Estándares de calidad de Agua en Albercas de México

1. NORMA Oficial MexicanaNOM-245-SSA1-2010,Requisitossanitariosycalidaddel aguaque debencumplirlasalbercas.
Al margenun selloconel EscudoNacional,que dice:EstadosUnidosMexicanos.- Secretaríade Salud.
MIKEL ANDONIARRIOLA PEÑALOSA encooperacióncon el C.PEDROHECTOR CARREON AZCUE , ComisionadoFederal
para la ProteccióncontraRiesgosSanitariosyPresidente delComitéConsultivoNacional de Normalizaciónde
RegulaciónyFomentoSanitario,confundamentoenlosartículos39 de la Ley Orgánicade la AdministraciónPública
Federal;4 de la LeyFederal de ProcedimientoAdministrativo;3fraccionesXIIIyXXII,17 Bis fracciónIII,17 Bis2, 116, 118
fraccionesI,II y VII,119 fracciónII y 122 de laLey General de Salud;47 fracción IV de la Ley Federal sobre Metrologíay
Normalización;28del Reglamentode laLeyFederal sobre MetrologíayNormalización;2literal CfracciónX, 36 y 37 del
ReglamentoInteriorde laSecretaríade Salud;2 fracciónI incisosa) y c), 12 fraccionesII, IV y V,227, 1219 y 1220
fracciónIV del Reglamentode laLeyGeneral de SaludenMateriade Control Sanitariode Actividades,Establecimientos,
Productosy Servicios;3fraccionesIincisosi y n, II,V,IX y XI;10 fraccionesIV yVIIIdel Reglamentode laComisión
Federal parala ProteccióncontraRiesgosSanitarios,y
CONSIDERANDO
Que en cumplimientoaloprevistoenel artículo46 fracciónI de la LeyFederal sobre MetrologíayNormalización,el
Subcomité de SaludAmbiental presentóel 20de agosto de 2009 al Comité ConsultivoNacional de Normalizaciónde
RegulaciónyFomentoSanitario,el anteproyectode lapresente NormaOficial Mexicana.
Que con fechadel 5 de abril de 2010, encumplimientodel acuerdodel Comitéyde loprevistoenel artículo47 fracciónI
de la LeyFederal sobre Metrologíay Normalización,se publicóenel DiarioOficial de laFederaciónel proyectode la
presente NormaOficial Mexicana,aefectode que dentrode lossiguientessesentadíasnaturalesposterioresadicha
publicación,losinteresadospresentaransuscomentariosal Comité ConsultivoNacional de Normalizaciónde Regulación
y FomentoSanitario.
Que con fechaprevia,fueronpublicadasenel DiarioOficial de laFederación,lasrespuestasaloscomentariosrecibidos
por el mencionadoComité,enlostérminosdelartículo47 fracciónIII de la LeyFederal sobre Metrologíay
Normalización.
Que en atenciónalas anterioresconsideraciones,contandoconlaaprobacióndel Comité ConsultivoNacional de
Normalizaciónde Regulación yFomentoSanitario,tengoabienordenarlapublicaciónenel DiarioOficial de la
Federaciónlasiguiente:
NORMA OFICIALMEXICANA NOM-245-SSA1-2010,REQUISITOS SANITARIOSYCALIDADDEL AGUA
QUE DEBEN CUMPLIR LAS ALBERCAS
PREFACIO
En la elaboraciónde estanormaparticiparonlasunidadesadministrativase institucionessiguientes:
SECRETARIA DE SALUD
ComisiónFederalparalaProteccióncontra RiesgosSanitarios.
CentroNacional de ProgramasPreventivosyControl de Enfermedades.
SECRETARIA DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
ComisiónNacional delAgua.
InstitutoMexicanode Tecnologíadel Agua.
SECRETARIA DE TURISMO

2. ASOCIACION MEXICANA DEHOTELES Y MOTELES A. C.
ASOCIACION MEXICANA DEPARQUESACUATICOSY BALNEARIOS,A.C.
LION BUSINESS,S.A.DE C. V.
INSTAPURA,S.A.DE C. V.
ASOCIACION MEXICANA DEDESARROLLADORESTURISTICOS,A.C.
INDICE
0. Introducción
1. Objetivoycampode aplicación
2. Referencias
3. Definiciones
4. Abreviaturas
5. DisposicionesEspecíficas
6. Control Sanitario
7. Muestreoy métodosde prueba
8. Concordanciacon normasinternacionales
9. Procedimientode evaluaciónde laconformidad
10. Bibliografía
11. Observanciade laNorma
12. Vigencia
Apéndice NormativoA.Aislamientoe identificaciónde NaegleriasppyAcanthamoebaspp.
Apéndice NormativoB.Determinaciónde bacteriascoliformesfecales.Métododel númeromásprobable (NMP).
0. Introducción
Con lafinalidadde preveniryminimizarriesgosalasaludpúblicaporenfermedadesgastrointestinales,de lapiel yotras,
ocasionadasporingestión,contactoe inhalaciónde microorganismospatógenosysustanciasquímicasenel aguade
albercas,esnecesariollevaracabo el control y vigilanciade lascondicionessanitariasde operaciónymantenimientode
lasinstalaciones;asícomo el monitoreosistematizadode parámetrosfisicoquímicosyde microorganismosque
determinanlacalidaddel agua.
1. Objetivoycampode aplicación
1.1. Esta normaestablece lasespecificacionessanitariasque debencumplirlasalbercasconel propósitode minimizaro
controlarriesgosa la saludde losusuarios.
1.2. Esta normaes aplicable atodaslasalbercasde centrosvacacionales,clubesdeportivos,balnearios,centrosde
enseñanza,hoteles,moteles,desarrollosturísticos,parquesacuáticosocualquieraque preste unserviciopúblico.
2. Referencias

