Este documento describe el desarrollo del ensayo inmunoenzimático (E.L.I.S.A.), desde su creación en 1960 hasta su uso actual. El E.L.I.S.A. permite detectar y cuantificar antígenos, anticuerpos u otras sustancias biológicas mediante la unión específica antígeno-anticuerpo y el uso de un marcador enzimático. El E.L.I.S.A. se ha aplicado ampliamente en medicina, industria alimentaria y estudios ambientales debido a

1. E.L.I.S.AE.L.I.S.A
ENZYME
LINKED
IMMUNO
SORBENT
ASSAY
Dra. Nora Fernández- 2007
Dra. Nora
Fernandez

2. ANTECEDENTESANTECEDENTESANTECEDENTES
En 1960 Rosalyn Yalow & SalomonSalomon BersonBerson,desarrollaron el,desarrollaron el RadioRadio
ImmunoassayImmunoassay R.I.AR.I.A ((radioinmunoensayoradioinmunoensayo))
DetecciDeteccióón den de AgsAgs oo AcsAcs marcados con radioismarcados con radioisóótopostopos 1414
C,C, 33
H,H, 3232
P,P, 125125
I,I, 5757
Co.Co.
La radioactividadLa radioactividad proporcionaproporciona una seuna seññalal que indica si unque indica si un AgAg especespecíífico ofico o unun AcAc
estestáá presente en la muestra.presente en la muestra.
Se buscaron otras alternativas seguras para el medio ambiente, qSe buscaron otras alternativas seguras para el medio ambiente, que noue no
perjudicara la salud, de menor costo, sencilla y prperjudicara la salud, de menor costo, sencilla y prááctica.ctica.
ElEl E.I.AE.I.A EnzymeEnzyme ImmunoassayImmunoassay,, enzimoenzimo inmunoensayoinmunoensayo sse desarrolle desarrollóó
independientemente porindependientemente por StratisStratis AvrameasAvrameas y Piercey Pierce..
UUsasa la unila unióón den de AcsAcs a losa los AgsAgs para identificar y medir sustancias, porpara identificar y medir sustancias, por
colorimetrcolorimetríía.a.
Primera publicaciPrimera publicacióón en 1966,n en 1966, Ancho yAncho y PorathPorath..

3. El nombreEl nombre enzymeenzyme--linkedlinked immunosorbentimmunosorbent assayassay, luego abreviado, luego abreviado
como ELISA, fue acucomo ELISA, fue acuññado por los investigadores suecosado por los investigadores suecos EvaEva
EngvallEngvall yy PeterPeter PerlmannPerlmann , describieron el procedimiento,, describieron el procedimiento,
publicado en 1971.publicado en 1971.
El mismo aEl mismo añño el procedimiento era objeto de otro arto el procedimiento era objeto de otro artíículo de losculo de los
holandesesholandeses BaukeBauke KlaasKlaas VanVan WeemenWeemen && AntoniusAntonius HWMHWM SchuursSchuurs,,
immunoassayimmunoassay usingusing antigenantigen--enzymeenzyme conjugatesconjugates, publicado en, publicado en
FEBSFEBS LettersLetters 15.15.
Las aplicaciones mas interesantes se iniciaron en el campo de laLas aplicaciones mas interesantes se iniciaron en el campo de la
microbiologmicrobiologíía y parasitologa y parasitologíía, por los grupos dea, por los grupos de AlisterAlister VollerVoller yy
DennisDennis BidwellBidwell en Londres y Joosten Londres y Joost RuitenbergRuitenberg en elen el InstituteInstitute ofof
PublicPublic HealthHealth del estado de Dutch.del estado de Dutch.
VollerVoller yy BidwellBidwell introdujeron el uso deintrodujeron el uso de microplacasmicroplacas de 96 pocillos.de 96 pocillos.
DESARROLLODESARROLLODESARROLLO

4. Engvall y Perlmann, Suecia 1971
Van Weemen y Schuurs, Holanda 1971, 1972
EngvallEngvall y Perlmann, Suecia 1971y Perlmann, Suecia 1971
Van Weemen y Schuurs, Holanda 1971, 1972Van Weemen y Schuurs, Holanda 1971, 1972
PremioPremio BiochemischeBiochemische AnalytikAnalytik, Munich,, Munich, AprilApril 19761976
De izquierda a derecha, Dra. EvaDe izquierda a derecha, Dra. Eva EngvallEngvall ((SwedenSweden), Dr. Anton), Dr. Anton SchuursSchuurs ((NetherlandsNetherlands),),
Dr. PeterDr. Peter PerlmannPerlmann ((SwedenSweden), Dr.), Dr. BaukeBauke vanvan WeemenWeemen (( NetherlandsNetherlands),), andand
Prof. JohannesProf. Johannes BBüüttnerttner ((GermanyGermany),), PresidentPresident ofof thethe GermanGerman SocietySociety ofof ClinicalClinical
ChemistryChemistry (Deutsche(Deutsche GesellschaftGesellschaft ffüürr KlinischeKlinische ChemieChemie; DGKC).; DGKC).

5. IMPORTANCIAIMPORTANCIAIMPORTANCIA
Son utilizados en el diagnSon utilizados en el diagnóóstico mstico méédico, la industria de alimentosdico, la industria de alimentos
y el estudio y control del medio ambiente.y el estudio y control del medio ambiente.
EnEn estudios serolestudios serolóógicos, hematolgicos, hematolóógicos, endocrinolgicos, endocrinolóógicos,gicos,
oncoloncolóógicos, en los transplantes, la medicina forense y lagicos, en los transplantes, la medicina forense y la
antropologantropologíía.a.
Con propCon propóósitos msitos méédicos se han aplicado en la determinacidicos se han aplicado en la determinacióón den de
hormonas y protehormonas y proteíínas plasmnas plasmááticas, antticas, antíígenos tumorales, drogas,genos tumorales, drogas,
AgAg yy AcAc dede micromicroorganismosorganismos (par(paráásitos, hongos, bacterias, virus).sitos, hongos, bacterias, virus).
Los resultadosLos resultados aportan elementos diagnaportan elementos diagnóósticos,sticos, informaciinformacióónn dede
una enfermedad yuna enfermedad y coadyuvan en lacoadyuvan en la planificaciplanificacióónn deldel tratamiento.tratamiento.

