El documento describe la aplicación de las pruebas de ADN en la justicia civil y criminal. Explica que las pruebas de ADN pueden identificar a individuos con un nivel de certeza del 99,99% y resalta hitos históricos en el uso de estas pruebas desde 1985. También describe los diferentes tipos de ADN (nuclear, mitocondrial y cromosoma Y), sus características y aplicaciones forenses.

1. Analisis de ADN. Aplicacion de la Biologia Molecular en la Justicia Civil y Criminal Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica . Directora del Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense CEBYG.Posadas . Misiones LAC _Corrientes

2. El Paradigma

7. Aplicación de los Estudios de ADN en la Justicia Civil y penal. Dra Adriana Silvia Gotti Bioquimica Especialista en genetica Forense

10. Núcleo Citoplasma Membrana Plasmática La célula

11. El núcleo Contiene toda la información genética y regula su expresión

14. El “ADN” como almacén de información La doble Hélice de ADN

15. Los cromosomas Pares de bases DNA cromosoma Celula Nucleo Histonas

22. Identificación visual

26. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Nuclear - 2 copias por célula - Heredado 50 % de cada progenitor - Único para cada individuo Tipos de ADN en genética forense Mitocondrial - ~1000 copias/célula - Herencia materna - No es único para cada individuo

27. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Tipos de ADN según su TRANSMICIÓN 1. Nuclear: 50% padre + 50% madre - altísimo poder discriminación - recombinación 2. Mitocondrial: 100% madre poder discriminación limitado 3. Cromosoma “Y”: 100% padre poder discriminación limitado

28. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA POLIMORFISMOS De secuencia: Individuo 1: ……GTACGGTACGT…… Individuo 2: ……GTACCGTACGT…… Individuo 1: ……GTACGGTACGT…… Individuo 2: ……GTACGTACGT…… De longitud: Individuo 1: ……(AATG) (AATG) (AATG)…… 3 repeticiones Individuo 2: ……(AATG) (AATG)…… 2 repeticiones

29. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADN nuclear 1. Unidades: 3000 millones x 2 23 pares de cromosomas 2. Herencia mixta: padre y madre 3. Dos copias por célula (núcleo)

30. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA

31. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Longitud de las unidades de repetición STRs Di nucleótidos: CA Tri nucleótidos: AAT Tetra nucleótidos: AGAT Penta nucleótidos: AATGT

32. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Marcadores forenses Altamente polimórficas Elevado grado de heterocigosidad genética

33. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de Herencia del ADN del cromosoma “Y” (representa el 2% del genoma humano)

34. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS STRs DEL CROMOSOMA “Y” - Investigación Biológica de la paternidad - Criminalística - Estudios de Identificación Genética - Estudios sobre el origen y evolución de las poblaciones

35. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADN mitocondrial 1. Unidades: 16.569 pb 2. Herencia materna 3. de 100 a 10.000 copias por célula 10 a 100 mitocondrias por célula 10 a 100 copias por mitocondria

36. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Vía de herencia del ADN mt

37. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ADNmt - Técnicas de PCR y secuenciación automática - Altamente polimórfico - Alto número de copias - Herencia estrictamente materna - Se conoce con exactitud la secuencia de todos sus nucleótidos - Tasa de evolución entre 5 y 10 veces mayor que un gen nuclear

38. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA ORGANIZACIÓN GENÓMICA Sólo el 10% es ADN no codificante

39. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA MUTACIONES ADNmt acumula un numero de mutaciones superior al ADN genómico Normal Sustitución Deleción Inserción

40. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA Sustituciones Transiciones Py-Py: C>T T>C Pu-Pu: A>G G>A Transversiones C>A T>G G>C A>T A>C G>T C>G T>A

41. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA: coexistencia, debida a mutaciones, de dos o más poblaciones de ADNmt en un individuo HETEROPLASMIA DE SECUENCIA heteroplasmia intercelular heteroplasmia intramitocondrial heteroplasmia intracelular HOMOPLASMIA: misma secuencia en todas las moléculas de ADNmt

42. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA HETEROPLASMIA DE LONGITUD

43. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA EXTRACCIÓN DEL ADN CUANTIFICACIÓN AMPLIFICACIÓN POR PCR PURIFICACIÓN PCR SECUENCIACIÓN PURIFICACIÓN SECUENCIACIÓN ANÁLISIS DE DATOS ELECTROFORESIS

44. DRA. GOTTI ADRIANA SILVIA USO DEL ADNmt EN GENÉTICA FORENSE 1. Identificación de restos antiguos 2. Identificación de restos cadavéricos (desastres en masa) 3. Identificación de vestigios mínimos - pelos sin bulbo - manchas biológicas mínimas y parcialmente degradadas 4. Estudios de relaciones familiares vía materna