3. 2.1. NormaOficial MexicanaNOM-008-SCFI-2002,SistemaGeneral de Unidadesde Medida.
3. Definiciones
Para losefectosde estanormase entiendepor:
3.1. Alberca.- Estanque artificialde aguaconstruido parafacilitarel nado,larecreación,el relajamiento,laenseñanzao
entrenamientodeportivo.
3.2. Bitácora.- Libro,cuadernooregistrofoliadoatravésde un sistemaelectrónicoomanual.
3.3. Biopelícula.- Crecimientode microorganismosenformade capagelatinosaque se adhiere aunasuperficie.
3.4. Bromoresidual libre.- Eslacantidadresidual de ioneshipobromitoyácidohipobromoso.
3.5. Bromaminas.- Eslacantidadde bromocombinadoconnitrógenoamoniacal oconcompuestosnitrogenados.
3.6. Circulación.- Acciónmecánicaoaporte de agua que permite lamezclayel movimientodel aguaentodoslos
sectoresde laalberca,evitandosuestancamiento.
3.7. Clororesidual libre.- Eslacantidadresidual de ioneshipocloritoyácidohipocloroso.
3.8. Cloraminas.- Eslacantidadde clorocombinadocon nitrógenoamoniacal oconcompuestosnitrogenados.
3.9. Desinfección.- Acciónde inactivarodestruirmicroorganismospatógenospormediode laaplicaciónde productos
químicoso procesosfísicos.
3.10. Encauce.- Obra dentrode un río o arroyo para modificarsucorriente conel finde construiruna alberca.
3.11. Equipode mediciónde ORP.- Dispositivoque mide el intercambiode electronespormediode lacorriente eléctrica
generadaporlas reaccionesde óxidoreducción;yque representalaconcentraciónoactividaddel desinfectanteenel
agua, expresadoenmilivoltios.
3.12. Límite permisible.-Valormáximoointervalode concentraciónde unparámetro,que nocausaefectosnocivosala
salud.
3.13. Mantenimiento.- Sonlostrabajosde conservaciónnecesariosparaprolongarlavidaútil de un bienypreservarlo
enbuenascondicionessanitarias.
3.14. Materia flotante.- Estodoaquel material que tiene menordensidadque el aguaypor elloquedaenlasuperficie.
3.15. Métodoamperométrico.- Técnicaelectrolíticadonde se aplicaunvoltaje eléctricopequeñoatravésde dos
electrodosymide el cambiode corriente resultadode reaccionesquímicas.
3.16. Procedimiento.-Documentoque contienelasinstruccionesnecesariasparallevaracabode manerareproducible
una operaciónoactividad,describiendoenformaescritaygráfica,el método,frecuencia,enlaces,participantesy
responsablesnecesariosparalarealizaciónde dichasactividades.
4. Abreviaturas
Ademásde loespecificadoenlaNormaOficial MexicanaNOM-008-SCFI-2002,SistemaGeneral de Unidadesde Medida,
el significadode lossímbolosyabreviaturasutilizadosenestaNormaesel siguiente:
4.1. DPD.- N,N-dietil-p-difenildiamina.
4.2. mg/L.- Miligramosporlitro.

