El estudio investigó el desarrollo de embriones de ratón a partir de oocitos enucleados inyectados con núcleos de células somáticas como células del cumulus, neuronas y células de Sertoli. Se encontró que los núcleos de células del cumulus podían dar lugar al desarrollo de ratones vivos, demostrando que los mamíferos pueden ser clonados a partir de células somáticas adultas. Sin embargo, los núcleos de neuronas y células de Sertoli no pudieron producir

1. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei Grupo 8: Fernanda Marfil Paula Pizzino Carina Quiñones T. Wakayama, A. C. F. Perry, M. Zuccotti, K. R. Johnsonk & R. Yanagimachi

3. Objetivo Investigar cuales son los factores que gobiernan el desarrollo embrionario cuando se transfieren núcleos de células somáticas como células de Sertoli, neuronas o células del cumulus a oocitos enucleados

5. Metodología Madres adoptivas albinas se reproducen con machos vasectomizados Medio con Sr 2+ + citocalasina B neuronas Sertoli cumulus

6. 3 hs 5 hs 1 h 10 min inyección transformación activación con Sr 2+ blastocistos Formación de pseudo-pronúcleos Núcleo ¢ somáticas (cumulus)

7. Tiempo entre inyección y activación afecta a la tasa de desarrollo del oocito

9. Desarrollo de embriones a partir de oocitos con núcleo de célula de Sertoli Embrión normal en periodo de 12 somitos Úteros a los 8.5 d.p.c (días post coito)

10. Para observar el potencial de los núcleos de cumulus en el desarrollo de embriones in vivo Experimentos Serie A Embriones (núcleo dador B6D2F1) Serie B Embriones (núcleo dador B6D2F1) Serie C Embriones (núcleo dador B6C3F1  agouti) Serie D Experimento adicional

12. Cumulina con sus crías (padre: CD-1 albino) B6C3F1 donante de núcleo de cumulus (agouti) B6D2F1 donante del oocito (negro) Madre adoptiva (albina) Camada resultante Cumulina (3 oct 1997)

13. Serie D ¿Los clones podrían ser clonados mas eficientemente en rondas sucesivas de re-clonado? cumulus de B6C3F1 (agouti) Clones C núcleo por inyección Oocitos enucleados B6D2F1 (negro)

14. Los clones a partir de clones NO son clonados mas eficientemente

16. DNA typing Fue utilizado para demostrar que la descendencia clonada en la serie C son isogénicas con los tres núcleos de células del cumulus (B6C3F1) y no contienen DNA derivado del oocito donante (B6D2F1) o de la madre adoptiva (CD-1)

17. Banda extra: heteroduplex Migración anómala Southern blot D1Mit46 D2Mit102 μ sat 6 embriones serie C (5 vivos, 1 muerto) 3 oocitos hembra hospedadora 3 oocitos hembra receptora 3 células del cumulus

19. El experimento provee un modelo sensible p evaluar los mecanismos moleculares que regulan la reprogramación del genoma de células somáticas, imprinting genómico, activación del genoma embrionario y diferenciación celular. GRACIAS