Este documento describe la prueba ELISA y sus diferentes tipos (directo, indirecto, sándwich), y luego detalla un estudio que utilizó la prueba ELISA para detectar el antígeno del virus de la diarrea viral bovina en muestras de suero sanguíneo de bovinos. El estudio analizó 878 muestras de suero de 9 predios lecheros y encontró que la prueba ELISA puede detectar animales infectados de manera rápida y sencilla, lo que permite prevenir la propagación de la enfermedad y

1. PRUEBA ELISA EN ANIMALES
Carlos Martínez, Daniel Burgos & Paula Méndez
BIOLLOGÍA CELULAR & MOLECULAR
Concepción Bailón Aijón

2. ¿Qué es la prueba ELISA?
• ELISA son las siglas por las que se conoce al ensayo por
inmunoabsorción ligado a enzimas (en inglés enzyme-linked
immunosorbent assay) y se trata de una técnica de laboratorio que
permite detectar pequeñas partículas llamadas antígenos
destacándolas de otras.

3. ¿Cómo funciona?
• Para poder identificar los antígenos se utilizan moléculas con dos
componentes acoplados: un anticuerpo y una enzima, se
presentan cambios de color u otros tipos manifestaciones en la
prueba como la espectrofotometría.
• Sacamos una prueba Elisa de: Orina, Sangre, Placenta, Leche,
Pulmones.

4. Tipos de ELISA…
• ELISA DIRECTO: Consiste en recoger una muestra a estudiar y
ponerla en un pocillo (un recipiente pequeño) en frente de una
muestra igual pero contaminada con el germen a estudiar, y otra
muestra en la que se sabe que no hay germen. Se aplica el
anticuerpo con la enzima en los tres pozos y se compara la
muestra a estudio con las otras dos.

5. • ELISA INDIRECTO: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero
en este caso se añade primero un anticuerpo sin enzima y después
uno con enzima. De esa forma, la señal que emite el enzima es
mucho más potente y la prueba es más sensible.

6. • ELISA SANDWICH: en este caso en los pocillos primero se añade un
anticuerpo y después la muestra, para que los antígenos queden ya retenidos en
el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo con la enzima. Es la forma
más eficaz de realizar la prueba.

7. • INMUNOFLUORECENCIA INDIRECTA: Estas técnicas utilizan
normalmente cultivos celulares infectados con el virus o la
bacteria sobre la que se desea comprobar si hay o no anticuerpos
en el antígeno . Tras la incubación con el antígeno; si hay
anticuerpos se unirán a las células infectadas . La unión se
visualiza tras la adición de un conjugado anti-inmunoglobulina y la
posterior observación al microscopio de fluorescencia o
convencional respectivamente.

8. EJEMPLO: Utilización del Método de Elisa en la detección directa
de antígeno de
virus diarrea viral bovina en muestras de suero sanguíneo de
bovinos
• La diarrea viral bovina se presenta principalmente como una
gastrointeritis acompañada de diarrea suave, ulceras en mucosa
oral y nasal, también se presentan abortos en hembras gestantes,
el ganado de carne y leche también se ve fuertemente afectado
• Del 60% al 80% del ganado presenta anticuerpos haciendo frente a
este agente patológico, y entre el 1% y 2% se encuentran
persistentemente afectados.

9. MOTIVO DEL ARTÍCULO
• Detectar de manera pertinente esa diarrea patológica fácilmente
contagiosa, que afecta de manera considerable la productividad y
la reproducción del ganado, dejando así grandes déficit en la
economía de los dueños
• También, el propósito de este estudio fue aplicar la utilización de
un método inmunoenzimático para detectar la presencia de
animales PI en planteles lecheros

10. LOS MATERIALES:
• Se utilizaron:
• Nueve predios lecheros
• 878 bovinos
• Un numero un poco más elevado de pruebas Elisa (prevención de
un posible fallo en las pruebas)

11. TIPO DE PRUEBA EN LA DETECCIÓN DE ESTA
ENFERMEDAD
• El diagnóstico definitivo de esta enfermedad se hace
tradicionalmente por es aislamiento e identificación del virus por
medio de cultivos celulares, pero debido al tiempo que se demora
la prueba y el riesgo de presencia de cepas que dañen o alteren
los resultados al ser un número elevado.
• La técnica de ELISA para la detección de antígeno viral se basa en
el método “sándwich, que combina la acción de un anticuerpo de
captura unido a una fase sólida y de un anticuerpo detector,
marcado con un sistema señalizador como es la peroxidasa, la
sensibilidad que presenta este método es equivalente a la del
aislamiento viral.

12. LOS MÉTODOS
• Se seleccionó ganado mayor a seis meses, muestreados apartir de
su vena yugular.
• Se utilizó la prueba ELISA tanto para el análisis serológico de DVB
como para el análisis serológico.
• Para la interpretación de los resultados se realizó un cálculo que
consistió en el promedio de la densidad óptica de los duplicados
de cada suero problema, a las que se les restó el promedio del
control negativo.

13. RESULTADOS…
• En el caso de la prueba serológica, los valores menores de 30% se
consideraron negativos, los que se encontraban entre 30 y 40% se
consideraron dudosos y todos aquellos mayores de 40% resultaron
positivos. Las muestras dudosas se repitieron para clasificarlas
finalmente como positivas o negativas definitivas.
• En el caso de la prueba de determinación de antígeno, los valores
menores de 20% se consideraron negativos, los que se encontraban
entre 20 y 30% eran dudosos y los mayores de 30% fueron
positivos. Del mismo modo que en la prueba serológica las
muestras dudosas se repitieron para clasificarlas definitivamente
en negativas o positivas.

14. GRAFICAMENTE…

15. CONCLUSIÓN
• Se concluyó que el método utilizado permite detectar animales en
forma rápida y sencilla, pudiendo utilizarse en gran cantidad de
muestras.
• La principal fuente de contagio de los animales susceptibles está en las
secreciones y excreciones de los animales infectados persistentes e
inmunotolerantes , condición que se produce en la etapa gestacional,
específicamente antes de los 120 días de preñez, período en que el
sistema inmune del embrión aún no se desarrolla adecuadamente.
• Previniendo este tipo de enfermedades, además de cuidar el bienestar
de los animales, se cuida el bolsillo ya que con esto subsanamos gastos e
invertimos más en el mejoramiento de la producción pecuario.