4. 4.3. mL.- Mililitros.
4.4. mm.- Milímetro.
4.5. NMP.- Númeromásprobable.
4.6. ORP.- Potencial de óxido-reducción.
4.7. pH.- Potencial de hidrógeno.
4.8. ppm.- Partespormillón.
4.9. UTN.- Unidadde turbideznefelométrica.
5. Disposicionesespecíficas
Los propietariosoresponsablesde albercasdeberánobservarque lasinstalacionesde laalbercacumplanconlos
requisitossanitariossiguientes,afinde evitarriesgosala saludde losusuarios:
5.1. Se deberácontarcon procedimientosde operación,limpiezaymantenimientode lasalbercas.
5.1.1. Registrarenbitácoraslasactividadesde limpiezaymantenimientode lasalbercasylosresultadosde losanálisis
que se realicen.
5.2. Contarcon un procedimientode contingenciasparadejarlaalbercafuerade servicioencasode accidenteso
condicionespocosalubresdel aguahastalograrque se restablezcanlascondicionessanitarias.
5.3. Establecerunreglamentode medidasde seguridadyprotecciónde saludde losusuariosycolocarloa la vistadel
público.
5.4. Prohibirel ingresode mascotasala alberca.
5.5. Se debe contarcon serviciossanitariosyregaderasenel áreade albercas.
5.5.1. Serviciossanitariosconinsumoshigiénicos(papel sanitarioyjabón).
5.6. Las paredes,pisosde laalberca,así comolosaccesoriosque esténdentrode ésta,debenestarlibresde presencia
de moho y biopelículayserde acabado sanitario.
5.7. La albercadebe tenercirculaciónde aguadurante suoperacióny encaso de recirculacióndeberácontarcon equipo
de filtración.
5.8. Se debe garantizarunarenovaciónmínimadiariadel aguadel 5% encada alberca.
5.9. Una vezvaciadaslas albercasdeberánrecibirmantenimientoexhaustivomedianteel talladoyabrasióndel pisoy
paredes,asícomo la adiciónde unasoluciónde cloroa 100 ppmo 100 mg/L. Incluyendoel resanede grietasyaplicación
de pinturaepóxicaencaso de requerirlo.
5.10. El mantenimientode filtros,equiposyaccesoriosdeberárealizarse enformaperiódicasegúnrecomendacionesdel
fabricante ycontar con el registrode estaactividad.
5.11. La albercanodebe contenermásde 10 unidadesde materiaflotante pormetrocuadradodel total de su
superficie,mismaque debe serretenidaenunamallade aproximadamente 1cm de abertura.
5.12. El agua de la albercadeberáserdesinfectadapreviamenteasuuso y cumplirconlo señaladoenel cuadro1.

5. Cuadro1. Límitespermisiblesde parámetrosfisicoquímicosymicrobiológicos,métodode detecciónyfrecuenciamínima
de muestreodel aguade alberca.
Parámetro Límite Permisible Métodode
Detección
Frecuenciade Medición
pH 6.5 â 8.5 Potenciométrico
o
colorimétrico
Cada 4 horasdurante el periodode
operación,iniciandoconla
aperturade servicioal público.
Turbidez1 5 UTN o
penetraciónde
luzmayor a 2 m
con discoSecchi.
Nefelométricoo
visual
Una vez al día a mitaddel periodo
de operación.
Clororesidual
libre2
1.0 â 5.0 mg/L Colorimétrico
con reactivoDPD
1 o
amperométrico
Cada 4 horasdurante el periodode
operación,iniciandoconla
aperturade servicioal público,
para losmétodosamperométricoy
ORP incluirunamediciónconDPD
al inicio.
Cloraminas2 0.0 - 0.5 mg/L Colorimétrico
con reactivoDPD
3
Semanal
Bromo residual
libre3
2.0 â 6.0 mg/L Colorimétrico
con reactivoDPD
1 o
amperométrico
Cada 4 horasdurante el periodode
operación,iniciandoconla
aperturade servicioal público,
para losmétodosamperométricoy
ORP incluirunamediciónconDPD
al inicio.
Bromaminas3 0.0 â 0.5 mg/L Colorimétrico
con reactivoDPD
3
Semanal
Acidocianúricoo
isocianuratos
clorados2
Albercatechada
0.0 mg/L
Turbidimétrico
con reactivopara
ácidocianúricoo
colorimétrico