6. INTRODUCCIÓNINTRODUCCIINTRODUCCIÓÓNN
los Acs son la base de los inmunoensayoslos Acs son la base de los inmunoensayos
Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio.Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio.
En elEn el inmunoensayoinmunoensayo, el analito puede ser tanto un, el analito puede ser tanto un AcAc como un Ag.como un Ag.
LosLos AcsAcs poseen una alta especificidad y afinidad para unposeen una alta especificidad y afinidad para un AgAg
especespecíífico. Es esta unifico. Es esta unióón especn especíífica lo que permite la deteccifica lo que permite la deteccióón den de
analitos por medio de una variedad de tanalitos por medio de una variedad de téécnicas decnicas de inmunoensayoinmunoensayo..
La nomenclatura de losLa nomenclatura de los inmunoensayosinmunoensayos es confusa, en general eles confusa, en general el
nombre tiene la palabranombre tiene la palabra ““inmunoinmuno”” y posteriormente la palabra quey posteriormente la palabra que
indica el marcador utilizado (indica el marcador utilizado ( EjEj:: enzimoenzimo) y por consiguiente hace) y por consiguiente hace
referencia a la metodologreferencia a la metodologíía utilizada para la deteccia utilizada para la deteccióón de la reaccin de la reaccióónn
colorimcoloriméétricatrica, espectrofotometr, espectrofotometríía.a.
Con el avance cientCon el avance cientííficofico--tecnoltecnolóógico se han desarrolladogico se han desarrollado ““in vitroin vitro”” unauna
gran variedad degran variedad de AcsAcs contra las mas diversas sustancias biolcontra las mas diversas sustancias biolóógicas.gicas.
Ac + Ag Ag :AcAc + Ag Ag :Ac

7. DEFINICIÓN
E.L.I.S.A
DEFINICIDEFINICIÓÓNN
E.L.I.S.AE.L.I.S.A
MMéétodotodo analanalííticotico queque dependedepende de lade la reaccireaccióónn AgAg--Ac.Ac.
DeterminaciDeterminacióón de la [n de la [AgAg] o un [] o un [AcAc], mediante el uso de uno de], mediante el uso de uno de
ellos inmovilizado en fase sellos inmovilizado en fase sóólida y el otro en solucilida y el otro en solucióón.n.
CualitativoCualitativo,, cuantitativocuantitativo..
DependiendoDependiendo deldel disediseññoo: se: se puedepuede emplearemplear AgsAgs,, haptenoshaptenos, o, o AcsAcs
marcadosmarcados concon unauna enzimaenzima,, parapara revelarrevelar:: Ags, AcsAgs, Acs,, hormonashormonas oo
ffáármacosrmacos,, presentespresentes en losen los fluidosfluidos corporalescorporales..
El producto de la reacciEl producto de la reaccióón, puede ser detectado y cuantificadon, puede ser detectado y cuantificado
mediante un marcador enzimmediante un marcador enzimáático con un sustrato apropiado.tico con un sustrato apropiado.

8. Revisiones sobre E.L.I.S.ARevisiones sobreRevisiones sobre E.L.I.S.AE.L.I.S.A
REFERENCIASREFERENCIAS APLICACIONAPLICACION
CapronCapron et al, 1975et al, 1975 Varias infecciones parasitariasVarias infecciones parasitarias
BoutBout et al, 1975et al, 1975 Varias infecciones parasitariasVarias infecciones parasitarias
ScharpeScharpe et al, 1976et al, 1976 CorrelaciCorrelacióón con otras tn con otras téécnicas serolcnicas serolóógicasgicas
VollerVoller et al, 1976et al, 1976 Varias infecciones parasitariasVarias infecciones parasitarias
WisdomWisdom, 1976, 1976 RevisiRevisióón de inmunoensayosn de inmunoensayos
W.H.OW.H.O., 1976., 1976 Detallada descripciDetallada descripcióón del mn del méétodotodo
BullochBulloch yy WallsWalls, 1977, 1977 EvaluaciEvaluacióón de parn de paráámetrosmetros
RuitenbergRuitenberg et al, 1977et al, 1977 AplicaciAplicacióón a varias infecciones parasitariasn a varias infecciones parasitarias
VollerVoller et al, 1977et al, 1977 ComparaciComparacióón con el RIAn con el RIA
VollerVoller et al, 1977et al, 1977 RevisiRevisióón de kits comercialesn de kits comerciales
WallsWalls y Palmer, 1978y Palmer, 1978 Manual de tManual de téécnicascnicas
NakamuraNakamura et al, 1979et al, 1979 5 reportes sobre como hacer5 reportes sobre como hacer

9. USOS EN PARASITOLOGÍAUSOS EN PARASITOLOGUSOS EN PARASITOLOGÍÍAA
PARASITOSPARASITOS DETECCIONDETECCION REFERENCIASREFERENCIAS
Acs en humanosAcs en humanos VollerVoller et al, 1974et al, 1974
VollerVoller et al, 1975et al, 1975
EdrissianEdrissian yy DarabianDarabian, 1978, 1978
CapronCapron et al, 1975et al, 1975
BosBos et al, 1975et al, 1975
CapronCapron et al, 1975et al, 1975
CarlierCarlier et al, 1979et al, 1979
BoutBout et al, 1975et al, 1975
RuitenbergRuitenberg et al, 1974et al, 1974
RuitenbergRuitenberg et al, 1977et al, 1977
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en humanos y animalesAcs en humanos y animales
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en humanosAcs en humanos
Acs en cerdosAcs en cerdos
Acs en monosAcs en monos
PlasmodiumPlasmodium falciparumfalciparum
TrypanosomaTrypanosoma cruzicruzi
LeishmaniaLeishmania donovanidonovani
ToxoplasmaToxoplasma gondiigondii
EntamoebaEntamoeba histolyticahistolytica
SchistosomaSchistosoma mansonimansoni
FasciolaFasciola hepaticahepatica
EchinococcusEchinococcus granulosusgranulosus
TrichinellaTrichinella spiralisspiralis
ToxocaraToxocara caniscanis

10. PRINCIPIO BÁSICOPRINCIPIO BPRINCIPIO BÁÁSICOSICO
E.L.I.S.AE.L.I.S.A
De la reacciDe la reaccióón consiste;n consiste; alal suerosuero problemaproblema sese lele agregaagrega
unun conjugadoconjugado que sonque son anticuerposanticuerpos dirigidos contradirigidos contra
anticuerpos humanos oanticuerpos humanos o antantíígenogeno, los cuales se, los cuales se uniruniráán an a
una enzimauna enzima..
Las enzimas son capaces de modificar alLas enzimas son capaces de modificar al sustrato ensustrato en
presencia de un crompresencia de un cromóógenogeno produciendo un productoproduciendo un producto
coloreado que es detectado visualmente o por uncoloreado que es detectado visualmente o por un
espectrofotespectrofotóómetro.metro.

