialmente con
F. hepatica
Y=
Respuesta
inmune
humoral
Cantidad de
anticuerpos
Elisa Absorbancia/
D.O
Suero
sanguineo
O.Esp .1 Evaluar los
niveles de
anticuerpos IgG1 en
terneros
inmunizados con
FhSAP-2 e
infectados
artificialmente con
F. hepatica
X1=
Saposina 2
Títulos de
anticuerpos
IgG1
Elisa Absorbancia/
D.O
Suero
sanguineo
O.Esp. 2 Evaluar los
niveles de
anticuerpos IgG2
en terneros
inmunizados con
FhSAP-2 e
infectados
artificiamente con
F. hepatica
X2=
Saposina 2
Títulos de
anticuerpos
IgG2
Elisa Absorbancia/
D.O
Suero
sanguineo

9. VI. MATERIALES Y MÉTODOS
1. localización
El trabajo de campo se realizará en el fundo Tres Molinos en
Cajamarca, con 48 terneros de raza Holstein. El trabajo de
laboratorio se realizará en el laboratorio de Inmunología de
la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad
Nacional de Cajamarca.

10. 6.1. Metodología.
a) Animales de Experimentación.
El estudio será desarrollado de acuerdo a las normas de la
Asociación Mundial para el Avance de la Parasitología
Veterinaria (W.A.A.V.P.). Los animales serán alimentados y
mantenidos bajo buenas prácticas de manejo durante el
tiempo que dure la investigación (Wood et al., 1995).

11. Cuadro 1. Diseño Procedimental.
Grupo Tratamiento
1-Vacunados (N=24) 200 ug Fh SAP-2 + Montanide ISA70
2- Control adyuvante (N=12) 2 mL Montanide ISA70
3- Control (N=12) -

12. b)Protocolo de inmunización.
Figura 1. Diseño experimental en semanas. La ejecución durará
aproximadamente 24 semanas.
M = Muestreo de sangre para la extracción de suero

13. 13
ELISA INDIRECTO
Principio Básico
Ag Ag Ag
Micro placas Elisa
Antígeno
SAP-2
Bloquear
sitios
libres
Anticuerpo primario
Anticuerpo secundario
marcado (E)
S
S
S S
Cambio Color = +
No Cambio Color = -

14. c)Titulación de anticuerpos IgG1 e IgG2
 Las placas de ELISA de 96 pocillos serán fijadas con el antígeno
FhSAP-2 en una concentración de 5 μg/mL.
 El antígeno se disolverá en el buffer carbonatado de fijación (CCB),
esta solución se añadirá a las placas colocando 100 μl/pocillo.
 Las placas se envuelven con papel de aluminio y se incuban a 37°C
durante la noche

15. VII. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Se realizará un análisis descriptivo, se emplearán gráficos.
Las densidades ópticas de cada grupo experimental, así como
sus respectivos logaritmos serán comparados utilizando test
paramétricos o no-paramétricos, según el caso, utilizando el
programa estadístico Instat (GraphPadSofware, California
E.E.U.U.). Un valor de P<0,05 será considerado
estadísticamente significativo.

16. VIII. PRESUPUESTO Y FINANCIAMIENTO
Partida
Etapa de
requerimiento
Descripción del
bien
MONTO SOLICITADO A: Total
(desembolso)
Unidad de
medida
Cantidad S/. S/.
UNC
Institución
Cofinanciera
Institución
Cofinanciera
Financiamiento
personal
S/. 1* 2*
Tabla 6. PRESUPUESTO ANALÍTICO DEL PROYECTO DE TESIS DE POSTGRADO
Bienes
Descripción del
bien
Total (S/.)
Proteína
recombinante
SAP 2 de
Fasciola
hepatica
10,000.00 10,000.00
Reactivos y
sustancias
diversas
3,000.00 3,000.00
Material de
laboratorio
2,000.00 2,000.00
Compra de
animales
5,000.00 5,000.00
Alimento para
animales
6,000.00 6,000.00
Materiales de
campo y
medicinas
700 700
Materiales de
escritorio
300 300
Servicios
Descripción del
servicio
Total (S/.)
Alquiler de
instalaciones
2,000.00 2,000.00
Transporte 1,000.00 1,000.00
TOTAL DE LOS RUBROS Y/O ACTIVIDADES EN NUEVOS SOLES 30,000.00 30,000.00