6. Notas:
1 No aplicapara aguas termalesque porsunaturalezaseanopacas.
2 Aplicasólopara albercasenque se utilicencompuestosde clorocomodesinfectante.
3 Aplicasólopara albercasenque se utilice bromocomodesinfectante.
4 Aplicapara albercascontemperaturade agua mayor a 30 °C.
5 El métodode pruebapara el análisisde estosmicroorganismos,se incluyeenlosapéndices.
5.13. Quedanexentasde desinfecciónyde cumplirlosparámetrosfisicoquímicosdel cuadro1,las albercasconstruidas
por encauce de una corriente superficial ode unmanantial,cuandopresentenlascaracterísticassiguientes:
5.13.1. Las que tenganrenovaciónde agua porlo menostresvecesal día durante el horariode servicio,asegurandopor
lotanto ausenciade remolino.
5.13.2. El agua de estasalbercasdeberámuestrearse porlomenostresvecesenunmes,antesdel iniciode temporada
de mayor afluenciade visitantesparacorroborarque se cumplenloslímitespermisiblesde ColiformesfecalesyAmebas
de vidalibre específicamente NaegleriasppyAcanthamoebaspp.
6. Control sanitario
6.1. La autoridadsanitaria:
6.2. Podrácorroborar encualquiermomentomediante revisiónde bitácoraque el aguaque se utilizaenlasalbercasse
encuentre dentrode loslímitespermisibles establecidos.
6.3. Bajosituacionesde contingencia,podráestablecerlosagentesbiológicos,químicosyfísicos,nocivosalasaludque
se debanevaluar;así como sufrecuenciade muestreo.
7. Muestreoy métodosde prueba
7.1. El muestreode agua para análisismicrobiológicoyfisicoquímicodeberealizarse conformealosprocedimientos
siguientes:
7.1.1. Los puntosde muestreodeberánubicarseenlaorillade laalberca,lomás alejadode lossitiosde alimentacióny
salidade agua, donde lasparedessean rugosasydonde existalamenormovilidaddel agua.
7.1.2. Para el análisisde coliformesfecales,lamuestrade aguadebe sercolectadade 30 a 45 centímetrosbajola
superficie delagua,donde laprofundidadesde aproximadamente1m, cuandola alberca tengauna profundidadmenor
a 50 cm lamuestradeberátomarse a una profundidadmedia,enbolsasorecipientesestérilescontiosulfatode sodio,el
volumenmínimode lamuestrade agua debe serde 100 mL y sertrasportadaal laboratorioenrefrigeracióna una
temperaturaentre 4 y 8 °C con un tiempomáximode preservaciónde 24 horasentre la colectade la muestray el
análisisenel laboratorio.El análisisdebe serrealizadoporunlaboratorioterceroautorizadoconforme al método
descritoenel Apéndice NormativoB.
7.1.3. Para el análisisde amebade vidalibre,el volumenmínimolamuestrade aguadebe serde 500 mL, la cual debe
sercolectadalo más alejadoposible de laentradaosalidade agua, de 10 a 15 centímetrosbajolasuperficie delagua,en
bolsaso recipientesestérilescontiosulfatode sodio,despuésde unraspadode lasparedesde laalberca,teniendo
cuidadode colectarel material que se puedadesprender.Transportarlamuestraal laboratorioenla oscuridadya
temperaturaambiente,conuntiempomáximode preservaciónde 48horas entre lacolectade muestray el análisis.El

7. análisisdebe serrealizadoporunlaboratorioterceroautorizadoconforme al métododescritoenel Apéndice Normativo
A.
7.1.4. El análisisde losparámetrosfisicoquímicosdebe serenel sitio,colectandolamuestrade aguade 5 a 30
centímetrosbajolasuperficie del agua.
8. Concordanciacon normasinternacionales
Esta Norma noes equivalenteaningunanormainternacional.
9. Procedimientode evaluaciónde la conformidad
La evaluaciónde laconformidadpodrásersolicitadaporel representante legalolapersonaque tengafacultadespara
ello,ante laautoridadcompetente olaspersonasacreditadasyaprobadasparatalesefectos.
10. Bibliografía
10.1. ImplementationGuidance forAmbientWaterQualityCriteriaforBacteria,EPA,2002.
10.2. Guidelinesforsafe recreational waterenvironments.Vol.2:Swimmingpoolsandsimilarenvironments. WHO,
2006.
10.3. Guías para laCalidaddel AguaPotable.Volumen 1.Recomendaciones.OrganizaciónPanamericanade laSalud.
OrganizaciónMundial de laSalud. 1995.
10.4. StandardMethodsfor the Examinationof Waterand Wastewater.AmericanPublicHealthAssociation. 20thEd.
WashingtonD.C.2001. EUA.
10.5. Normatécnicasanitariapara albercas.Secretaríade SaludPúblicadel Estadode Sonora,25 de abril del 2003.
11. Observanciade laNorma
La vigilanciadel cumplimientode estanormacorresponde alaSecretaríade Saludy a losGobiernosde lasEntidades
Federativasensusrespectivosámbitosde competencia.
12. Vigencia
Esta norma entraráen vigora los60 días naturalesposterioresasupublicaciónenel DiarioOficial de laFederación.
SufragioEfectivo.NoReelección.
México,D.F.,a 21 de mayode 2012.- El ComisionadoFederal paralaProteccióncontraRiesgosSanitariosyPresidente
del Comité ConsultivoNacional de Normalizaciónde RegulaciónyFomentoSanitario,Mikel Andoni ArriolaPeñalosa.-
Rúbrica.
Apéndice NormativoA
Aislamientoe identificaciónde NaegleriasppyAcanthamoebaspp
A.1. Objetivo
Aislare identificaraamebasdel géneroAcanthamoebasppyNaegleriasppenmuestrasde aguade usorecreativo.
A.2. Campode aplicación
Este métodoaplicaa muestrasde agua provenientesde albercasobalnearios.
A.3. Fundamento