11. VENTAJAS IVENTAJAS IVENTAJAS I
Luego deLuego de 35 a35 añños mantienen vigencia como procedimientoos mantienen vigencia como procedimiento
analanalíítico de gran sensibilidad y especificidad,tico de gran sensibilidad y especificidad, sencillo,sencillo, bajobajo
costocosto, reproducible y, reproducible y adaptabadaptablele a las caractera las caracteríísticas de cualquiersticas de cualquier
laboratorio.laboratorio.
EEs verss versáátiltil,, consigue mediante el uso de la fase sconsigue mediante el uso de la fase sóólida, unalida, una
separaciseparacióón fn fáácil entre la fraccicil entre la fraccióón retenida y la fraccin retenida y la fraccióón libre.n libre.
Pueden detectarPueden detectar sustancias en el orden de lossustancias en el orden de los nanogramosnanogramos yy
picogramospicogramos por mililitro.por mililitro.
SSe han propuesto y desarrollado diferentes me han propuesto y desarrollado diferentes méétodos detodos de
amplificaciamplificacióón de la sen de la seññal (luminiscentes, cascadas enzimal (luminiscentes, cascadas enzimááticas)ticas)
que han permitido elevar la sensibilidad a la obtenida en elque han permitido elevar la sensibilidad a la obtenida en el
radioinmunoensayoradioinmunoensayo hormonal.hormonal.
AutomatizaciAutomatizacióón.n.

12. VENTAJAS IIVENTAJAS IIVENTAJAS II
Poca cantidad de muestra, suero problema (Poca cantidad de muestra, suero problema ( µµl )l )
Las enzimas son de menor costo y seguras para el operador.Las enzimas son de menor costo y seguras para el operador.
Menor tiempoMenor tiempo
Mas estables; mayor perMas estables; mayor perííodo de validez.odo de validez.
Pureza, estabilidad y cantidad delPureza, estabilidad y cantidad del AgAg
Pureza y calidad delPureza y calidad del AcAc conjugadoconjugado
Tipo y calidad de la placaTipo y calidad de la placa
SustratoSustrato
Calidad de los reactivos y bufferCalidad de los reactivos y buffer

13. CLASIFICACIÓNCLASIFICACICLASIFICACIÓÓNN

14. DETECCIÓNDETECCIDETECCIÓÓNN
DIRECTOSDIRECTOS:: se usan para la deteccise usan para la deteccióón de antn de antíígenos.genos.
INDIRECTOSINDIRECTOS:: para la deteccipara la deteccióón de anticuerpos.n de anticuerpos.
En el caso del antEn el caso del antíígeno unido a la placageno unido a la placa se puede detectarse puede detectar
mediante un anticuerpomediante un anticuerpo antianti--antantíígeno marcado (geno marcado (ELISA directoELISA directo))
o empleando uno empleando un anticuerpo primarioanticuerpo primario antianti--antantíígeno y unogeno y uno
secundariosecundario antianti primario marcado (primario marcado (ELISA indirectoELISA indirecto).).
Permite la amplificaciPermite la amplificacióón de la sen de la seññal al poderse uniral al poderse unir
uno o muno o máás anticuerpos secundarios a cada anticuerpo primario.s anticuerpos secundarios a cada anticuerpo primario.

15. SOPORTESSOPORTESSOPORTES
Heterogéneos u homogéneos según requieran o no la separación de las
fracciones libres y ligada antes de realizar la medida de la actividad enzimática.
1.1. HOMOGHOMOGÉÉNEONEO
Se usan para detectar pequeños analitos: hormonas, medicamentos o drogas
de abuso.
No requieren la separación de la unión Ac-Ag* del Ag* libre,
generalmente son más fáciles y más rápidas de realizar.
2.2. HETEROGHETEROGÉÉNEONEO E.L.I.S.AE.L.I.S.A
Se desarrollan sobre soporte sólido
Se usan diagnóstico de enfermedades infecciosas.
Requiere de separación entre la fracción libre y ligada.

16. DISEÑOSDISEDISEÑÑOSOS
COMPETITIVOCOMPETITIVO
Con reactivo limitante;Con reactivo limitante; para dosificar partpara dosificar partíículasculas
pequepequeññas con relativa pureza en una muestraas con relativa pureza en una muestra
y pueden ser marcados con una enzima.y pueden ser marcados con una enzima.
DetectanDetectan AcsAcs especespecííficos independientemente deficos independientemente de
su isotipo.su isotipo.
NO COMPETITIVONO COMPETITIVO
TambiTambiéén llamadon llamado inmunominmunoméétricotrico ““reactivo en excesoreactivo en exceso””
Con reactivo en exceso; sCon reactivo en exceso; sonon los mlos máás utilizados ens utilizados en
inmunopatologinmunopatologííaa de las enfermedades infecciosas.de las enfermedades infecciosas.
DiseDiseññados para detectar tantoados para detectar tanto AgsAgs comocomo AcsAcs..
La siglaLa sigla E.L.I.S.AE.L.I.S.A suele usarse indistintamente para ensayossuele usarse indistintamente para ensayos
competitivos o decompetitivos o de exscesoexsceso de reactivo. En general los distintosde reactivo. En general los distintos
marcadores aportan su variedad a los nombres de losmarcadores aportan su variedad a los nombres de los inmunoensayosinmunoensayos
y no suelen aceptarse demasiado las reglas de nomenclatura.y no suelen aceptarse demasiado las reglas de nomenclatura.
f(B)
[T]
f(B)
[T]
Curva dosisCurva dosis--respuestarespuesta

17. E.L.I.S.AE.L.I.S.AE.L.I.S.A
HETEROGENEOHETEROGENEOHETEROGENEO

18. CARACTERÍSTICASCARACTERCARACTERÍÍSTICASSTICAS
PuedenPueden inmunominmunoméétricostricos o de tipoo de tipo sandwichsandwich..
La separaciLa separacióón de la fraccin de la fraccióón deln del AgAg libre al unidolibre al unido
se consigue sobre la misma superficie sse consigue sobre la misma superficie sóólidalida
con la adicicon la adicióón de una solucin de una solucióón de lavado.n de lavado.
AcsAcs utilizadosutilizados
Sensibilidad:Sensibilidad: capacidad del test de identificarcapacidad del test de identificar
individuos afectados.individuos afectados.
Especificidad:Especificidad: identifica individuos no afectadosidentifica individuos no afectados
MONOCLONALESMONOCLONALES
Mayor especificidadMayor especificidad
POLICLONALESPOLICLONALES
Mayor sensibilidadMayor sensibilidad