45. Polimorfismos de Longitud Alelo 1 Alelo 2 Sitio de Restricción Sitio de Restricción Unidad de Repetición

46. Tipos de Polimorfismos de Longitud. VNTR Minisatélites Locus Múltiple Locus Específico Microsatélites Locus Específico PCR/PAGE o automatización Southern Southern PCR /Agarosa

51. Análisis automatizado de STRs

55. Dra .Adriana Silvia Gotti Centro de Estudios Biomoleculares y Genetica Forense. Posadas . Misiones Argentina Amplificación de DNA in vitro : PCR (Polymerase Chain Reaction)

64. En la PCR hay una amplificación exponencial

74. Utilidad del PCR

80. Diagrama de la extracción del DNA genómico (previamente realizado)

84. Método dideoxi de Sanger

85. Método dideoxi de Sanger (2)

86. Método dideoxi de Sanger (3)

87. Método secuenciación automática

88. Electroferograma de la secuenciación automática

89. Geles de secuencia Secuencia automática Secuencia Manual

91. TOMA Y CONSERVACION DE MUESTRAS PARA ANALISIS DE ADN.

93. Lugar del Hecho = Quirófano !

95. Otras evidencias

97. Prendas SI NO

98. Hisopados

99. IMPORTANTE: En el análisis previo de las evidencias se debe considerar la disponibilidad de muestras para análisis de ADN.

100. MATERIAL CADAVERICO Los restos humanos como evidencia para el análisis de ADN

102. Cadáveres reducidos Tiempo de muerte aproximado: 1,5 años

103. Cadáveres Quemados

104. Cadáveres Saponificados Tiempo de muerte aprox 8 años Tiempo de muerte aprox 1,5 años

105. Cadáveres en los Primeros Estadíos de Descomposición

109. Huesos quemados con más de 10 Años Recibidos En proceso

110. Material de elección en casos de cuerpos muy descompuestos o reducidos

111. Identificación Molecular de Restos Fragmentados

113. En otros puede ser de gran utilidad.

114. Interpretación de resultados

115. Violación E S

116. Violación E S V

117. E S V Violación

118. E A S V E B Violación

119. E A S V E B Violación

120. E A S V E B Violación

121. Análisis de una Violación Evidencia Frac. femenina Evidencia Frac. masculina Víctima Sospechoso 1 Sospechoso 2 Match Match Match

122. Algunos casos de identificación por ADN

123. Análisis de ADN en restos humanos provenientes de desastres en masa

124. 1992

126. Toma de muestras del atentado

128. 1993

130. Los Y-STRs dieron la primera pista.

132. 1994

133. Atentado a la AMIA Vista general

134. Atentado a la AMIA. Muestras

135. Atentado a la AMIA. Resultados

136. Atentado a la AMIA. Resultados

137. Atentado a la AMIA. Resultados

138. Atentado a la AMIA. Resultados

139. 1999

140. Accidente Aéreo de LAPA

141. 1999 ACCIDENTE AEREO

142. 1999 ACCIDENTE AEREO

143. CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti Dra. Adriana Silvia Gotti 1. Teoría genovesa clásica: -hermanos del mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: -hermanos del mismo padre y diferente madre 3. Teoría mallorquinista -hermanos de la misma madre y diferente padre CRISTÓBAL COLÓN ? ?

144. CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti

145. Carlos de Evreux, Príncipe de Viana Dra. Adriana Silvia Gotti

146. CRISTÓBAL COLÓN Dra. Adriana Silvia Gotti

147. Dra. Adriana Silvia Gotti

148. 1506 1509 Dra. Adriana Silvia Gotti

149. Cuba República Dominicana Dra. Adriana Silvia Gotti

150. Caribe 1544 Dra. Adriana Silvia Gotti

151. Dra. Adriana Silvia Gotti

152. Dra. Adriana Silvia Gotti

153. Caribe 1544 1795 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti

154. Sevilla 1898 Dra. Adriana Silvia Gotti

155. Dra. Adriana Silvia Gotti

156. Dra. Adriana Silvia Gotti

157. 1. Teoría genovesa clásica: -mismo padre y madre 2. Teoría genovesa renovada: - mismo padre y diferente madre 3. Teoría mallorquinista - misma madre y diferente padre Dra. Adriana Silvia Gotti CRISTÓBAL COLÓN

158. Dra. Adriana Silvia Gotti

159. Dra. Adriana Silvia Gotti

160. Dra. Adriana Silvia Gotti

161. Dra. Adriana Silvia Gotti

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163. Dra. Adriana Silvia Gotti

164. Dra. Adriana Silvia Gotti