8. Este métodose basa enel aislamientoprimariode amebasdel géneroAcanthamoebayNaegleriaencultivos
monoaxénicos,paraposteriormente realizarunaresiembraenlacual se realizanlaspruebasde enflagelacióny
morfologíamicroscópicalascualesnospermitirándiferenciarentre ambosgéneros,unavezdiferenciadasde otras
amebasse procede a incubarlasa temperaturade 43 ± 1 °C,si éstascontinúanconsu desarrolloaestatemperatura,se
reportala presenciadel géneropotencialmentepatógeno.
A.4. Materialesyequipo
A.4.1. Recipientesde polipropilenocontapade rosca de capacidadde 1 000 mL
A.4.2. Tubosevergreencontapade rosca de capacidad de 50 mL
A.4.3. Pipetastransferestériles
A.4.4. Jeringasdesechables
A.4.5. Asasbacteriológicasestérilesdesechables
A.4.6. Cajas de Petri
A.4.7. Varillasde vidrioenformade L
A.4.8. Tubosde vidrio13 x100 mm
A.4.9. Gradillaspara tubos13 x100 mm
A.4.10. Gradillasparatubosevergreen
A.4.11. Recipienterojoparapunzocortantes
A.4.12. Estufade incubaciónparatemperaturade 37 °C y de 43 ± 1 °C
A.4.13. Refrigerador
A.4.14. Centrifuga
A.4.15. Campanade flujolaminar
A.4.16. Microscopioinvertido
A.5. Reactivos
A.5.1. Agar NoNutritivo(agarNN)
A.5.2. Agua destiladaestéril
A.5.3. Cultivode Escherichiacoli (E.coli) desarrolladoencaldonutritivo
A.5.4. Hipocloritode Sodio
A.6. Preparacióndel mediode cultivo,agarNN/E.coli
CepaEscherichiacoli.(E.coli),tomarunaazada de E. coli entubo con caldonutritivoe incubara una temperaturade 37
°C de 18 a 24 horas. Trascurridoel tiempode incubacióntomarde 2 a 3 gotas del medioyagregarlasenel centrode una
caja de agar NN.
Realizarunadistribuciónuniformesobre el agar,para locual se utilizaunavarillade vidrioestéril enformade L,una ve z
realizadoestopermitirque el caldonutritivoconlaE. coli se seque sobre lasuperficiedel agarNN enuna atmósfera
estéril.

9. A.7. Preparaciónde lamuestra
Una vez que lamuestrase recibe enlaboratorioycumple con lascondicionesde aceptaciónde muestras,se refrigeraa
una temperaturaentre 2y 8 °C por al menos30 minutos.
A.8. Descripcióndel métodode prueba
Despuésde transcurridoel tiemposacarel recipiente del refrigerador,se agitayse toma una alícuotade
aproximadamente 50mL y centrifugarenun tuboevergreena2 500 RPMdurante 10 minutos.Decantarel
sobrenadante encampanade flujolaminar,depositarde 2a 3 gotas del sedimento,enel centrode unacaja de agar
NN/E.coli,conuna pipetaestéril transfer,agitarlevemente laplacaconmovimientosrotatoriossinretirarlade la
superficie de lamesa.Lascajas ya inoculadasse incubanauna temperaturade 37 °C durante un periodode observación
de 7 días, durante este lapsode tiempose examinandiariamenteenel microscopioinvertidoenbúsquedade
trofozoítosy quistescaracterísticosde losgénerosNaegleriayAcanthamoeba,lostrofozoítossonidentificados debidoa
que tienenunmovimientode contracciónyexpansiónensuvacuolaalimenticialacual esrefringenteala observación
microscópica.Una vezlocalizadoslostrofozoítosseñalarel sitioconunmarcador y realizarunaresiembrarecortandoun
cuadro pequeñodel medioconunaasa bacteriológicaestéril ypasarloaotra caja con mediode agar NN/E.coli,el
pequeñocuadrode agar recortadose colocaen formainvertidaconrespectoala superficiede lanuevacajade agar
NN/E.coli.
A.8.1. Pruebade enflagelación
La resiembrase examinaal microscopioinvertidoenbúsquedade trofozoítosode una probable contaminacióncon
hongosque encaso de presentarse,lacajadebe de serdescartaday solicitarnuevamuestra.Si lacajapresenta
desarrollode trofozoítos,enunacampanade flujolaminarse agregande 2 a 3 mL de agua destiladaestéril,incubándola
por un periodode 2 horasa unatemperaturade 37 °C. Una veztranscurridoel tiempode incubaciónlacaja se examina
enel microscopioinvertidoenbúsquedade trofozoítosbiflageladoscaracterísticosde Naegleria.
Los trofozoítosque seanlocalizadosmicroscópicamente,observarsuformay si presentanlocomoción.Acanthamoeba
presentatrofozoítosenformade estrellaysinmovimientosde locomociónperceptible,enel
caso de Naegleriapresentanmovimientosde locomociónrápidotantoensutrofozoítobiflageladocomoensuforma
ameboidea,esimportante identificarsólounpar de flagelosenel casode Naegleriayaque existenotrosgénerosde
amebasque tienende 3 a 4 flagelos.Unavezrealizadasestasobservacionesanotarel génerode lasamebas
identificadas.
A.8.2. Incubaciónde lamuestra
Las cajas que son identificadasconunooambos génerosde amebas(AcanthamoebaoNaegleria),procederaincubarlas
a una temperaturade 43 ± 1 °C por un periodode 24 horas, transcurridoeste tiempoexaminaral microscopioinvertido
enbúsquedade trofozoítosviablesloscualessonidentificadosmedianteel movimientode suvacuolaalimenticia.
A.9. Interpretaciónde resultados
Las cajas que presentandesarrollode trofozoítosenformade estrellaode erizosinmovimientode locomoción
perceptibleolentoconunavacuolacontráctil,con una pruebade enflagelaciónnegativaycontinúenviablesensu
desarrolloauna temperaturade 43 ± 1 °C, se reportanpositivasal géneroAcanthamoebaspp.
Las cajas que presentandesarrollode trofozoítosenformasemiovaladaconmovimientosde locomociónrápido,con
una vacuolacontráctil,conuna pruebade enflagelaciónpositivaycontinúenviablesensudesarrolloaunatemperatura
de 43 ± 1 °C se reportancomo positivasal géneroNaegleriaspp.
Las cajas que no presentandesarrollode trofozoítosenlos5días de incubacióna37 °C,se reportanausente.
A.10. Glosariode términosyabreviaturas