19. VARIABLES DEL ENSAYOVARIABLES DEL ENSAYOVARIABLES DEL ENSAYO

20. VARIABLESVARIABLESVARIABLES
FASE SFASE SÓÓLIDALIDA
ADSORCIADSORCIÓÓNN
INMUNORREACTIVOSINMUNORREACTIVOS
ENZIMASENZIMAS
LAVADOSLAVADOS
TEMPERATURATEMPERATURA

21. FASE SÓLIDAFASE SFASE SÓÓLIDALIDA
SE PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE SUSTANCIASSE PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE SUSTANCIAS
Las que favorecen la adsorciLas que favorecen la adsorcióón fn fíísica (por fuerzas electrostsica (por fuerzas electrostááticas)ticas)
de las molde las molééculas deculas de AgsAgs oo AcsAcs: poliestireno, cloruro de: poliestireno, cloruro de
polivinilo, polipropileno, nylon y silicona.polivinilo, polipropileno, nylon y silicona.
Las que permiten la fijaciLas que permiten la fijacióón covalente de esos reactivos:n covalente de esos reactivos:
acrilamida, celulosa yacrilamida, celulosa y isotiocianatoisotiocianato..
Los mejores resultado se obtienen con elLos mejores resultado se obtienen con el poliestirenopoliestireno y ely el
polivinilopolivinilo, por su, por su transparencia, rigidez y propiedadestransparencia, rigidez y propiedades
adsortivasadsortivas, tienen gran afinidad por las prote, tienen gran afinidad por las proteíínas.nas.
Tubos,Tubos, placas deplacas de microtitulacimicrotitulacióónn,, ééstas requieren menorstas requieren menor
cantidad de reactivos, muestra y son aptas para lacantidad de reactivos, muestra y son aptas para la
automatizaciautomatizacióón.n.

22. INMUNORREACTIVOSINMUNORREACTIVOSINMUNORREACTIVOS
CLASIFICACICLASIFICACIÓÓNN
SOLUBLES:SOLUBLES: proteproteíínas, carbohidratos ynas, carbohidratos y áácidos nucleicos.cidos nucleicos.
PARTICULADOS:PARTICULADOS: ccéélulas.lulas.

23. SOLUBLESSOLUBLESSOLUBLES
Los mas utilizados son las proteLos mas utilizados son las proteíínas, pero tambinas, pero tambiéén sen se
pueden utilizar : carbohidratos, glicoprotepueden utilizar : carbohidratos, glicoproteíínas,nas,
nucleoprotenucleoproteíínas,nas, áácidos nucleicos,cidos nucleicos, etcetc, unidos a la fase, unidos a la fase
ssóólida.lida.
El mEl méétodo mas empleado para fijar protetodo mas empleado para fijar proteíínas a fase snas a fase sóólidalida
es la adsorcies la adsorcióón.n.
TambiTambiéén se ha utilizado la unin se ha utilizado la unióón covalente para disminuirn covalente para disminuir
las perdidas por lavado durante el procedimiento dellas perdidas por lavado durante el procedimiento del
E.L.I.S.AE.L.I.S.A..
Otra variante es la adsorciOtra variante es la adsorcióónn--fijacifijacióón, en la que la proten, en la que la proteíínana
adsorbida es fijada utilizandoadsorbida es fijada utilizando glutaraldehidoglutaraldehido..

24. ADSORCIÓNADSORCIADSORCIÓÓNN
Las molLas molééculas que se adhieren con facilidad y regularidad a losculas que se adhieren con facilidad y regularidad a los
polpolíímeros, son: protemeros, son: proteíínas, lipoprotenas, lipoproteíínas, glicoprotenas, glicoproteíínas, algunosnas, algunos
lipopolisaclipopolisacááridosridos y el ADN desnaturalizado.y el ADN desnaturalizado.
La uniLa unióón que se establece entre fase sn que se establece entre fase sóólidalida--AgAg--AcAc es de tipoes de tipo
ffíísico, producisico, produciééndose una reaccindose una reaccióón den de equilibrio entre lasequilibrio entre las
porciones fija y libre del Ag.porciones fija y libre del Ag.
En el curso de la reacciEn el curso de la reaccióón ocurre una liberacin ocurre una liberacióón gradual deln gradual del
material adherido, lo que puede modificar significativamente almaterial adherido, lo que puede modificar significativamente al
sistema.sistema.
Se minimizanSe minimizan estos cambios,estos cambios, estandarizando la adsorciestandarizando la adsorcióón,n,
concentraciconcentracióón de reactivos, pH, tiempo de incubacin de reactivos, pH, tiempo de incubacióón yn y
temperaturatemperatura..

25. REACTIVOSREACTIVOSREACTIVOS
ANTANTÍÍGENOSGENOS
Una de las dificultades es la obtenciUna de las dificultades es la obtencióón deln del AgAg adecuado.adecuado.
Por su sensibilidad, es necesario contar conPor su sensibilidad, es necesario contar con AgAg purificados ypurificados y
estables que aseguren la reproducibilidad.estables que aseguren la reproducibilidad.
LosLos AgsAgs parasitarios en general son mezclas complejas deparasitarios en general son mezclas complejas de
macromolmacromolééculasculas inmunoginmunogéénicasnicas, entre las que se hallan, entre las que se hallan AgsAgs
especespecííficos y sustancias antigficos y sustancias antigéénicas que provienen del medio denicas que provienen del medio de
cultivo o del hucultivo o del huéésped.sped.
La purificaciLa purificacióón den de AgsAgs ha mejorado sustancialmente con elha mejorado sustancialmente con el
empleo de la ingenierempleo de la ingenieríía gena genéética,tica, AcMoAcMo y suerosy sueros
monoespecmonoespecííficosficos..
Las concentracionesLas concentraciones óóptimas delptimas del AgAg se determinan en cada lotese determinan en cada lote
en base a titulaciones, tanto delen base a titulaciones, tanto del AgAg,, AcsAcs, y conjugados, y conjugados
enzimenzimááticos.ticos.

26. MARCADORESMARCADORESMARCADORES
EnzimEnzimááticosticos
Fluorescentes (Fluorescentes (FluoroinmunoensayoFluoroinmunoensayo))
LigandosLigandos (biotina,(biotina, AvidinaAvidina))
LuminiscentesLuminiscentes
((LuminoinmunoensayoLuminoinmunoensayo))
PartPartíículas (culas (liposomasliposomas)
Espectrofotometría
Fluorescencia
Quimioluminiscencia
Electro-química
)

27. ENZIMASENZIMASENZIMAS
Actividad especActividad especíífica.fica.
PurezaPureza
EstabilidadEstabilidad
SolubilidadSolubilidad
FFáácil medicicil medicióón y deteccin y deteccióónn
No se reduce la actividad por la conjugaciNo se reduce la actividad por la conjugacióónn
Bajo costo.Bajo costo.
Estables en amplio intervalo de condiciones del ensayo.Estables en amplio intervalo de condiciones del ensayo.
Con grupos funcionales adecuados para su uniCon grupos funcionales adecuados para su unióón a Ac on a Ac o
Ag.Ag.

