Este documento presenta el procedimiento para realizar un recuento manual de leucocitos. Describe los materiales necesarios como una pipeta diluidora de Thoma, una cámara de recuento y un microscopio óptico. Explica que la muestra de sangre debe diluirse en un líquido que contiene ácido acético, violeta de genciana y agua, y que luego se cuentan los leucocitos presentes en cuatro cuadrados de la cámara para calcular el recuento total de leucocitos por milímetro cúbico

1. MÓDULO 5: FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE ANÁLISIS HEMATOLÓGICOS
ACTIVIDAD 6.3L: RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS
OBJETIVO
• Realizar el recuento de leucocitos (WBC) presentes en un determinado volumen de sangre (generalmente
1 mm3)
• Cumplir las normas de seguridad e higiene
• Realizar los cálculos adecuados y validar los resultados
MATERIAL
• Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos blancos
• Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora
• Una cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado
• Un cubre
APARATAJE
Microscopio óptico
REACTIVOS
• Líquido de dilución. El más utilizado es el líquido de Turck que se compone de las siguientes sustancias:
o 2 ml de ácido acético glacial
o 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
o 100 ml de agua destilada
MUESTRA
• Sangre venosa procedente de una punción venosa y anticoagulada con EDTA.
PRECAUCIONES
• Si el líquido diluyente contiene precipitados, antes de usarlo debe ser filtrado.
• Para evitar contar repetidamente los mismos leucocitos, sólo se cuentan los que están contenidos dentro
del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas de demarcación superior a derecha.
• A la hora de observar los cuadrados, se sigue un orden en “zig-zag”.
PROCEDIMIENTO
1. Situar un cubre sobre el retículo de la cámara.
2. Aspirar la sangre hasta la señal de 0’5 (o hasta el 1, según el caso)
3. En el caso de que se sobrepase algo del enrase, se hace descender la columna de sangre tocando la
punta de la pipeta con un algodón.
4. Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre.
5. Aspirar líquido diluyente hasta la señal 11.
6. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el contenido de la ampolla. Para ello se
sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita suavemente en sentido
horizontal durante 2 o 3 minutos.
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2. 7. Desechar las 2 primeras gotas emitidas por la pipeta.
8. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Esto se realiza ubicándola en uno de los bordes no
adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad, en el espacio existente entre ambas
estructuras. Durante esta operación hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la sangre diluida
por fuera de los bordes del cubre.
9. Para ello se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde apropiado,
se disminuye algo de presión ejercida por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se retira esta
justo antes de que se llene completamente el espacio comprendido entre el cubre y la cámara.
10. Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante unos minutos, para que las células
presentes en ella puedan sedimentarse:
11. Enfocar el retículo con el objetivo de 40x y con el condensador a baja altura. Si los leucocitos se
distinguen fácilmente se pueden contar con el objetivo de 10x.
12. Contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas.
LECTURA DE RESULTADOS:
Como se cuentan los leucocitos presentes en 4 cuadrados grandes, hay que dividir por 4 la cifra obtenida en el
recuento, para calcular el número de leucocitos que hay en un cuadrado grande.
Como la sangre previamente al recuento propiamente dicho se diluye, hay que multiplicar el resultado anterior por
10 si se ha partido de 1 o por 20 si se ha partido de 0’5.
En definitiva:
WBC = L/4 x 10 x D
L: nº de leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes
D: factor de dilución: 10 (si partimos de 1) o 20 (si partimos de 0’5)
El valor final sería nº de leucocitos /mm3
INTERPRETACIÓN:
La disminución de WBC se produce en leucopenias y su aumento se da en las leucocitosis. Se considera normal un
WBC comprendido entre 5000 y 11000 leucocitos / mm 3
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3. FICHA PRÁCTICA
MODULO PROFESIONAL: MOD 5
CICLO FORMATIVO: LA3 CURSO: SEGUNDO
PRACTICA DE LABORATORIO: “RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS”
Objetivo de la práctica:
Muestra:
Preparación de la muestra:
Material: Aparataje:
Reactivos:
Etiqueta de los reactivos Dibujo:
Frases R y Frases S
Normas de seguridad e higiene:
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4. Desarrollo o procedimiento:
Valores normales:
Resultado e interpretación
Cuestiones:
1. ¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC?
2. ¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución?
3. ¿Con qué objetivo se pueden contar los leucocitos?
4. Si la sangre se diluye 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el WBC obtenido?
5. Indica 2 patologías en las que se produzcan leucocitosis y otras 2 en las que se produzcan leucopenias
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