10. Ademásde loespecificadoenlaNormaOficial MexicanaNOM-008-SCFI-2002,SistemaGeneral de Unidadesde Medida,
el significadode lossímbolosyabreviaturasutilizadoseneste métodoesel siguiente:
A.10.1. AVL= Amebasde vidalibre
A.10.2. ANN = Agar no nutritivo
A.10.3. SNN = Sistemanerviosocentral
A.10.4. RPM= Revolucionesporminuto
A.11. Referenciabibliográfica
A.11.1. FernandoLares/IsidraT.Ayala/EduardoVerdugoE.Amibasde VidaLibre aisladasde jacuzzisypiscinasde uso
recreativoenHermosillo,Sonora.ITSON-DIEP,Julio-Diciembre,Vol.3,Número10.InstitutoTecnológicode Sonora,
México,p.39-47.
A.11.2. Tesisde amibasde vidalibre,aislamientoe identificaciónenaguade la zonaurbana de Caborca, Sonora. Briceño
VerdugoMargarita/MeloG.Joaquina,1992.
A.11.3. Five Casesof PrimaryAmebicMeningoencephalitisinMexicali,México:Studyof the Isolates. LaresFernando-
Villaycolaboradores.Journal of Clinical Microbiology,Vol.31,No.3 Mar. 1993, p. 685-688.
A.11.4. Cultivationof PathogenicandOpportunisticFree-LivingAmebas.SchusterFrederick.Clinical Microbiology
Reviews,Vol.15,No.3, July2002, p. 342-354.
Apéndice NormativoB
Determinaciónde bacteriascoliformesfecales.Métododel númeromásprobable (NMP)
B.1. Introducción
Las bacteriascoliformesdefinidascomobacilosGramnegativos,noesporulados,aerobiosoanaerobiosfacultativos,que
a 35 °C fermentanlalactosaconproducciónde gas, sonun grupo heterogéneocompuestoporvariasespecies.Existe
poca evidenciaque indiqueque estasbacteriascoliformespertenezcanaun sologénerotaxonómico. Lafaltade certeza
encuanto a su filiacióntaxonómicaylaimprecisacorrelaciónentre losmétodosrecomendadosparaladetecciónde
coliformeshanpresentadoproblemas.El primero,esque Escherichiacoli esaceptadacomobacteriacoliforme,la
especie contiene variantesque noproducengasolo hacendespuésde 48 horas,por lo que nose lesidentificapor
mediode este método.Segundo,lacapacidadde fermentarlalactosaestáfrecuentemente asociadaageneslocalizados
enplásmidos.Estosdeterminantes
extracromosomalessonfácilmentetransferidosentreotrasbacteriasGramnegativasnorelacionadasalas coliformes,
que pueden,enconsecuencia,serrecuperadasenlaetapainicial del análisis.Noobstante enlapráctica,latécnicaha
demostradosuefectividad.
El métodose basaen que lasbacteriascoliformes,fermentanlalactosaincubadasa35 ± 1 °C durante 24 a 48 horas,
resultandounaproducciónde ácidosygas el cual se manifiestaenlascampanasde fermentación.
B.2. Símbolosy abreviaturas
Ademásde loespecificadoenlaNormaOficial MexicanaNOM-008-SCFI-2002,SistemaGeneral de Unidadesde Medida,
el significadode lossímbolosyabreviaturasutilizadoseneste métodoesel siguiente:
B.2.1. cm centímetro
B.2.2. pH potencial hidrógeno
B.2.3. mm milímetro