28. ENZIMAENZIMA SUSTRATOSUSTRATO TAMPTAMPÓÓNN
OPDOPD 1010 mgmg/25/25 mLmL de tampde tampóón citrato sn citrato sóódico 0.15 M pHdico 0.15 M pH
5; a5; aññadir peroxido de hidradir peroxido de hidróógeno al 30%.geno al 30%.
TMBTMB
2.52.5 mgmg/250/250 microLmicroL de DMSO; hasta 25 ml conde DMSO; hasta 25 ml con
tamptampóón citrato sn citrato sóódico 0.1M pH 6;dico 0.1M pH 6;
aaññadir 5adir 5 microLmicroL de perde peróóxido de hidrxido de hidróógeno 30%geno 30%
PNPPPNPP
(A)4(A)4 mgmg de fosfato de naftol en 200de fosfato de naftol en 200 microLmicroL dede
dimetilformamida en un tubo de vidrio,dimetilformamida en un tubo de vidrio,
(B) 10(B) 10 mgmg de sal Fast Blue BB/ 10 ml de tampde sal Fast Blue BB/ 10 ml de tampóónn
Tris 0.05M pH 9.2Tris 0.05M pH 9.2 -- 22 mMmM cloruro de magnesio.cloruro de magnesio.
Mezclar A + B y filtrar.Mezclar A + B y filtrar.
NAPRNAPR (A) 4(A) 4 mgmg de fosfato de naftol en 200de fosfato de naftol en 200 microLmicroL dede
dimetilformamida en un tubo dedimetilformamida en un tubo de
vidrio, (B) 10vidrio, (B) 10 mgmg de sal Red BB/ 10 ml de tampde sal Red BB/ 10 ml de tampóónn
Tris 0.05M pH 9.2Tris 0.05M pH 9.2 -- 22 mMmM
cloruro de magnesio. Mezclar A + B y filtrar.cloruro de magnesio. Mezclar A + B y filtrar.
UreasaUreasa BPBP
88 mgmg/1.48 ml de 0.01M/1.48 ml de 0.01M NaOHNaOH; llevarlo a 100 ml con; llevarlo a 100 ml con
aguaagua desionizadadesionizada; a; aññadiradir
100100 mgmg de urea y EDTA a 0.2de urea y EDTA a 0.2 mMmM; ajustar; ajustar elpHelpH aa
4.8 con 14.8 con 1 mMmM NaOHNaOH oo HCl;almacenarHCl;almacenar a 4a 4ººCC
Fosfatasa alcalinaFosfatasa alcalina
E.coliE.coli
PeroxidasaPeroxidasa de rde ráábanobano
E.coliE.coli

29. OTROS MARCADORESOTROS MARCADORESOTROS MARCADORES
MARCADORMARCADOR EJEMPLOEJEMPLO
RADIOISRADIOISÓÓTOPOSTOPOS 1414
C,C, 33
H,H, 3232
P,P, 125125
I,I, 5757
CoCo
FLUOROFOROSFLUOROFOROS FluoresceFluoresceíína,na, UmbeliferonasUmbeliferonas, Rodamina,, Rodamina,
QuelatosQuelatos de tierrasde tierras
ENZIMASENZIMAS Fosfatasa alcalina,Fosfatasa alcalina, PeroxidasaPeroxidasa
QUIMIOLUMINISCENTESQUIMIOLUMINISCENTES LuminolLuminol y derivados,y derivados, LuciferasaLuciferasa / luciferina/ luciferina
PARTICULASPARTICULAS LLáátex, eritrocitos, gelatinatex, eritrocitos, gelatina
IONES METALICOSIONES METALICOS AuAu3+3+
OTROSOTROS Cofactores enzimCofactores enzimááticos (FAD), Sustratosticos (FAD), Sustratos
EnzimEnzimááticos Proteticos Proteíínas,nas, IonIonóóforosforos

30. INCUBACIÓNINCUBACIINCUBACIÓÓNN
Se trabaja con soluciSe trabaja con solucióón amortiguadora de carbonaton amortiguadora de carbonato--
bicarbonato a un pH alcalino.bicarbonato a un pH alcalino.
El tiempo de incubaciEl tiempo de incubacióón es variable, depende deln es variable, depende del
ensayo:ensayo: ½½ -- 1 hora cuando se trabaja a 371 hora cuando se trabaja a 37 °° CC

31. LAVADOSLAVADOSLAVADOS
Luego de la incorporaciLuego de la incorporacióón de cada componente (n de cada componente (AgAg,, AcAc,,
conjugado, sustrato enzimconjugado, sustrato enzimáático) , debe efectuarse una serie detico) , debe efectuarse una serie de
lavados con el fin de eliminar el exceso que no se haya fijadolavados con el fin de eliminar el exceso que no se haya fijado
(f(fíísicosico –– inmunolinmunolóógiogio) al soporte s) al soporte sóólido.lido.
Dependiendo del ensayo, habitualmente se realizan entre 3Dependiendo del ensayo, habitualmente se realizan entre 3--6, en6, en
cada una de las etapas.cada una de las etapas.
El tiempo tambiEl tiempo tambiéén depende del ensayon depende del ensayo
Como soluciComo solucióón se emplea buffer pH 7,2, que tiene ademn se emplea buffer pH 7,2, que tiene ademááss
TweenTween 20, el cual facilita la separaci20, el cual facilita la separacióón de las sustancias,n de las sustancias,
actuando como humectante, detergente y fungicida.actuando como humectante, detergente y fungicida.

32. TIPOS DE LAVADOTIPOS DE LAVADOTIPOS DE LAVADO
SoluciSolucióón de lavado: buffer conn de lavado: buffer con TweenTween 2020

33. PROCEDIMIENTO
MANUAL
PROCEDIMIENTOPROCEDIMIENTO
MANUALMANUAL

34. MÉTODO INDIRECTOMMÉÉTODO INDIRECTOTODO INDIRECTO
Se fija elSe fija el AgAg a la fase sa la fase sóólida, agreglida, agregáándose luego la muestra que sendose luego la muestra que se
quiere investigar elquiere investigar el AcAc correspondiente.correspondiente.
Posteriormente se adiciona unaPosteriormente se adiciona una antigamaglobulinaantigamaglobulina fabricada contrafabricada contra
el primerel primer AcAc CONJUGADOCONJUGADO..
Se incorpora a la reacciSe incorpora a la reaccióón una enziman una enzima SUSTRATOSUSTRATO y luego uny luego un
CROMCROMÓÓGENOGENO de la enzima .de la enzima .
La cantidad deLa cantidad de AcAc presente serpresente seráá directamente proporcional a ladirectamente proporcional a la
cantidad de producto enzimcantidad de producto enzimáático formado.tico formado.
IMPORTANTEIMPORTANTE
Antes de iniciar el procedimiento se deberAntes de iniciar el procedimiento se deberáá
realizar un protocolo de trabajo.realizar un protocolo de trabajo.

35. E.L.I.S.A INDIRECTOE.L.I.S.A INDIRECTOE.L.I.S.A INDIRECTO
DETECCIÓN DE AcsDETECCIDETECCIÓÓN DE AcsN DE Acs
Ag en pocilloAg en pocillo
lavadolavado
Ac especAc especííficofico
en muestraen muestra
enzima conjugada (E)enzima conjugada (E)
con 2con 2dodo AcAc
lavadolavado lavadolavado
Sustrato (S)Sustrato (S)
11 22 33 44

36. DESDE EL PUNTO DE VISTA
ANALÍTICO
DESDE EL PUNTO DE VISTADESDE EL PUNTO DE VISTA
ANALANALÍÍTICOTICO
SENSIBILIDAD:SENSIBILIDAD: expresa la capacidad de la texpresa la capacidad de la téécnica paracnica para
detectar las menores concentraciones posibles de losdetectar las menores concentraciones posibles de los
anticuerpos (o antanticuerpos (o antíígenos) buscados.genos) buscados.
ESPECIFICIDAD:ESPECIFICIDAD: expresa la capacidad de esa texpresa la capacidad de esa téécnicacnica
para diferenciar los anticuerpos especpara diferenciar los anticuerpos especííficos (o antficos (o antíígenos)genos)
buscados de otros presentes en el material en estudio.buscados de otros presentes en el material en estudio.

37. PASOSPASOS
Dilución de la muestra
Incubación de la muestra
Lavados
Conjugado
Lavados
Sustrato-cromógeno
Solución stop
Lectura

38. ++
--
44
11
33
22
--
++
Incubación de la muestraIncubaciIncubacióón de la muestran de la muestra

39. ConjugadoConjugadoConjugado

40. Sustrato-cromógenoSustratoSustrato--cromcromóógenogeno

41. LECTURALECTURALECTURA

42. CÁLCULOCCÁÁLCULOLCULO
En los cualitativos se realiza en base a las densidadesEn los cualitativos se realiza en base a las densidades óópticas de lospticas de los
controles negativos.controles negativos.
Los puntos de corte ya estLos puntos de corte ya estáán establecidos.n establecidos.
CutCut off =off = DO (CDO (C--) + DO (C) + DO (C--)) + 0.150 = 0,270+ 0.150 = 0,270
22
ÍÍndice de muestra =ndice de muestra = 0,5080,508 = 1,88= 1,88
0,2700,270
ControlesControles Valor esperadoValor esperado
NegativoNegativo < 0,3< 0,3
PositivoPositivo > 0,8> 0,8
INTERPRETACIINTERPRETACIÓÓNN
NegativoNegativo < 0,9< 0,9
DudosoDudoso 0,90,9 –– 1,11,1
PositivoPositivo > 1,1> 1,1

43. CUANTITATIVOSCUANTITATIVOSCUANTITATIVOS
En los cuantitativos se establece el cEn los cuantitativos se establece el cáálculo en base a los calibradores o estlculo en base a los calibradores o estáándares. Debe serndares. Debe ser
homoghomogééneos, puros y quneos, puros y quíímicamente idmicamente idéénticos al analito que se va a medir.nticos al analito que se va a medir.
Las curvas permiten discriminar entre muestras normales y anormaLas curvas permiten discriminar entre muestras normales y anormalesles
Deben tener un intervalo razonable.Deben tener un intervalo razonable.
TTÍÍTULOS:TULOS: mmááxima dilucixima dilucióón del suero problema que arroja un resultado positivo (n del suero problema que arroja un resultado positivo (EjEj: 1/16;: 1/16;
1/128; 1/2048)1/128; 1/2048)
UNIDADES PREDETERMINADASUNIDADES PREDETERMINADAS: cuando el valor obtenido como resultado es: cuando el valor obtenido como resultado es
comparado a un patrcomparado a un patróón predeterminado de densidadn predeterminado de densidad óóptica, fluorescencia , luminiscencia optica, fluorescencia , luminiscencia o
concentraciconcentracióón conocida den conocida de AcAc especespecííficos, que expresa elficos, que expresa el ““punto de cortepunto de corte”” de la tde la téécnicacnica
((cutoffcutoff o valor lo valor líímite que diferencia positivos y negativos) (mite que diferencia positivos y negativos) (EjEj: UI/ml; Index: UI/ml; Index ValueValue;;
MIU/ml; OD; etc.)MIU/ml; OD; etc.)

44. 11
1/21/2
1/161/16
1/641/64
1/1281/128
1/2561/256
1/41/4
1/81/8
BUFFERBUFFER
CUANTITATIVOCUANTITATIVOCUANTITATIVO

45. 11
1/21/2
1/161/16
1/641/64
1/1281/128
1/2561/256
1/41/4
1/81/8
DILUCIÓNDILUCIDILUCIÓÓNN

46. 11
1/21/2
1/161/16
1/641/64
1/1281/128
1/2561/256
1/41/4
1/81/8
++
++
++
++
++
++
RESULTADORESULTADORESULTADO

47. SANDWICH
DOBLE ANTICUERPO
SANDWICHSANDWICH
DOBLE ANTICUERPODOBLE ANTICUERPO
EEnsayonsayo de captura de antde captura de antíígeno y deteccigeno y deteccióón medianten mediante inmunocomplejosinmunocomplejos
Se recubre el pocillo con un primer anticuerpoSe recubre el pocillo con un primer anticuerpo antianti--antantíígeno.geno.
DespuDespuéés de lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problemas de lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problema
en la que se encuentra el anten la que se encuentra el antíígeno, que sergeno, que seráá retenido en el pocillo al serretenido en el pocillo al ser
reconocido por el primer anticuerpo.reconocido por el primer anticuerpo.
DespuDespuéés de un segundo lavado que elimina el material no retenido ses de un segundo lavado que elimina el material no retenido se
aplica una soluciaplica una solucióón con un segundo anticuerpon con un segundo anticuerpo antianti--antantíígeno marcado.geno marcado.
AsAsíí cada molcada moléécula de antcula de antíígeno estargeno estaráá unida a un anticuerpo en la baseunida a un anticuerpo en la base
que lo retiene y un segundo anticuerpo que lo marca.que lo retiene y un segundo anticuerpo que lo marca.
Tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la amplificTiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la amplificaciacióón den de
seseññal que otorga el segundo anticuerpo.al que otorga el segundo anticuerpo.
Con antCon antíígenogeno:: En este caso el conjugado es un antEn este caso el conjugado es un antíígeno unido a ungeno unido a un
cromcromóógeno.geno.