11. B.2.4. mL mililitro
B.2.5. N normal
B.2.6. NMP númeromás probable
B.2.7. lb/plg2 libraporpulgadacuadrada
B.2.8. h horas
B.2.9. °C grado Celsius
B.2.10. % por ciento
B.2.11. ± más o menos
B.2.12. < menorque
B.2.13. µm micrómetro
B.3. Medidasde seguridadycontrol de calidad
Seguirlasindicacionesprecautoriasque se señalanenel apartadode preparaciónde mediosde cultivo.
Recomendacionesgeneralespreviasal análisisde lamuestra:
B.3.1. Homogeneizaciónde lamuestra.
Las muestrasenrecipientesconunespaciovacío (de al menos2.5 cm),puedenhomogeneizarse porinversiónrápida25
veces.Lasmuestrasque tengande 2/3 a 3/4 de lleno,deberánagitarse 25movimientosde arribahaciaabajo enunarco
de 30 cm,para aseguraruna unidadanalíticarepresentativa.
B.3.2. Condicionesde prueba.
Trabajar encondicionesasépticasenunárealimpiaydescontaminada.
Todo el material que esté encontactoconla muestradebe estarestéril.
El laboratoriodebe tenerimplementadounsistemade control de calidadpara asegurarlaconfiabilidadde los
resultados.
B.4. Equipo,mediosde cultivoymateriales
Los reactivosque a continuaciónse mencionandebensergradoanalítico.Cuandose indiqueaguadebe entenderse
como agua destiladaconpHcercano a la neutralidad.
B.4.1. Equipo
B.4.1.1. Horno para esterilizarque alcance unatemperaturamínimade 170 °C.
B.4.1.2. Incubadoraque evite variacionesmayoresa0.5 °C con termómetrocalibradoy/overificado.
B.4.1.3. Incubadoracon recirculaciónde aguaque evite variacionesmayoresa0.5 °C con termómetrocalibradoy/o
verificado.
B.4.1.4. Termómetrode máximasymínimas.
B.4.1.5. Autoclave que alcance unatemperaturamínimade 121 ± 1.0 °C, a 15 lb/plg².
B.4.1.6. Potenciómetroconunaescalamínimade 0.1 unidadesde pHa 25 °C.

12. B.4.2. Mediosde cultivo.
B.4.2.1 Caldolauril sulfatotriptosa(mediode enriquecimientoselectivo).
Ingrediente
Mediode concentración1.5
Mediode concentración
Sencilla
Triptosa
30.0 g
20.0 g
Lactosa
7.5 g
5.0 g
Fosfatodipotásico
4.125 g
2.75 g
Fosfatomonopotásico
4.125 g
2.75 g
Clorurode sodio
7.50 g
5.0 g
Lauril sulfatode sodio
0.15 g
0.1 g
Aguadestilada
1.0 L
1.0 L
Disolverloscomponentesen1L de agua,calentandosi esnecesarioocuando utilice mediode cultivo deshidratado
seguirlasinstruccionesdel fabricante.
Ajustarel pH de tal maneraque despuésde laesterilizaciónéste seade 6.8 ± 0.2 a 25 °C.

13. Distribuirenvolúmenesde 10ml el mediode concentraciónsencillaentuboscondimensionesde 16x 160 mmy de 20
ml el mediode concentración1.5 entubosde 20 x 200 mm, cada tubodebe tenercampanade fermentación(Durham)
invertida.
Esterilizarenautoclave por15 minutosa 121 ± 1.0 °C a 15 lb/plg².
Almacenarenrefrigeraciónel mediounavezpreparado.
Las campanas de fermentaciónnodebencontenerburbujasde aire unavezatemperadasdespuésde laesterilización.
Alternativamentealascampanasde Durham,adicionarpúrpurade bromocresol a unaconcentraciónde 0.01 g/L al
caldode lauril triptosa,laproducciónde ácidose observaráporel vire de este indicador.
B.4.2.2. CaldoEC
Ingrediente
Mediode concentraciónsencilla
Triptosa
20.0 g
Lactosa
5.0 g
Fosfatodipotásico
4.0 g
Fosfatomonopotásico
1.5 g
Clorurode sodio
5.0 g
Mezcla de sal de bilis
1.5 g
Aguadestilada
1.0 L
Disolverloscomponentesen1L de agua,calentandosi esnecesario.Cuandose utilice mediode cultivodeshidratado
seguirlasinstruccionesdel fabricante.
Distribuirenvolúmenesde 10mL en tuboscon dimensionesde 16 x 160 mm, cada tubodebe tenercampanade
fermentación(Durham)invertida.
Ajustarel pH de tal maneraque despuésde laesterilizaciónéste seade 6.9 ± 0.2 a 25 °C.
Esterilizarenautoclave por12 minutosa 121 ± 1.0 °C a 15 lb/plg².
Almacenarenrefrigeraciónel mediounavezpreparado.