48. AUTOMATIZACIÓNAUTOMATIZACIAUTOMATIZACIÓÓNN

49. AUTOMATIZACIÓNAUTOMATIZACIAUTOMATIZACIÓÓNN
Existen equipos electrExisten equipos electróónicos, que permiten la automatizacinicos, que permiten la automatizacióónn
de los procedimientos y el ande los procedimientos y el anáálisis computacional de loslisis computacional de los
resultados.resultados.
La lectura y medida de la [La lectura y medida de la [ AcsAcs--AgAg ] se hace mediante] se hace mediante
colorcoloríímetros,metros, fluorfluoróómetrosmetros, fot, fotóómetros, etc.,metros, etc.,
Facilitando laFacilitando la padronizacipadronizacióónn y reproducibilidad de lasy reproducibilidad de las
ttéécnicas, mayor precisicnicas, mayor precisióón y registro de resultados, mejorn y registro de resultados, mejor
cuantificacicuantificacióón y valoracin y valoracióón de los mismos.n de los mismos.
Disminuye los errores y permite un mejor control de calidad.Disminuye los errores y permite un mejor control de calidad.

50. CONTROL DE CALIDADCONTROL DE CALIDADCONTROL DE CALIDAD
Es el procedimiento que verifica si todo el proceso deEs el procedimiento que verifica si todo el proceso de
laboratorio se desarrolla de acuerdo con las condicioneslaboratorio se desarrolla de acuerdo con las condiciones
preestablecidaspreestablecidas
Se distinguen dos tipos de control: el control de calidadSe distinguen dos tipos de control: el control de calidad
interno (CCI) y el control de calidad externo (CCE)interno (CCI) y el control de calidad externo (CCE)

51. AUTOMATIZACIÓN DE LAVADOAUTOMATIZACIAUTOMATIZACIÓÓN DE LAVADON DE LAVADO
En 1980 se lanza al mercado el primer analizadorEn 1980 se lanza al mercado el primer analizador semiautomatizadosemiautomatizado,, OrganonOrganon--TechnikaTechnika

52. ANALIZADORESANALIZADORESANALIZADORES
IMXIMXIMX
AXSYMAXSYMAXSYM

53. MEIA
enzimoinmunoensayo con micropartículas
MEIAMEIA
enzimoinmunoensayoenzimoinmunoensayo con micropartcon micropartíículasculas
Utiliza partUtiliza partíículas de lculas de láátextex submicroscsubmicroscóópicaspicas recubiertas con (recubiertas con (AgAg óó AcAc))..
Se combinanSe combinan:: muestramuestra ++ micropartmicropartíículasculas ++ conjugado en la cubeta deconjugado en la cubeta de
reaccireaccióónn..
Una sondaUna sonda aspira la mezcla del pocillo de incubaciaspira la mezcla del pocillo de incubacióón y la dispensa en lan y la dispensa en la
celdilla matrizceldilla matriz (fibra de vidrio)(fibra de vidrio)
Utiliza comoUtiliza como conjugado fosfatasa alcalinaconjugado fosfatasa alcalina y comoy como sustrato 4sustrato 4--metilmetil--
umbeliferilfosfatoumbeliferilfosfato (MUP).(MUP).
El conjugado de fosfatasa alcalina cataliza la disociaciEl conjugado de fosfatasa alcalina cataliza la disociacióón del MUPn del MUP
formformáándosendose 44--metilumbeliferonametilumbeliferona (MU) fluorescente(MU) fluorescente..
El complejo se une en forma irreversible a la celdilla de matrizEl complejo se une en forma irreversible a la celdilla de matriz; el lavado de; el lavado de
la celdilla elimina los materiales no unidos.la celdilla elimina los materiales no unidos.
El sistemaEl sistema óópticoptico MEIA mide la tasa de formaciMEIA mide la tasa de formacióón de MU.n de MU.
Se mide la intensidad deSe mide la intensidad de luzluz fluorescentefluorescente emitidaemitida por la superficie de lapor la superficie de la
celdillaceldilla matrixmatrix..

54. IMXIMXIMX
Se carga el carrusel con las muestras y los dispositivos de reacSe carga el carrusel con las muestras y los dispositivos de reaccicióónn
Se inserta el paquete de reactivosSe inserta el paquete de reactivos
Se presiona la teclaSe presiona la tecla ““runrun””
Lee un cLee un cóódigo de barras del reactivo e identifica la prueba.digo de barras del reactivo e identifica la prueba.
Combina automCombina automááticamente la soluciticamente la solucióónn microparticuladamicroparticulada con la muestra en elcon la muestra en el
dispositivo de reaccidispositivo de reaccióón. En este paso el analito es capturado por eln. En este paso el analito es capturado por el AcAc sobre lasobre la
superficiesuperficie microparticuladamicroparticulada..
AAññade un conjugado con fosfatasa alcalina, que se une al complejoade un conjugado con fosfatasa alcalina, que se une al complejo anterioranterior
sobre la superficiesobre la superficie microparticuladamicroparticulada , formando un, formando un sandwichsandwich ““ AcAc--analitoanalito--
conjugadoconjugado””..
Transfiere la soluciTransfiere la solucióón a una matriz de fibra de vidrio.n a una matriz de fibra de vidrio.
AAññade un sustratoade un sustrato ““MUPMUP”” que se convierte por la accique se convierte por la accióón de la fosfatasan de la fosfatasa
alcalina en un producto fluorescente.alcalina en un producto fluorescente.
Lee la fluorescencia de la superficie de la celdilla matriz .Lee la fluorescencia de la superficie de la celdilla matriz .
La lectura es proporcional al analito presente en la muestra.La lectura es proporcional al analito presente en la muestra.
El valor de la concentraciEl valor de la concentracióón se obtiene a partir de una curva de calibracin se obtiene a partir de una curva de calibracióón.n.

55. QUÉ ES LA AVIDEZ DE Acs ?QUQUÉÉ ES LA AVIDEZ DEES LA AVIDEZ DE AcsAcs ??
Indica la estabilidad de la malla de unión Ag-Ac.
Fuerza con la cual el Ac se une al Ag.
Regida por la ley de acción de masas: K = Ka/Kd
Ka : constante de la tasa de asociación
Kd: constante de la tasa de disociación

56. AVIDEZ
IgG
BAJABAJA
ALTAALTA
Selección de linfocitos BSelecciSeleccióón de linfocitos Bn de linfocitos B
Aumenta con el tiempoAumenta con el tiempo
Permite estimar el tiempo transcurrido desde el inicio de la infPermite estimar el tiempo transcurrido desde el inicio de la infeccieccióónn
PrimoinfecciPrimoinfeccióón Semanas Mesesn Semanas Meses AAññosos

57. INTERPRETACIÓNINTERPRETACIINTERPRETACIÓÓNN
ÍÍNDICENDICE AVIDEZAVIDEZ
IgGIgG
< 0.200< 0.200 bajabaja
0.2000.200 << < 0.300< 0.300 mediamedia
>> 0.3000.300 altaalta
Un índice de Avidez elevado indica una infección de más
4 – 6 meses de evolución
UnUn ííndice de Avidez elevado indica una infeccindice de Avidez elevado indica una infeccióón de mn de mááss
44 –– 6 meses de evoluci6 meses de evolucióónn

58. < 0.200< 0.200 >> 0.3000.300

59. ISAGA
Immunosorbent Agglutination Assay
ISAGAISAGA
Immunosorbent Agglutination Assay
FUNDAMENTOFUNDAMENTO
Ej.; paraEj.; para ToxoplasmaToxoplasma gondiigondii IgMIgM
Las placas, revestidas con sueroLas placas, revestidas con suero antianti--inmunoglobulina M humana, captan lasinmunoglobulina M humana, captan las
IgMIgM del suero (muestra) diluida.del suero (muestra) diluida.
Luego de los lavados la presencia deLuego de los lavados la presencia de AcsAcs antianti T.T. gondiigondii de dicho isotipo, esde dicho isotipo, es
detectada por su capacidad de aglutinar una suspensidetectada por su capacidad de aglutinar una suspensióón de parn de paráásitos (sitos (AgAg ) que) que
se agrega a posteriori.se agrega a posteriori.
El ensayo se visualiza como en la tEl ensayo se visualiza como en la téécnica de aglutinacicnica de aglutinacióón directa, es decir unn directa, es decir un
sedimento de parsedimento de paráásitos en el fondo del pocillo indica un resultado negativo,sitos en el fondo del pocillo indica un resultado negativo,
mientras que la formacimientras que la formacióón de un velo sobre las paredes se interpreta comon de un velo sobre las paredes se interpreta como
resultado positivo.resultado positivo.
Evita las interferencias deEvita las interferencias de IgMIgM inespecinespecííficas como: antinucleares o factorficas como: antinucleares o factor
reumatoideoreumatoideo y tambiy tambiéén previene de la inhibicin previene de la inhibicióón competitiva que producen lasn competitiva que producen las
altas concentraciones dealtas concentraciones de IgGIgG antianti T.T. gondiigondii generando falsos positivos y falsosgenerando falsos positivos y falsos
negativos.negativos.
Mayor sensibilidad y especificidad que la hemoaglutinaciMayor sensibilidad y especificidad que la hemoaglutinacióón.n.

60. CONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONES
El E.L.I.SAEl E.L.I.SA eses unauna herramientaherramienta úútiltil queque coadyuvacoadyuva alal diagndiagnóósticostico yy seguimientoseguimiento
dede muchasmuchas enfermedadesenfermedades infecciosasinfecciosas..
NoNo debedebe utilizarseutilizarse comocomo úúnicanica ttéécnicacnica..
SeSe debedebe tenertener conocimientoconocimiento de lade la relacirelacióónn huhuééspedsped--parparáásitosito en laen la interpretaciinterpretacióónn..
CualitativoCualitativo--cuantitativocuantitativo
SensibilidadSensibilidad--especificidadespecificidad;; ExactitudExactitud yy presicipresicióónn..
Exactitud: el valor verdadero o real de un analito con un margenExactitud: el valor verdadero o real de un analito con un margen estrecho deestrecho de
error que no afecta la interpretacierror que no afecta la interpretacióón del resultado.n del resultado.
PresiciPresicióónn: la posibilidad de ejecutar repetidas pruebas con la misma mues: la posibilidad de ejecutar repetidas pruebas con la misma muestra ytra y
obtener resultados muy poco diferentesobtener resultados muy poco diferentes
LaLa eleccieleccióónn unauna uu otraotra metodologmetodologííaa dependedepende tambitambiéénn de:de:
incidenciaincidencia /prevalencia/prevalencia
RecursosRecursos dede cadacada laboratoriolaboratorio ;; nnúúmeromero dede muestrasmuestras a sera ser procesadasprocesadas..

61. TENER PRESENTETENER PRESENTETENER PRESENTE
En muchos casos la detecciEn muchos casos la deteccióón den de AcsAcs oo AgsAgs presenta mayor sensibilidadpresenta mayor sensibilidad
diagndiagnóóstica que el hallazgo del agente.stica que el hallazgo del agente.
LosLos AcsAcs circulantes pueden hallarse en grandes cantidades, sin que estocirculantes pueden hallarse en grandes cantidades, sin que esto
implique un rol protector.implique un rol protector.
RelaciRelacióón hun huééspedsped--parparáásitosito-- EvoluciEvolucióón de la infeccin de la infeccióónn-- TratamientosTratamientos
HuHuééspedsped
Desarrollo del sistema inmunolDesarrollo del sistema inmunolóógicogico
Respuesta individualRespuesta individual
InmunocompetentesInmunocompetentes // InmunodeprimidosInmunodeprimidos
ParParáásitosito
LocalizaciLocalizacióónn
Tipos deTipos de AgsAgs: membrana; citoplasm: membrana; citoplasmááticos; metabticos; metabóólicoslicos

62. BIBLIOGRAFÍABIBLIOGRAFBIBLIOGRAFÍÍAA
Lequin, R.M. Enzyme Immunoassay (EIA)/Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay (ELISA). Clinical Chemistry. 2005.
51:12 2415–2418
VollerVoller, A, A. The Enzyme Linked. The Enzyme Linked ImmunosorbentImmunosorbent AssayAssay
(E.L.I.S.A). W.H.O 1978. 2 (1)(E.L.I.S.A). W.H.O 1978. 2 (1)
van Weemen, B.K. The Rise of EIA/ELISA. Clinical
Chemistry. 2005. 51:12.
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Goers, J. Immunochemical Techniques. Laboratory Manual.