14. B.4.3. Materiales
B.4.3.1. Pipetasbacteriológicasde 10 y 1 mL (osi esnecesariode 11 y2 mL), con tapónde algodón.Las pipetaspueden
sergraduadas envolúmenesigualesaunadécimade su volumentotal.
B.4.3.2. Frascos de vidriode 250 mL con tapónde rosca.
B.4.3.3. Tubos de cultivode 20 x 200 mm y 16 x 160 mm con taponesmetálicosode rosca.
B.4.3.4. Campanas de fermentación(tubosde Durham).
B.4.3.5. Gradillas.
B.4.3.6. Asa de platinoo nicromel de 3mm de diámetro.
Todo el material que tengacontactocon lasmuestrasbajoestudiodebe esterilizarse mediante:
Horno durante 2 horas a una temperaturade 170 a 175 °C ó 1 hora a 180 °C.
Autoclave durante 15 minutoscomomínimoa 121 ± 1.0 °C a 15 lb/plg².
El material de vidriopuede sustituirse pormaterial desechableque cumplaconlasespecificaciones.Nodebeutilizarse
material de vidriodañadoporesterilizacionesrepetidasyéste debe serquímicamente inerte.
B.5. Procedimiento
B.5.1. Coliformestotales,presuntivo
Inoculación.Agitarlamuestraytransferirvolúmenesde 10mL a cada uno de los5 tubosde la primeraserie con20 mL
de caldo lauril sulfatotriptosade concentración1.5y 1.0 mL y 0.1 mL de muestraa cada unode los tubosde la segunda
y terceraserie de 5 tubos respectivamentecon10 ml de caldolauril sulfatotriptosa.
Incubación.Incubarlostubosa 35 °C, durante 24 ± 2 h y observarsi hayformaciónde gas, encaso
contrario,incubarpor 48 ± 2 h.
B.5.2. Coliformesfecales,confirmativo.
De cada tubo que muestre hidrólisisdel mediooformaciónde gas,agitary tomar una azada,procediendoasembraren
un númeroigual de tubosconmedioEC. Incubarenincubadoracon recirculaciónde aguaa 44.5 ± 0.2 °C por 24 ± 2 h,
observandoque el tiempoentrelainoculaciónylacolocaciónde lostubosenel bañono excedade 30 minutosyque el
agua de incubacióncubrapor enteroal mediode cultivoenlostubos.
B.6. Expresiónde losresultados
Considerarlostubosdel procedimientoconfirmativoenque se observe formaciónde gasdespuésdel periodode
incubaciónrequeridoybuscarel NMP enla Tabla.Númeromás probable (NMP) enseriesde cinco(5) tubos.
B.7. Consideracionesgenerales.
Cuandosólouna diluciónmuestratrestubospositivos,elegiréstaylasdilucionesmayoresposteriores.
Cuandomás de una diluciónmuestratrestubospositivosylaúltimadamenosde tres,elegirestaúltimaylasdos
dilucionesanterioresmásbajas.
Cuandoenningunadiluciónhaytrestubospositivosyéstosse encuentranenmás de tresdiluciones,seleccionarlasdos
dilucionesmayorespositivasylasiguiente.
Cuandolostubospositivossólose encuentranenlamuestrasindiluir(10mL) y enla primeradilución(1mL),
seleccionarlastresprimerasdilucionesparael cálculodel númeromásprobable.

15. En cada caso se obtiene unnúmerode trescifras,locual es representadoenlaTabla.Númeromásprobable (NMP) en
seriesde cinco(5) tubos.En la columnaque indicael númerode tubospositivosse buscael índice del NMP.
La técnicade NMP puede admitirgrancantidadde variaciones.Losresultadosobtenidosconestatécnicadebenser
utilizadosconprecaución.
La precisióndel analistadeberáestardentrode un5% y entre analistas10%.
B.8. Informe de prueba
NMP COLIFORMES FECALES/100 mL.
B.9. Bibliografía
B.9.1. Edberg.S.C.,M.J. Allen,D.B.Smith&the National Collaborative Study,1988.National fieldevaluationof adefined
substrate methodforthe simultaneousenumerationof total coliformsandEscherichiacoli fromdrinking water:
Comparisonwiththe standardmultiple tube fermentationmethod.Appl.Environ.Microbiol.54:1595.
B.9.2. Edberg,S.C.& D.B. Smith,1989. Absence of associationbetweentotal heterotrophicandtotal coliformbacteria
froma publicwatersupply. Appl.Environ.Microbiol55:380.